红富士是我国苹果主导品种,在苹果市场上红富士约占总市场的七成。群众购买力不断上升不容忽视,同时市场对产品提出了更高的要求,其中果实的着色程度很大程度影响了消费者购买苹果的消费选择,花青苷是影响果皮着色主要影响因素,研究花青苷对苹果着色的影响十分必要。根据前期研究结果表明,苹果MdPRP-lselleck抑制剂ike基因表达与果皮花青苷积累有关。为进一步研究该基因功能,本研究通过克隆获得苹果MdPRP-like基因,通过对该基因进行分子鉴定、生物信息学分析、实时荧光定量PCR,主要结论如下:1)克隆了MdPRP-like基因。NCBI登录号LOC103408644,(序列号XM＿008347478),全长开放阅读框(ORF)序列一致,长度为351 bp,编码117个氨基酸。生物信息学分析结果为,MdPRP-like蛋白分子量为10773.47,理论等电点p I为5.19,带负电荷的残基总数(Asp+Glu)为2,正电荷残基总数(Arg+Lys)为1,分子式为C_(511)H_(715)N_(123)O_(123)S_7。不稳定性蛋白且为亲水性蛋白。无跨膜螺旋结构。亚细胞定位预测结果为在细胞外及细胞核中。蛋白二级结构预测显示α-螺旋为13.79%,β-折叠为3.45%,无规则卷曲为79.31%,延伸链为3.45%。对苹果、白梨、扁桃、杏、黄连木等22个物种进行构建MdPRP-like基因的系统进化树,结果显示进化树聚为2大类,苹果PRP与白梨PRP亲缘性最近,与扁桃(Prunus dulcis,KAI5326560.1)亲缘性最远。2)研究了MdPRP-like基因对干旱胁迫、盐胁迫、低温胁迫的响应。结果表明,苹果苗经过低温胁迫处理其MdPRP-like基因的表达量均有上升,其中在低温处理2 h时表达量最高,暗示该基因可能参与苹果低温胁迫的调控。苹果苗经过ABA处理后,MdPRP-like基因的相对表达量在处理时间为3 h和6 h时,表达量增加,但在处理1h、12 h、24 h时,其基因的表达量均下降,在12 h时最低。苹果苗在20%PEG-6000干旱处理下随着处理基因表达量不断升高,在8 h显著性达到最大。苹果苗在不同浓度的盐胁AZD1152-HQPA迫处理中,在处理浓度为100 mmol/L时,第22天、23天基因的表达量均有显著性差异,在第23天表达量最低。在处理浓度为150 mmol/L时,第20天基因的表达量有显著性差异,并且其后的4天表达量均增加。在处理浓度为200 mmol/L时,第20天、24天基因的表达量均有显著性差异。在Na Cl浓度为250immune response mmol·L~(-1)时,该基因表达量都有不同程度的增加,可以推测植物在受到高浓度的盐胁迫时,MdPRP-like基因的表达量可能会增加。3)将MdPRP-like进行启动子顺式作用元件预测,得出该基因包含了与低温响应的顺式作用元件GA-motif,表明MdPRP-like基因可能在植物非生物胁迫中起到一定作用。此外,MdPRP-like基因还包含了参与Me JA反应的顺式作用元件as-1和CAAT-box,参与脱落酸反应的chs-CMA1a,表明MdPRP-like基因可能参与激素的调节。而启动子含有与MYBHv1结合位点ABRE顺式元件,并且含有大量与光反应有关的顺式作用元件G-Box、ATCT-motif、L-box、CCAAT-box、I-box、TGACG-motif则表明MdPRP-like基因可能参与有关花青苷的合成和调控。4)研究了MdPRP-like基因在花青苷的合成的调控作用,结果表明,MdPRP-like基因对花青苷的产生起到正相关调控,在果实着色前期发挥了重要作用。用实时荧光定量PCR技术对芽变型果实和野生型果实进行MdPRP-like基因相对表达量测定,结果显示野生型与芽变型相对表达含量均呈现先升高后降低的表达模式。红皮品种果实MdPRP-like基因的相对表达量均显著高于绿皮品种果实。综上所述,本研究利用基因工程技术,首次进行分离克隆MdPRP-like基因,并对其功能进行分子鉴定,分析验证了该基因与花青苷合成之间可能存在正调控关系,对发掘苹果优质基因,提高果实果色品质具有重要意义。