目的:阿霉素是化疗治疗骨肉瘤的重要药物之一,然而目前在全身给药后,实现药物有效浓度与副作用之间的平衡是一个重要的挑战,需寻找更多要改进药物递送方法提高药物输送到特定部位的有效率,增加肿瘤部位阿霉素的药物浓度,以达到靶向治疗的目的。本研究使用明胶微球作为阿霉素的药物递送载体,探究阿霉素在明胶微球载体的作用下Pevonedistat核磁,其治疗骨肿瘤的有效性。方法:(一)阿霉素明胶微球的制备及特性研究:1.制备载阿霉素明胶微球,使用戊二醛为固化剂,交联后低温保存;2.使用扫描电子显微镜观察制备的微球的形态及大小是否正常;3.采用紫外分光光度法计算载药率和包封率;4.计算阿霉素明胶微球的体外释放曲线。(二)阿霉素明胶微球治疗骨肉瘤的体内外研究:1.本研究使用的细胞系为高侵袭性骨肉瘤MNNG/HOS CL#5细胞,采用CCK8法测体外细胞毒性实验,计算药物的半抑制浓度;2.使用裸鼠(BALB/c裸鼠)40只,通过皮下成瘤实验,然后当小鼠体内的肿瘤长大超过80 mm~3时,随机分为4组,每组10只,分别对小鼠注射生理盐水(control组)、单独阿霉素(DOX组)、单纯明胶微球(GM组)以及载阿霉素明胶微球(GM+DOX组),观察对比各组小鼠的肿瘤组织变化情况Testis biopsy;3.使用苏木精-伊红染色观察组织的形态变化;4.免疫组化染色观察Ki67、PCNA蛋白的表达;5.WB染色观察相关凋亡蛋白的表达情况;6.RT-PCR检测各凋亡蛋白相关基因的m RNA表达水平;7.实验数据均使用统计学软件SPSS 22.0系统进行整理分析,平均值±标准差的形式表示计量学数据,采用Bonferroni多重检验法对数据进行两两的比较。测得P<0.05才认为样本间的差异有统计学的意义。结果:(一)阿霉素明胶微球的制备及特性研究:1.制备阿霉素明胶微球DOX:GM的最佳材料比为1:10;2.透射电镜检测结果显示,阿霉素明胶微球具有规则的球形形态,尺寸约为40μm,微球体的表面光滑,形态良好,无塌陷、褶皱;3.载药率为(6.05±0.26)%,包封率为(84.27±3.10)%;4.载阿霉素明胶微球在体外积累释放,在0-60 h内持续释放增加,释放曲线较平缓,呈现持续性缓慢上升的形式。(二)阿霉素明胶微球治疗骨肉瘤的体内外研究:1.体外细胞毒性实验DOX裸药的半抑制浓度在72h内均高于GM+DOX。2.DOX和GM+DOX组均对裸鼠的肿瘤起到一定的抑制作用,GM+DOX组的肿瘤重量相较与DOX组降低2.25倍;并且随着时间的延长,肿瘤的体积受到显著的抑制;3.DOX组和GM+DOX组组织细胞的阳性率显著降低,其中,GM+DOX组Ki67以及PCNA的阳性率降低约4倍;4.GM+DOX作用后细胞内AKT、ERK以及m TOR作用通路的关键蛋白表达水平得到显著的抑制;5.GM+DOX组的Bcl-2表达水平显著低于其他凋亡因子,上调BAX、BID、p53和Caspase家族凋亡蛋白的表达水平,且其对应的m RNA表达水平相一致,以促进肿瘤细胞凋亡。结论:载阿霉素明胶微球可以通过缓释药物有效抑制肿瘤细胞的生长及侵袭能力,其肿瘤增殖和抗凋亡的关键蛋白的表达水平得到显著抑制,表明载阿霉素明胶微球可有效提高药物作用效率。与单纯给药相比,可以明显抑制细胞增殖以阻碍高侵袭性骨肉瘤的进展。