乳腺癌是最常见的恶性肿瘤,严重威胁女性的身体健康,其逐年上升的发病率及年轻化的趋势使乳腺癌治疗方面的研究更加迫切。通常,化疗是治疗乳腺癌的主要方法,但是其严重的毒副作用和化疗药物低的溶解性严重影响了治疗效果。因此,降低化疗药物对正常组织的毒副作用和改善化疗药物的溶解性有重要意义。紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是从太平洋红豆杉的树皮中提取出的活性成分,是目前临床上使用最广泛的抗肿瘤药物之一。然而,尽管紫杉醇具有良好的抗癌活性,但其水溶性很差,而添加聚氧乙烯蓖麻油等增溶剂会引起严重的毒副作用。藤黄酸(Gambogic acid,GA)是从天然藤黄科植物藤黄树的干燥树脂中提取出来的成分,也具有水溶性差、毒副作用大等缺陷,这导致其应用受到限制。同时,研究表明GA能够增加对PTX耐药乳腺癌细胞对PTX的敏感性。因此,我们设想,通过PTX和GA的联合治疗以改善对乳腺癌的治疗效果。联合治疗可以使多种药物共同发挥作用,从而减少药物用量,降低毒副作用,克服肿瘤细胞的耐药性,增强疗效。但由于化疗药物的理化性质不同,分布各异,缺少针对性,难以在发病位置聚集,因此选择合适的载体递送药物十分重要。叶酸受体(Folate receptor,FR)在人类乳腺癌等癌细胞中经常过度表达,并且在大多数正常组织中低表达或不表达,因此经常采用叶酸(Folic acid,FA)作为肿瘤细胞的靶向配体,提高药物递送系统的靶向性。基于此,本文设计了一种同时包载PTX和GA的FA靶向白蛋白纳米粒,以期同时将这两种水溶性差的药物有效递送至肿瘤部位。本论文的研究主要包括以下四部分:1.PTX和GA体外分析方法的建立本研究采用高效液相色谱法对PTX和GA进行定量分析,并进行方法学验证。实验结果表明,PTX和GA的标准曲线R~2均大于0.9990,说明PTX和GA在1.0～250.0μg/m L范围内有良好的线性关系。方法学结果表明,此方法的专属性、重复性、稳定性、精密度和准确度以及加样回收率均符合相关要求,因此可以用此方法检测PTX和GA的含量。2.FA-PTX/GA-NPs的制备及其表征本研究采用去溶剂法制备同时包载PTX和GA的纳米粒(PTX/GA-NPs)。实验结果表明,PTX/GA-NPs粒径大小为120.6±2.1 nm,表面电位-10.7±0.8m V。然后通过NHS与蛋白-NH_2基团的酯交换反应将叶酸(Folic acid,FA)连Adezmapimod体内接到人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)上,制备叶酸靶向的双载纳米粒(FA-PTX/GA-NPs),经过FA靶向修饰后,纳米粒的粒径略有增大,FA-PTX/GA-NPs粒径大小为130.0±1.4 nm,表面电位-14.3±1.7 m V。FA-PTX/GA-NPs对PTX和GA的包封率分别为84.22±0.maternal infection55%和97.41±0.32%。实验结果表明PTX/GA-NPs和FA-PTX/GA-NPs粒径均一,具有较高的包封率和载药量。3.FA-PTX/GA-NPs的体外评价本研究对PTX/GA-NPs和FA-PTX/GA-NPs进行体外抗肿瘤评价,在细胞活力实验中,相比于游离药物,PTX/GA-NPs和FA-PTX/GA-NPs有更高的肿瘤细胞抑制作用;在细胞摄取实验中,通过激光共聚焦显微镜观察到的实验结果显示,FA-PTX/GA-NPs对于叶酸受体(Folate receptor,FR)高表达的MDA-MB-231,具有最高的荧光强度,而对于FR低表达的MCF-7细胞,有无叶酸修饰情况下无显著性差别。通过流式细胞仪对细胞摄取进行定量分析。MDA-MB-231细胞中,FA-PTX/GA-NPs的摄取最强,在孵育1 h、2 h、4 h的情况下,MDA-MB-231细胞摄取FA-PTX/GA-NPs-FITC的荧光强度分别是PTX/GA-NPs-FITC的1.64、1.83、1.88倍,且FA+FA-PTX/GA-NPs比FA-PTX/GA-NPs的摄取减弱。而MCF-7细胞中,细胞对PTX/GA-NPs和FA-PTX/GA-NPs的摄取无显著性区别。结果显示经过FA修饰的纳米粒能够显著提高在FR高表达细胞的摄取;在溶血实验中,PTX/GA-NPs和FA-PTX/GA-NPs能够减少助溶剂的用量,从而显著降低溶血率,表明经过纳米粒包载,可以降低药物的毒副作用。4.FA-PTX/GA-NPs的体内评价通过建立MDA-MB-231裸鼠异位荷瘤模型评价FA-PTX/GA-NPs的体BLZ945半抑制浓度内抗肿瘤效果,结果表明FA-PTX/GA-NPs的抗肿瘤作用最强,与生理盐水组相比,FA-PTX/GA-NPs组抑制了74.8%的肿瘤体积增长;活体成像实验结果表明FA-PTX/GA-NPs在体内能够更多的蓄积在肿瘤部位,具有良好的靶向性;组织切片结果显示PTX/GA-NPs和FA-PTX/GA-NPs对裸鼠的组织器官没有明显损伤,表明经过纳米粒包被能够明显降低游离药物的毒副作用。综上所述,本文用去溶剂法制备了FA-PTX/GA-NPs,体内和体外的评价结果都表明FA-PTX/GA-NPs有较好的肿瘤抑制作用,并具有良好的生物安全性。综上,FA修饰包载PTX和GA双药的纳米递送系统是一种有潜力的治疗乳腺癌的策略。