半抗原直接包被的磺胺二甲氧嘧啶酶联免疫吸附分析法的建立

作为食品中抗生素残留的主要类型之一,传统的磺胺类抗生素(Sulfonamides,SAs)酶联免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)常以多克隆抗体和完全抗原包被作为检测基础,可能会出现检测灵敏度低、标准化难等问题。为建立更优的SAs ELISA检测方法,以磺胺二甲氧嘧啶(Sulfadimethoxine,SDM)为研究对象,并将其作为半抗原与大分子蛋白质偶联制备人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗SDM的单克隆抗体(Monoclonal antibody,MAb)。并采用酸性高锰酸钾羧化酶标板,将SDM直接包被在酶标板上后对ELISA反应体系条件进行优化,构建一种基于MAb的半抗原直接包被的SDM间接竞争ELISA(Indirect competitive ELISA,icELISA)检测方法。所制备的MAb特异性良好,交叉反应率低。所构建的icELISA检测法检测条件为:半抗原包被浓度为0.5μg/mL,抗体稀释比为256000,竞Biomechanics Level of evidence争反应体系温度为25℃,p H7.4,以1%BSA溶液作为封闭剂。该方法最低检测限IC_(10)为0.274 ng/mL,半数抑制率IC_(50)为8.39 ng/mL,水和牛乳中加标回收率分别为97.28%~101.2%、98.34%~101.28%。与同等条件下建立的人工抗原包被的icELISA检测方法(IC_(10):0.579 ngCanagliflozin溶解度/mL,IC_(50):22.5 ng/mL,水和牛乳中加标回收率分别为92.08%~1selleck HPLC05.22%、94.62%~103.76%)相比检测灵敏度有明显提高,并可用于实际样品中SDM含量的检测,具有良好的应用前景。