目的:肺癌是世界范围内发病率MAPK抑制剂和死亡率最高的致命疾病之一。目前治疗方式有限且生存率不乐观。肿瘤细胞疫苗是一种新型的治疗方法,包括肿瘤全细胞疫苗或树突状细胞(DCs)疫苗在内的细胞疫苗,可以达到控制甚至特异性去除肿瘤的治疗效果,作为一种有效的肿瘤免疫治疗方法受到了广泛的关注。溶瘤病毒(OVs)因其溶瘤和免疫刺激功能而被探索作为新的免疫治疗方法。因此将两种治疗方式结合起来,制备一种新城疫病毒(NDV)修饰的肿瘤细胞疫苗联合瘤内注射NDV并评价其对小鼠的肿瘤治疗效果,从而为临床肿瘤治疗性疫苗的研究提供参考,为肺癌的治疗提供新的思路。方法:1.NDV感染小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)后细胞死亡形式的验证10MOI NDV感染LLC后利用Western Blot和流式细胞术检测细胞的死亡形式(自噬,凋亡和焦亡),然后再通过Western Blot和免疫荧光法检测NDV感染LLC后是否会发生免疫原性细胞死亡(ICD)。验证结束,为了探究NDV诱导LLC发生的自噬和凋亡是否会参与到NDV诱导的ICD的过程,用自噬抑制剂、凋亡抑制剂和坏死抑制剂提前预处理LLC 1h,预处理结束后再用NDV感染LLC,然后利用Western Blot检测热休克蛋白(HSPs)HSP70/90,高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达情况。2.紫外辐照的LLC疫苗在小鼠体内和体外的安全性验证通过紫外辐照灭活LLC 20min后制备成LLC疫苗。疫苗制备结束后,通过台盼蓝染色实验和CCK8实验来检测辐照过的肿瘤细胞的死亡率和增殖率。为了评价疫苗在体内的安全性,将紫外辐照过的LLC疫苗接种于小鼠右侧腋下,连续监测腋下有无肿瘤凸起、体重、摄食量、皮肤光泽等指标。3.NDV修饰的LLC疫苗在小鼠体外和体内激活DCs的检测为了探究NDV修饰的LLC疫苗是否可以在体外激活DCs,分别将PBS、NDV、紫外灭活的NDV、紫外灭活的LLC疫苗和NDV修饰的LLC疫苗与小鼠骨髓来源的DCs共培养48h,然后用流式细胞仪检测MHC-II、CD80和CD86的表达情况。接下来,我们继续检测疫苗在体内激活DCs和T细胞的活化情况,我们分别将PBS、NDV、紫外灭活的NDV、紫外灭活的LLC疫苗和NDV修饰的LLC疫苗分别去免疫小鼠,三天后处死小鼠,用流式细胞仪检测小鼠脾细胞中MHPrecision Lifestyle MedicineC-II、CD80和CD86的表达和T细胞的活化情况。4.NDV修饰的LLC疫苗联合瘤内注射NDV对荷瘤小鼠免疫治疗评价将36只C57BL/6小鼠随机分成6组,第0天右侧腋下荷瘤5×10~5个LLC。分别于第7天和第14天给小鼠右侧大腿肌肉注射PBS、紫外灭活的LLC疫苗、NDV、紫外灭活的LLC疫苗联合小鼠肿瘤内注射NDV、NDV修饰的LLC疫苗和NDV修饰的LLC疫苗联合小鼠肿瘤内注射NDV作为治疗组。从荷瘤第9天开始,隔天测量并记录小鼠的肿瘤长径及宽径,观察各组小鼠的生存状态,第22天处死小鼠取出肿瘤,比较各组肿瘤大小并通过流式细胞仪检测小鼠T细胞的活化情况,用ELISA检测小鼠外周血血清中细胞因子的分泌情况。结果:1.NDV感染LLC会发生自噬凋亡但并不发生焦亡,并且凋亡参与到了NDV诱导LLC发生ICD的过程。2.紫外灭活的LLC疫苗在体内体外都具有良好的安全性。3.NDV修饰的LLC疫苗中免疫原Ceralasertib配制性细胞死亡(ICD)的表达在体内和体外均能刺激DCs的成熟和T细胞活化,差异有统计学意义(P<0.05)。4.NDV修饰的LLC疫苗联合瘤内注射NDV能显著抑制小鼠肿瘤生长,促进体内Th1细胞的分化和炎症细胞的浸润,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NDV修饰的LLC疫苗联合瘤内注射NDV能够促进抗原提呈,诱导强大的抗肿瘤免疫反应,具有良好的免疫治疗效果。