目的:良性前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)是一种50岁以上中老年男性常见的泌尿系统疾病。良性前列腺增生导致前列腺间质和腺体增生,进而压迫尿道产生尿潴留和炎症。中草药治疗前列腺相关疾病近年来逐步受到重视。甲基莲心碱是从天然产物莲子心中提取的二苄基异喹啉类生物碱,具有抗氧化、抗炎、抗抑郁等多种药理作用,同时作用温和且不良反应甚微。但对于甲基莲心碱(Neferine,Nef)抑制前列腺增生的机制尚未被深入探讨。本实验的目的是研究甲基莲心碱是否通过调节雄激素及相关通路来抑制良性前列腺增生和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的产生。方法:本实验首先建立小鼠前列腺增生模型,观察甲基莲心碱对增生前列腺的药理作用。丙酸睾酮诱导增生模型形成,同时给予不同浓度甲基莲心碱和非那雄胺处理14或28天后收集前列腺组织。采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin染色法,H&E染色法)观察不同组别细胞形态的变化;采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒的方法,测定血清中前列腺特异性抗原(Prostate spwecific antigen,PSA)的具体含量。此外本研究以正常人前列腺基质永生化细胞株WPMY-1与人前列腺癌上皮细胞株LNCa P为研究对象,建立体外增生模型,探讨甲基莲心碱抗间质及上皮增生各自的作用机制。采用MTT法检测甲基莲心碱对雄激素诱导后基质细胞和癌上皮细胞的抗增殖作用。采用流式细胞术检测甲基莲心碱对ROS(reactive oxygen species)的影响。采用免疫印迹法(Western Blot,WB)检测甲基莲心碱在小鼠BPH模型以及体外BPH模型(WGNE-140核磁PMY-1,LNCa P)中对雄激素/AR通路蛋白的影响,包括:第Ⅱ型5α-还原酶(5α-reductase)、雄激素受体(androgen receptor,AR)、前列腺特异性抗原(Prostate spwecific antigen,PSA)。对凋亡的影响,包括:pro-caspase-3、cleaved caspase-3、uncleaved PARP、cleaved PARP。对TGF-β/Smads信号通路的影响,包括:TGF-β、TGFBR2、p-Smad2/3、Smad2/3。检测甲基莲心碱对EMT的抑制作用。N-Cadherin、E-Cadherin、Vimentin为标志蛋白。另外免疫印迹法(Western Blot)还检测了甲基莲心碱作用于TGF-β诱导下的癌上皮及间质细胞各通路蛋白的表达情况。结果:丙酸睾酮(7.5 mg/kg)诱导良性前列腺增生模型,甲基莲心碱(2、5 mg/kg),非那雄胺(10 mg/kg)作用,小鼠增生的前列腺体积缩小,脏器指数减少。血清PSA水平呈下降的趋势。H&E染色切片结果显示用药组上皮细胞厚度程度减轻。睾酮(1μmol/L)诱导细胞增生模型,甲基莲心碱(10、100μmol/L),非那雄胺(10、100μmol/L)作用后,前列腺增生间质细胞及癌上皮细胞活力下降。与睾酮组相比,甲基莲心碱(10、100μmol/L)下调间质细胞ROS水平。在体内实验中,与诱导组相比,pro-caspase-3和uncleaved PARP表达下调,clelethal genetic defectaved caspase-3和cleaved PARP表达上升。体内外实验均显示AR通路,TGF-β/Smads通路,EMT蛋白表达的显著改变,5α-reductase、AR、PSA表达下降。Smad2/3表达无明显变化,TGF-β、TGFBR2、p-Smad2/3表达下降。EMT中N-Cadherin、Vimentin受到抑制,E-Cadherin表达恢复。TGF-β在WPMY-1和LNCa P细胞中诱导增生,甲基莲心碱和非那雄胺作用后干扰AR通路,TGF-β/Smads通路,EMT相关蛋白的改变。结论:本研究SB203580使用方法报道了雄激素在小鼠,上皮和间质细胞中诱导增生的效力,同时也证实了甲基莲心碱抑制雄激素诱导的良性前列腺增生的作用。甲基莲心碱可以通过阻断雄激素/AR通路,TGF-β/Smads通路,逆转EMT的产生,防止良性前列腺增生的进展,被认为是治疗BPH的潜在药物。