背景与目的乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,以下简称HBV)是世界发展的难题,目前乙肝相关的肝病在未来几十年内仍然是全球影响的重要健康问题,乙型肝炎病毒感染仍然是一个难以满足的医疗需求。HBV是嗜肝DNA病毒科的一种小包膜DNA病毒,具有部分双链松弛环状DNA基因组。目前的HBV治疗方法,聚乙二醇化干扰素-α(PEG-IFNα)和长期核苷酸类似物(NUCs),可以将乙型肝炎病毒(HBV)复制减少到临床可检测水平以下,减少肝脏炎症,逆转纤维化,并部分恢复能够控制HBV的免疫反应,但很少能实现HBV治愈,其治愈的障碍主要包括共价闭合环状DNA(ccc DNA)难以清除,高病毒负荷(HBV DNA和HBs Ag)以及针对HBV的宿主先天性和适应性免疫应答受损。FUBP1又名远端上游结合蛋白1,编码具有644个氨基酸的蛋白质,是一种参与不同细胞过程的多功能DNA和RNA结合蛋白,FUBP1是转录、翻译和RNTLC bioautographyA剪接的主调节因子。前期本课题组发现PUF60可以抑制HBV前基因组RNA的降解与剪接进而调控乙肝病毒进程,我们通过文献研究查找发现PUF60往往与远上游元件(FUSE)和FUSE结合蛋白(FBP)形成复合物,发挥调控功能,并且研究发现FUBP1表达与肝癌细胞存在相关性,而HBV感染是晚期肝硬化和肝细胞癌的主要原因,因此我们推测FUBP1与HBV感染生命周期之间存在一定的联系,可能对HBV的转录调控发挥一定作用。材料与方法通过在Huh7细胞中转染pc DNA3.1-HA-FUBP1过表达质粒,应用蛋白印迹实验验证FUBP1过表达质粒构建成功,实现FUBP1过表达;同时或24h后转染p UC19-HBBj质粒,RT-q PCR实验验证FUBP1过表达对pg RNA、sp RNA、剪接效率的影响,并用northern blot进一步验证RT-q PCR的结果。文献研究发现PUF60、FUBP1两者形成复合体发挥调控功能,用RT-q PCR、海肾荧光素酶报告实验验证PUF60、FUBP1及两者的蛋白共表达对HBV pg RNA、前基因组启动子、ENII/BCP core启动子活性的影响;并且执行了Alpha screen实验、RNA降解实验验证FUBP1调控RNA转录进程是否与转录后RNA核外https://www.selleck.cn/products/azd9291.html输出和降解相关;构建一系列HBV启动子及突变体质粒,海肾荧光素酶报告实验检测过表达FUBP1对HBV启动子及其突变体活性的影响;并用凝胶迁移实验进一步验证FUBP1靶向HBV Enh II/core启动子区域。研究结果过表达FUBP1可降低pg RNA、sp RNA的表达水平并降低剪接效率,northern blot的结果进一步验证上述结果;FUBP1可通过下调HBV Enh II/BCP启动子的活性,抑制HBV转录;文献研究发现PUF60往往与FUBP1形成复合体发挥作用,我们的研究表明FUBP1是独立靶向HBV Enh/core启动子区域抑制HBV前基因组RNA的表达;进一步研究发现FUBP1抑制HBV pg RNA水平不是通过调控转录后HBV RNA核外输出及降解实现的;FUBP1是通过靶向启动子del-1,del-2区域共同序列(nt1640-Pidnarulex小鼠1652,具体碱基序列为:GCCCAAGGTCTTG)调控启动子活性,从而抑制HBV复制。结论1、FUBP1直接结合于HBV nt1640-1652区域下调启动子活性进而抑制乙肝病毒的转录;2、研究发现FUBP1在HBV转录进程中发挥负调控作用,是抗乙肝病毒治疗的潜在靶点。