CGA-N9(NH_2-RILSILRHQ)是实验室发现的一种抗真菌肽,是一种念珠菌选择性抗菌肽,能够优先杀死念珠菌属,但抗白色念珠菌活性不高。为了增强抗菌肽CGA-N9的抗白色念珠菌活性,提高其生物利用度,本研究设计合成了不同碳链脂肪酸偶联CGA-N9的类似物,并利用高分辨质谱分析(HRMS)、核磁共振法、圆二色谱法对CGA-N9及其脂肪酸修饰类似物结构进行表征;测定了抗菌肽CGA-N9及其脂肪酸修饰类似物的抑菌活性、稳定性、抗生物膜活性、溶血活性及对人肝细胞毒性。对筛选出的最佳抗菌肽进行更深入的体外生物活性测定和体内炎症抑制效果研究,得到如下结果:(1)抗菌肽CGA-N9及其脂肪酸修饰类似物的结构表征:不同碳链长度脂肪酸修饰后,得到CGA-N9脂肪酸类似物CGA-N9-C2、CGA-N9-C4、CGA-N9-C6、CGA-N9-C8和CGA-N9-C10,经圆二色谱分析可知,抗菌肽CGA-N9、CGA-N9-C2、CGA-N9-C4和CGA-N9-C6二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成;而CGA-N9-C8二级结构则以α-螺旋为主。以上结果表明脂肪酸修饰抗菌肽CGA-N9后,α-螺旋结构含量升高,CGA-N9类似物水溶性变小,以至于CGA-N9-C10不溶于水。(2)抗菌肽CGA-N9及其脂肪酸修饰类似物的活性研究结果表明:随着脂肪链的延长,抗白色念珠菌活性提高,活性最高的CGA-N9-C8 MIC(7.8±0.03μg/mL)比CGA-N9(246.4±2.3μg/mL)提高31.6倍。抗菌肽CGA-N9及其脂肪酸修饰类似物均受血清影响较小,HPLC检测,血浆稳定性维持在72.6%-78.9%。抗菌肽CGA-N9-C8抑制或消除白色念珠菌生物膜的能力最高,与CGA-N9的MBIC_(50)(105.2μg/mL)相比,CGA-N9-C8的MBIC_(50)为50.5μg/mL,且270.9μg/mL的CGA-N9-C8即可消除一半的生物膜。CGA-N9-C8对哺乳动物细胞的安全性最高,对人红细胞的治疗指数高达93.6,对人肝细胞的治疗指数为84.1。通过生物活性比较,CGA-N9-C8是CGA-N9最佳脂肪酸修饰类似物。(3)CGA-N9-C8在2×MIC处理3 h条件下,能够Dibutyryl-cAMP临床试验杀灭白色念珠菌。增加作用浓度,CGA-N9-C8能抑制(31.3μg/mL)并杀死(62.5μg/mL)99%以上的白色念珠菌顽固病原菌。CGA-N9-C8诱导白色念珠菌抗性能力较低。抗菌肽CGA-N9-C8诱导细胞活性氧产生和细胞膜去极化可能是造成白色念珠菌细胞凋亡的主要原因。以上实验结果表明:CGA-N9-C8是解决白色念珠菌感染和耐药问题的有效选择。(4)抗菌肽CGA-N9-C8对白色念珠菌感染小鼠的治疗效果:建立白色念珠菌深部感染小鼠模型。经0.94 mg/kg CGA-N9-C8治疗后,小鼠存活率由40%提高到90%,治疗结束后体重增长约6.77-6.92 g,健康指数达到4-5分(满分5分)。经0.94 mg/kg的CGA-PidnarulexN9-C8治疗后,白色念珠菌感染小鼠肾脏(每克)中菌含量平均减少了52.61%。免疫器官指数变化趋势表明抗菌肽CGA-N9-C8能够刺激小鼠免疫器官(脾脏和胸腺)免疫功能的增强,治疗7天后,小鼠的脾脏指数达到了10.33 mg/g,比感染组(6.04 mg/g)提高4.29 mg/g;治疗14天后,小鼠的胸腺指数高达4.78 mg/g,比感染组(2.74 mg/g)提高2.04 mg/g。比较抗菌肽CGA-N9-C8治疗前后小鼠内脏组织切片的病理变化,发现经0.94 mg/kg CGA-N9-C8治疗后,小鼠脏器组织均向正常化发展。肝小叶结构趋于正常,肺间质充血减少,肺泡腔变大,脾脏生发中心清晰可见,肾间质组织无出血。表明抗菌肽CGA-N9-C8对深部感染白色念珠菌病具有治疗效果。结果表明thyroid autoimmune disease,CGA-N9的正辛酸偶联物CGA-N9-C8是最佳的类似物,具有最高抗白色念珠菌活性。与CGA-N9相比,CGA-N9-C8抑制或杀死浮游白色念珠菌、抑制或杀灭白色念珠菌顽固病原菌活性增强,并表现出生物膜抑制活性和生物膜根除能力;白色念珠菌细胞诱导耐药倾向低。CGA-N9-C8降低了深部念珠菌感染小鼠模型中白色念珠菌感染引起的病理作用。综上所述,CGA-N9-C8是抵抗白色念珠菌感染和解决白色念珠菌耐药的最佳候选药物。