核糖体合成和翻译后修饰肽(Ri PPs)是核糖体天然产物,具有显著的化学和功能多样性,这些肽通常被合成为信号或抗生素,并且它们的生物合成机制经常是保守的,这使得基因组挖掘策略成为开发新Ri PPs家族的有力工具。在此,我们对粪肠球菌进行基因组挖掘并发现了一种新型Thi F-Ri PPs系统。该系列编码一个21个氨基酸的前体肽(Enfe A)、一个Thi F/E1酶(Enfe B)、四个转运蛋白(Enfe C-F)和三个用于调控群感效应的酶(Enfe G-I)。体外研究发现Enfe B在Tris缓冲液中可催化Enfe A和ATP/UTP生物合成大环内酰胺Enterofaecin和C末端酰胺化的Enfe A。通过LC-MS和NMR对Enterofaecin进行结构解析,结果表明它在C末端和Ile19之间形成了大环酰亚胺,进一步的生物活性研究,表明它可能是一种新的群体感应效应分子。进一步的底物特异性研究表明,N-末端RRE结构域对于前导肽的结合和将核心肽递送到活性位点是必需的,Enfe B对Enfe A的最后三个受体位点和氨基化合物具有广泛的底物特异性。通过同源性建模,发现Enfe B结构与来自Microcin C生物合成途径中的腺苷酰转移酶(S63845抑制剂Mcc B)类似,催化机制也相似,但对进一步的翻译后修饰采用了FUT-175研究购买不同的过程Targeted biopsies。利用SLIM技术对Enfe B的三个位点R167、K180和D225进行丙氨酸突变,实验检测其突变体均无活性,可证明R167、K180和D225位点是Enfe B的活性中心,对于催化是必需的。Enfe B的生化特性表征结果显示,Enfe B的最适温度是50℃,最适p H为7.0,Km值为0.058±0.015 m M,Kcat值为0.072±0.0071 min~(-1)。