【背景】新疆特殊生境罗布泊及温宿峡谷凭借其特殊的地理位置、极端的周边自然生态环境及较少的人为活动影响，促就了其独特的微生物优质资源。【目的】为探索添加抗生素对微生物选择性分离培养的作用，优化改良新疆特殊生境微生物选择性分离培养，以减少对菌株的重复分离，还可以选择性培养更多耐受此类抗生素的微生物，发现更多生物活性产物。【方法】以高氏一号培养基为基础，添加不同浓度的β-内酰胺类抗生素阿莫西林(amoxicillin)、氨基糖苷类抗生素卡那霉素(kanamycin)、安莎大环内酯类抗生素利福平(rifampicin)、喹诺酮类抗生genetic exchange素诺氟沙星(norfloxacin)、酰胺醇类抗生素氯霉素(chloramphenicol)、氨基糖苷类抗生素链霉素(streptomycin)，分离新疆特殊生境罗布泊及温宿峡谷土壤样品中的微生物。【结果】添加norfloxacin分离获得的微生物种类和数量最多，其次是kanamycin和amoxicillin，再次是rifampicin和chloramphenicol。所选用的大多抗生素在1/(10)MIC和1/(15)MIC浓度时分离效果最好。罗布泊土样共分离到19株菌，分布在8个属。其中芽孢杆菌属6株、链霉菌属5株、类芽孢杆菌属3株、根瘤菌属1株、旁芽孢杆菌属1株、原小单孢菌属1株、海洋杆菌属1株、野野村氏菌属1株，分离获得了5株MG132生产商新物种。温宿峡谷土样共分离获得73个菌株，分布在27个属。其中链霉菌属33株、鞘氨醇单胞菌属1株、墨西哥假黄色单胞菌2株、假诺卡氏菌5株、假节杆菌1株、原小单孢菌2株、普里斯特氏菌属1株、植物放线孢菌1株、副球菌属1株、类芽孢杆菌属2株、类节杆菌属2株、诺卡氏菌属1株、小单胞菌属1株、红色甲基杆菌属1株、甲基杆菌属1株、旁芽孢杆CB-839核磁菌属5株、伦茨氏菌属1株、克里布所菌属2株、耐盐白蚁菌属1株、剑菌属1株、博斯氏菌属1株、节杆菌属1株、壤霉菌属2株、土壤球菌属1株、放线动孢菌属1株、异壁放线菌属1株、芽孢杆菌属1株，分离获得了14株新物种。【结论】添加norfloxacin和kanamycin有利于微生物的选择性分离培养，有利于发掘新菌种，本研究的开展为选择性分离培养特殊环境中的稀有微生物提供了指导。