研究目的:1.通过体内动物实验阐明高糖诱导线粒体氧化应激损伤致细胞凋亡可以损伤肾脏足细胞的结构和功能症状的出现;2.通过体内动物实验明确活性氧(reactive oxygen species,ROS)增加致线粒体损Entinostat采购伤是启动细胞凋亡机制的重要环节;3.通过体内动物实验监测各组大鼠肾组织中沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ辅激活因子(peroxisome proliferator activated receptorγcoactivator-1 alpha,PGC-1α)的相对表达情况,证实SIRT1/PGC-1α蛋白通路可以调控ROS的表达;4.通过体内动物实验证实白藜芦醇可以通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路,减轻足细胞氧化应激损伤,保护肾脏。研究方法:1.动物模型与分组:采用高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为糖尿病模型组和白藜芦醇治疗组。正常组及模型组每日给予羧甲基纤维素钠等体积灌胃,白藜芦醇组给予溶于羧甲基纤维素钠的白藜芦醇制剂20mg/kg灌胃干预。2.肾功能评价:在干预10周末,收集24h尿液,取腹主动脉血及双肾,称取肾重。使用CBB法试剂盒检测24小时尿蛋白(24-hour urine protein,24h Upro),使用全自动生化仪检测血肌酐(Serum creatinine,Scr)和血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)。3.肾脏病理形态及足细胞损伤评价:采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin and eosin stain,HE)染色观察肾脏组织一般形态变化,采用过碘希夫酸染色法(Periodic acid-schiff stain,PAS)及马松染色法(Masson trichrome stain,Masson)观察细胞外基质与肾脏纤维化改变;采用投射电镜观察足细胞、足细胞线粒体及肾小球基底膜(Glomerular basement membrane,GBM)等超微结构;采用免疫组化与免疫印迹检测Synaptopodin的蛋白定位及表达水平,免疫组化检测Desmin蛋白水平,评估足细胞损伤Flow Panel Builder。4.肾脏组织SIRT1、PGC-1a蛋白表达及凋亡评价:采用免疫组化检测肾脏组织SIRT1、PGC-1a、Bcl-2、Caspase9、Caspase3蛋白表达;采用免疫印迹法检测SIRT1、PGC-1a、Caspase3蛋白表达。结果:1.白藜芦醇对SD大鼠肾功能的影响:与正常组比较,模型组大鼠Scr、BUN及24h Upro明显升高(p<0.05);与模型组比较,白藜芦醇组Scr、BUN及24h Upro下降(p<0.05)。2.白藜芦醇对SD获悉更多大鼠肾脏病理形态及足细胞损伤的影响:(1)病理形态变化:与正常组比较,模型组大鼠肾小球肥大,肾小球系膜细胞及系膜基质广泛增生。白藜芦醇组上述病变各有改善。(2)超微结构观察:正常组大鼠基底膜厚度均匀,足突形态规则,线粒体形态饱满,嵴结构清晰排列整齐,模型组大鼠基底膜不均匀增厚,足突融合、脱落,线粒体肿胀,基质稀薄,嵴紊乱。经过药物干预10周后,白藜芦醇组上述情况得到改善。(3)Desmin与Sypaptopodin的蛋白表达:与正常组比较,模型组Desmin免疫组化检测表达增多(p<0.05)、Sypaptopodin免疫组化及免疫印迹检测表达减少(p<0.05)。与模型组比较,白藜芦醇组Desmin表达减少(p<0.05)、Sypaptopodin表达增加(p<0.05)。3.白藜芦醇对SD大鼠肾脏SIRT1,PGC-1α的蛋白表达及凋亡的抑制作用:与正常组比较,模型组大鼠SIRT1、PGC-1α免疫组化及免疫印迹检测水平明显下降(p<0.05),Bcl-2蛋白免疫组化检测表达水平下降,Caspase9免疫组化检测升高、Caspase3免疫组化及免疫印迹检测表达升高(p<0.05);与模型组比较,白藜芦醇组SIRT1、PGC-1α蛋白表达增多(p<0.05),Bcl-2蛋白表达上升,Caspase9、Caspase3表达下降(p<0.05)。结论:糖尿病肾病大鼠存在明显的线粒体氧化应激损伤,白藜芦醇可以减少高糖状态下足细胞凋亡,此作用可能与上调SIRT1/PGC-1α表达改善线粒体功能,减少ROS生成有关。