目的:拟通过体外实验研究芪骨胶囊联用阿仑膦酸钠对于破骨细胞的影响从而探究该中成药对于治疗骨质疏松症的效果。方法:(1)培养raw264.7细胞,待细胞贴壁后,使用RANKL和M-CSF诱导其破骨向分化3天,将细胞分为对照组,芪骨组,阿伦组,芪骨联用阿伦组,然后使用相对应制剂干预细胞24h;(2)通过CCK-8细胞毒性试验,计算各实验组的半抑制浓度,并得出各实验组的最佳体外实验浓度;(3)通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,3个或3个以上核染色为阳性的细胞即为破骨细胞,探究药物对破骨细胞增殖分化的影响;(4)通过破骨细胞特异性基因Real-time pcr实验,检测破骨细胞相关基因(NFATcl,c-Fos)在不同实验组下的表达量;(5)通过蛋白免疫印迹Western-Blot实验,检测破骨细胞相关蛋白(NFATc1、c-Fos、p-p65、p65、p-IκBα)的水平变化。结果:(1)当芪骨胶囊浓度从5μg/l增加到50μg/l时,与对照组相比,细胞活性逐渐被抑制,当芪骨胶囊浓度达到100μg/l时,细胞活性被抑制的最强(P<0.0001),而当芪骨胶囊浓度>200μg/l时,具有细胞毒性作用。因此确定芪骨胶囊浓度在100μg/l时对破骨细胞生成的抑制效应最强,且非药物细胞毒性所致;当阿仑膦酸钠浓度达到10μmol/L时,与对照组相比,细胞活性被抑制的最强(P<0.0001),超过100μmol/L时,则具有细胞毒性作用,因此确定阿仑膦酸钠浓度在10μmol时对破骨细胞生成的抑制效应最强,且非细胞毒性所致;因确认细节此根据以上结果,联用组采用的药物浓度分别为,芪骨胶囊浓度100μg/l,阿仑膦酸钠浓度10μmol/L。(2)破骨细胞与分组试剂共培养后,TRAP染色阳性多核细胞数均减少,且细胞体积变小,芪骨组和阿伦组均可以抑制raw264.7细胞的破骨性分化,影响了破骨细胞的增殖分化;联用组与芪骨组相比,TRAP染色阳性率显著降低。(3)Real-time PCR检测相关表达发现,芪骨组和阿伦组的NFATc1的表达有差异,但差异不明显,无统计学意义(P>0.05),芪骨组和Roxadustat MW对照组相比,NFATc1的相对mRNA表达有差异(P<0.05),对照组和阿伦组相比,也有差异和统计学意义(P<0.05)。c-Fos的检测结果显示,阿伦组与芪骨组,均有low-cost biofiller一定的抑制作用(P<0.05),而联用组与芪骨组和对照组相比,差异均较为明显(P<0.05)。(4)通过Western-Blot实验检测,与对照组相比,联用组明显降低了破骨细胞相关蛋白的表达水平。芪骨组与对照组相比,NFATc1、p-p65、p65和p-IκBα的表达下降(P<0.05),而c-Fos无明显变化(P>0.05);阿伦组与对照组相比,NFATc1、p65和p-IκBα表达均有下降(P<0.05),而p-p65和c-Fos无明显变化(P>0.05);联用组与对照组相比,NFATc I、c-Fos、p-p65、p65和p-IκBα的表达均有下降(P<0.05)。结论:芪骨胶囊联用阿仑膦酸钠通过下调NF-κB通路,抑制了破骨细胞的增殖分化,从而达到防治骨质疏松的作用。