背景:据统计资料《2020年全球癌症统计数据》结果显示,宫颈癌目前的年均发病率及死亡率等均属较高级别并将有进一步上升之趋势,是成为目前主要威胁着女性生命及其健康发展的妇产科常见多发疾病之一。统计发现,全球每年平均女性宫颈癌新发病例大约有60.4万,死亡人数有34.2万。在当代,我国宫颈癌的新发患者也呈逐步年轻化的发展趋势。黄芩苷是从黄芩中分离提纯的天然活性黄酮类成分,具有高效广谱的抗细胞氧化、抗癌、抗菌、抗病毒等多种药理生物活性特点。通过大量的实验结果表明,黄芩苷以时间和浓度依赖的方式对结直肠癌、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤细胞起到明显的抑制效果,还可以通过抑制多种癌细胞的快速分裂及生长,但是对人体大多数的正常细胞毒性较小,因此它可能是下一种治疗晚期恶性癌症患者的另外一个更好的选择。从正常宫颈细胞发展至癌变的细胞经历了较长的过程,其中发生了各种机制的转变和信号通路的激活或抑制等,已研究明确的正常宫颈发生癌变的机制有:HIPPO信号通路、Wnt/β-catenin通路、Notch-Delta信号通路等。其中Wnt/β-catenin通路在与宫颈癌的关联密切,目前已用于临床相关诊断,且与宫颈癌的治疗与预后存在密切的关系。因此本实验拟通过研究黄芩苷对宫颈癌HeLa细胞的影响,及在Wnt/β-catenin通路及其上下游信号通路可能发挥的作用机制,为宫颈癌的临床治疗靶点提供新的思路。目的:研究黄芩苷对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡影响及从Wnt3a/β-catenin通路探讨黄芩苷对宫颈癌HeLa细胞可能的作用机制。方法:1.采用CCK-8法检测宫颈癌HeLa细胞在黄芩苷不同浓度、不同时间处理后的细胞存活率及抑制作用。2.Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测不同浓度黄芩苷作用48Laboratory Management Softwareh后宫颈癌HeLa细胞凋亡情况;Western blot检测黄芩苷作用后宫颈癌HeLa细胞中凋亡蛋白p53、Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达的影响。3.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同浓度的黄芩苷作用48h 后 HeLa 细胞中 HPV E6 mRNA、HPVE7 mRNA、Wnt3a mRNA、β-catenin mRNA、Dvl2 mRNA、c-Myc 的 mRNA 表达量。4.Western blot 检测 Wnt3a/β-cateselleck NMRnin 相关通路中 Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β及Dvl2的蛋白表达水平。结果:1.CCK-8法检测结果:与对照组比较,不同浓度的黄芩苷处理后HeLa细胞存活率明显下降(p<0.05),并呈浓度梯度及时间梯度依赖性。2.Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:黄芩苷可诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡(p<0.05)。Western blot检测结果显示:凋亡蛋白相关蛋白p53、Caspase-3及Bax的蛋白表达水平显著增高(p<0.05);Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(p<0.05)。3.qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,黄芩苷处理后HeLa细胞中HPV E6、HPVE7、Wnt 3a、β-catenin、Dvl2、c-Myc 的 mRNA表达水平均显著降低(p<0.05)。4.Western blot检测结果显示,与对照组比较,黄芩苷处理后HeLa细胞GSK-3β的蛋白质表达水平组间比较差异不显著(p>0.05),而p-GSK-3β的获悉更多蛋白表达水平显著增高(p<0.05);Wnt3a、β-catenin、Dvl2的蛋白质表达水平均显著降低(p<0.05)。结论:1.黄芩苷可有效抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,并呈时间及浓度依赖性;2.黄芩苷可促进宫颈癌HeLa细胞的凋亡,可能是通过上调p53、Bax、Caspase3蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达来实现的;3.黄芩苷可能通过下调HPVE6、E7 mRNA的表达,从而上调了 p53蛋白的表达,p53蛋白表达的增加可能进一步抑制Wnt3a/β-catenin信号通路中相关mRNA和蛋白的表达,最终抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。