目的:通过分析移植相关人群和猕猴中天然抗猪抗体的水平及其对猪-猕猴异种肾移植效果的影响,探讨天然抗猪抗体对实施猪-人异种肾移植的临床意义。为异种移植临床研究提供实验依据。材料与方法:(1)FCM检测移植相关人群人群天然抗猪抗体:在海南医学院第二附属医院肾移植科收集移植相关人群血液标本,包括健康志愿者(n=20)、ESRD患者(n=20)、DBD(n=20)和Allo-TCMR肾移植受者(n=20)。分离血清后通过流式细胞术检测血清与成都中科奥格公司WT、GTKO、GTKO/β4Gal NT2KO、GTKO/CMAHKO和TKO/h CD55基因工程猪PBMC和Rplant probioticsBC的CDC和Ig M/Ig G抗体结合,测定其抗体水平;(2)FCM检测猕猴天然抗猪抗体:收集20例雄性健康猕猴血清,用流式细胞术分别检测其与成都中科奥格公司培育的WT、GTKO/h CD55、GTKO/β4Gal NT2KO和GTKO/β4Gal NT2KO/h CD55/h TM基因工程猪的PBMC的Ig G/Ig M抗体结合水平和CDC,测定其抗体水平;(3)猪-猴异种肾脏移植体内研究天然抗猪抗体对其效果的影响:选择GTKO/β4Gal NT2KO/h CD55/h TM基因猪为供体,筛选2只猕猴受者。术前给予anti-CD38单克隆抗体降低猕猴的天然抗猪抗体水平并验证其变化水平。免疫诱导后行猪-猕猴肾脏移植手术,同时切除猕猴的双侧原肾。术后通过移植术后常规实验室检查和免疫学检测等评估移植肾功能和受体免疫状态。最后通过HE染色等病理学检测明确导致移植肾失功的病理损伤类型。整理上述结果对比课题组前期研究分析降低天然抗猪抗体对异种肾脏移植效果的影响。结果:(1)移植相关人群天然抗猪抗体水平:健康志愿者血清与WT、GTKO和GTKO/β4Gal NT2KO猪PBMC的Ig M结合水平(r GM)分别是168.95(121.12,267.68)、60.30(40.10,224.99)、93.44(40.44,204.94)和Ig G结合水平(r GM)分别是45.35(24.45,108.03)、15.72(8.71,44.89)、23.82(5.84,67.91),在四组人群中均为最高,并与其他组均有明显差异(P<0.05)。而健康志愿者对上述3种基因猪PBMC的CDC水平分别为95.68%(90.56%,96.67%)、48.18%(15.33%,74.14%)、14.36%(9.32%,45.07%)。然而四组人群与GTKO/CMAHKO和TKO/h CD55的抗体结合水平和CDC均较低,且人群之间无明显差异(P>0.05)。4组人群受者血清对TKO/h CD55猪PBMC的CDC水平(计算值,负值意义为无细胞杀伤)分别是健康志愿者4.93%(2.42%,7.06%)、ESRD患者5.37%(0%,7.92%)、DBD组0.82%(-3.07%,4.46%)和Allo-TCMR受者1.33%(0.53%,3.69%)。不同人群的天然抗猪抗体均以Ig M为主(P<0.05)。不同组与基因猪RBC抗体结合水平差异与PBMC基本一致;(2)猕猴天然抗猪抗体水平:猕猴血清中针对WT基因型猪的Ig G结合水平102.04(31.73,195.85)和Ig M结合水平52.65(31.96,148.96)明显高于其他基因猪(P<0.05)。而不同猕猴血清与2只GTKO/β4Gal NT2KO/h CD55/h TM基因猪PBMC的CDC水平分别是3.01%(1.88%,5.98%)、3.61%(2.76%,8.94%),明显低于其他类型工程猪(P<0.05);(3)猪-猴异种肾脏移selleckchem SAHA植效果:术前受者猕猴针对不同基因猪的天然抗猪抗体Ig G均下降,CDC水平也有下降趋势,但Ig M无明显下降趋势。2例猪-猕猴肾脏移植手术均成功,术中肾脏大体观未见明显异常,未发生超急性排斥反应。术后分别存活17和29天。术后早期移植肾功能、电解质代谢等基本正常,但均在血肌酐升高前出现血小板先升高后明显下降的趋势。术后发现循环抗体升高后给予anti-CD38单克隆抗体,未见新生抗猪抗体水平降低。移植肾脏病理学检测肾脏和输尿管组织均有不同程度的C4d、C5b-9和Ig G沉积。实验组2只猕猴均发生ABMR导致移植肾失功而终止实验。结论:(1)健康志愿者、移植相关人群和LXH254纯度NHP均具有天然抗猪抗体;但不具有基因工程猪特异性;(2)在实施的猪-猕猴的异种肾移植中,抗猪抗体介导的排斥反应是影响移植物长期存活的主要因素;(3)Anti-CD38单克隆抗体能够降低天然抗猪抗体和CDC水平,但并未有效降低猪-猴异种肾移植早期排斥反应损伤,其原因仍有待进一步研究。