流胶病是世界范围内桃树的主要病害之一,在我国长江流域以南危害尤为严重,目前在生产上尚无有效的防治手段。效应因子在病原菌与寄主植物互作中扮演着十分重要的角色。因此,开展效应因子研究,对深入了解流胶病菌致病机理和精准防控有重要意义。前期研究发现桃流胶病的病原菌主要是葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)真菌。其中,Lasiodiplodia theobromae致病力较强,且能引起桃树枝条短时间内流胶;Botryosphaeria dothidea分布较广泛,但是致病力较弱。本研究以实验室前期筛选到的两株桃流胶病原菌L.theobromae JMB122和B.dothidea XNHG241为材料,首先根据L.theobromae菌株JMB122基因组中的候选效应因子,筛选到毒性较强的Lt17,并进行了其调控植物免疫应答的功能分析。此外,通过基因组测序,揭示了桃流胶病菌B.dothidea的全基因组特征,为开展其致病机理研究提供理论依据。本研究取得主要结果如下:1.桃流胶病菌L.theobromae JMB122的效应因子筛选鉴定。发现流胶病菌候选效应因子Lt17抑制BAX、INF1诱导的细胞程序性死亡。分析效应因子Lt17的序列特征,发现其具有N端信号肽区域、不含跨膜结构域等特点;qRT-PCR结果显示Lt17基因在JMB122侵染桃枝条后表达量显著升高;将效应因子Lt17与绿色荧光蛋白GFP的融合蛋白转化到本氏烟草中,发现其定位于质外体。这些结果表明Lt17符合效应因子的特征。2.效应因子Lt17的功能鉴定。在烟草叶片中瞬时表达Lt17,发现其能抑制flg22诱导的ROS积累和胼胝质沉积;酵母分泌系统和2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)试验结果表明其信号肽具有分泌功能;在本氏烟草叶片和桃叶片中过表达Lt17,增加了植株对辣椒疫EPZ-6438霉菌和流胶病菌侵染的敏感性。利用同源重组的方法获得了Lt17敲除突变体,发现Lt17影响病原菌的营养生长,同时降低了流胶病菌对桃枝条的致病力,表明效应因子Lt17对病原菌的营养生长和流胶病侵染具有重要作用。3.桃流胶病菌B.dothidea菌株XNHG241全基因组序列分析。利用高通量测序技术完成了XNHG241的全基因组测序,结果显示其基因组大小为48.19 Mb,基因组覆盖度约为100X,GC含量为54.22%,组装得到52个contigs。对基因组进行预测和注释共鉴定出1354个病原与宿主互作基因和446个毒力基因,并预测了可能Medicolegal autopsy的分泌蛋白、P450基因和次级代谢基因分别有866、234、551个。与已测序的15个菌株相比,发现B.dothidea的基因组大小在43.50～51.76 Mb之间。此外,对XNHG241和BDLA16-7、sdau11-99进行了共线性分析,发现XNHG241和sdau11-99的共线性更高;并分析了它们细胞器基因组之间的变异情况,包括SNP、InDel和SV分析,发现XNHG241和BDLA16-7的InDel和SV数目较多,而XNHG241和sdau1AZD22811-99之间SNPs突变基因量大。