目AMG510使用方法的:探讨内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)是否通过介导ATF6、IRE1、PERK/CHOP/Caspase-12通路的激活参与糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的发病及中药小檗碱(Berberine,BBR)如何调控内质网应激反应参与糖尿病肾病的保护机制。方法:1.大鼠建模、分组及干预:高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN大鼠模型。实验共分为3组,正常组(NC组)、模型组(DN组)和小檗碱干预组(DN+BBR组)(n=6)。DN+BBR组在DN模型基础上予BBR200mg/(kg·d~(-1))灌胃治疗,NC组及DN组则予等计量羧甲基纤维素钠灌胃处理。2.大鼠肾脏组织结构与功能损害情况及ERS相关蛋白表达情况:给药6周后,检测并记录大鼠体重、肾指数(KI=肾重/体重)、空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及24h尿蛋白(24h Upro)水平。采用HE、PAS、MASSON染色观察肾脏组织病理改变。透射电镜观察肾小球及肾间质变化。免疫组织化学染色观察肾组织ERS标志物蛋白激酶R样内质网激酶(Protein kinase RNA–like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、肌醇需求酶1(Inositol-requiring enzyme 1,IRE1)、转录激活因子6(Activating transcription factor 6,ATF6)、CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)及凋亡蛋白半胱天冬酶3(Caspase-3)的表达。蛋白印迹检测ATF6及凋亡蛋白Caspase-12表达情况。结果:1.DN组较NC组Scr、BUN、FBG及24h UprCHIR-99021临床试验o均显著上升,肾功能损伤严重;经小檗碱干预后,DN+BBR组较DN组肾功能损伤情况改善,各组大鼠Scr、BUN、FBG及24h Upro差异具有统计学意义(P值均<0.01)。2.HE、PAS及Masson染色结果显示DN组较NC组肾小球形态不规则,体积增大,肾小球囊腔缩窄,弥漫性系膜基质增多,肾小管水肿,肾间质紫红色糖原沉积物增多,蓝染胶原纤维堆积,炎性细胞浸润;经小檗碱干预后,DN+BBR组肾小球状况medical biotechnology明显改善,肾小管水肿减轻,糖原沉积减少,胶原纤维堆积相对较少。3.透射电镜结果显示DN组较NC组大鼠足细胞排列不规则,大量足突融合、断裂,基底膜不均匀增厚;经小檗碱干预后,DN+BBR组足细胞排列较不规则,可见部分足突融合、断裂,基底膜略增厚。4.免疫组化显示DN组PERK、IRE1、ATF6、CHOP及Caspase-3蛋白表达均显著升高;经小檗碱干预后,DN+BBR组大鼠各蛋白表达情况均显著下降,蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。5.蛋白印迹显示DN组内质网应激相关蛋白ATF6及凋亡相关蛋白Caspase-12表达增高;经小檗碱干预后,DN+BBR组大鼠蛋白表达情况均下降,蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:内质网应激通过介导ATF6、IRE1、PERK/CHOP/Caspase-12通路的激活参与糖尿病肾病的发病。小檗碱能显著改善DN大鼠肾脏功能,减轻DN大鼠肾脏结构损伤,其机制可能通过抑制DN大鼠过度激活的内质网应激反应,减轻肾脏细胞的凋亡,来达到延缓DN疾病进展的作用。