目的 从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）受体结合结构域（receptor binding domain, RBD）的特异性单克隆B细胞，并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法 以生物素化的RBD为分子探针，利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）进行单克隆B细胞分选，将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后，采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增，扩增产物分别克隆至对应的表达载体，随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达，利用Protein Fluorescent bioassayA柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株（WT）假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度（IC_(50)）<0.1μg/mL的抗体，进一步在原始株（WT）、Beta株（B.1.351）和Delta株（B.1.617.2）活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒中进行中和能力及宽度测试。结果 从2名康复者体内共获得21个RBD特异性单克隆B细胞，从中分离出13对抗体轻/重链，成功表达出9个抗体，P1-A1、P1-B6、P1-B9对原始株（WT）假病毒IC_(50)值均低于0.1μg/mL，其中P1-B6可以有效中和原始株（WT）、Beta株（B.1.351）和Delta(B.1.617.2)活病毒，IC_(50)值均达到了0.01μg/mL。P1-B9可以有效中和原始株（WT）、Beta株（B.1.351）、Delta(B.1.617.2)及Gamma株（Bemcentinib MWP.1）活病毒，IC_(FG-459250)值分别为0.42、0.63、0.28、2.50μg/mL。此外，P1-B6对BA.5、BF.7假病毒具有较好的中和效果，IC_(50)值分别为0.06μg/mL和0.09μg/mL。结论 SARS-CoV-2原始株感染可以诱导出具有广谱中和活性的抗体，且这些广谱中和抗体的产生不需要过高的体细胞高频突变率，获得的抗体可以作为诊断和预防新冠病毒感染的候选。