抑瘤汤通过IFITM1/Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤恶性增殖的机制研究

目的:1.通过体外实验,抑瘤汤含药血清对骨肉瘤U2-OS细胞的干预,探究抑瘤汤对骨肉瘤细胞的生长影响。2.通过构建骨肉瘤裸鼠模型,探讨抑瘤汤对裸鼠体重、瘤体体积、瘤重、抑瘤率的影响,并检测瘤体中IFITM1、Wnt、β-catenin的蛋白、m RNA的表达,以探究抑瘤汤、IFITM1、Wnt/β-catenins三者在骨肉瘤治疗上可能存在的关系。方法:1.体外实验:用抑瘤汤干预U2-OS细胞,观察U2-OS细胞被干预后增殖、侵袭迁移,凋亡的变化。2.体内实验:取SPF裸鼠30只,查随机数字表,随机分配到购买Captisol3组,每组10只。分为抑瘤汤组,顺铂组和生理盐水组。每只裸鼠予左后肢胫骨部位注射浓度为1×10~7个/ml的U2-OS细胞悬液0.1ml,用于构建骨肉瘤裸鼠移植模型。造模成功后,瘤体长至0.5cm x 0.5cm后开始给药。每间隔5天就记录一次各组裸鼠皮下瘤体的体积、裸鼠体重变化。在25天后,处死裸鼠,称量瘤体重量,计算各个组的抑瘤率。取材后的样本用于Western Blot、q RT-PCR试验,检测相关m RNA和蛋白表达。结果:1.抑瘤汤对U2-OS细胞影响:抑瘤汤含药血清可抑制骨Semi-selective medium肉瘤U2-OS细胞增殖、侵袭迁移,促进凋亡。2.1各组裸鼠骨肉瘤移植模型给药后,各组裸鼠瘤体体积、重量、抑瘤率的变化:与生理盐水组相比,抑瘤汤组和顺铂组瘤体体积明显缩小。抑瘤汤组、顺铂组的抑瘤率分别为:32%、55%,与生理盐水组相比抑瘤汤组、顺铂组的瘤重均降低。生理盐水组裸鼠体重小于抑瘤汤组、顺铂组。2.2各组裸鼠骨肉瘤移植模型肿瘤组织中IFITM1/Wnt/β-catenin的m RMA的表达:与NS组与顺铂组比较,抑瘤汤组的IFITM1 m RNA表达降低,NS组与顺铂组两两比较差异无统计学意义;与NS组比较,抑瘤汤组与顺铂组Wnt m RMA表达升高;selleckchem Regorafenib与NS组比较,抑瘤汤组与顺铂组β-catenin m RMA表达升高。2.3各组裸鼠骨肉瘤移植模型肿瘤组织中IFITM1/Wnt/β-catenin的蛋白的表达:与NS组与顺铂组比较,抑瘤汤组的IFITM1蛋白表达降低(P<0.05),NS组与顺铂组两两比较差异无统计学意义;与NS组比较,抑瘤汤组与顺铂组Wnt蛋白表达升高;与NS组比较,抑瘤汤组与顺铂组β-catenin蛋白表达升高。结论:1.通过体内外实验发现,抑瘤汤可抑制骨肉瘤U2-OS生长,改善骨肉瘤裸鼠生存质量。2.抑瘤汤可能是通过抑制IFITM1表达,引起Wnt/β-catenin的高表来抑制骨肉瘤的生长。