目的:以CXC趋化因子受体6(CXCR6)为基础的免疫治疗在自身免疫性疾病中发挥着重要作用。然而,尚无小分子抑制的致病CXCR6+Th细胞用于治疗多发性硬化症的报道。黄芩素是从黄芩素中分离得到的一种黄酮类化合物,具有治疗多发性硬化的作用,但其作用机制尚不清楚。本研究拟在建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型上,揭示黄芩素抑制CXCR6+CD4细胞介导治疗自身免疫性脑脊髓炎的作用机理,为黄芩素治疗多发性硬化症的临床应用提供科学依据。方法:1.Topical antibiotics体外研究:采用MTT测定黄芩素的细胞毒性;采用Th17细胞分化实验,用ELISA法和流式细胞仪分别检测IL-17分泌的水平和IL-17A的比例。2.体内研究:采用MOG35-55建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,Knoz评分法评价黄芩素的疗效。采用HE染色和LFB染色检测和评价EAE小鼠脊髓组织的病理损伤情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MOG35-55诱导的特异性免疫应答过程中细胞因子的产生;采用Elisa法检测血清中抗MOG35-55IgG、IgG3、IgG2a水平;采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qRT-PCR)检测Th1和Th17细胞相关基因的表达,包括IL17a、Rorc和Ifng。流式细胞仪检测细胞表面标志(CD3、CD4、CD8、CXCR6JNJ-42756493体内实验剂量、CD44、CD62L、CD11b)、Treg 细胞和细胞内细胞因子(IL-17A、IFN-γ)。结果:1.体外实验发现,黄芩素在1-3μM的干预浓度下对CD4 T细胞没有产生明显的毒性,且在3μM的干预浓度下,黄芩素显著抑制了 Th1和Th17的分化。2.口服黄芩素(25 mg/kg)可明显降低EAE小鼠的发病率和临床评分,减轻EAE脱髓鞘程度,选择性显著阻断MOG35-55诱导的特异性免疫应答中IL-17A的产生(P<0.05)。ELISA法检测结果显示,黄芩素治疗组小鼠血清中抗MOG35-55的总抗体水平显著降低(P<0.01),IgG3亚型显著降低(P<0.05),而IgG2a亚型的产生明显增加(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,黄芩素治疗组小鼠Th17相关基因明显下调,其中IL1 7a和Rorc差异具有显著意义(P<0.05)。此外,流式细胞术结果显示,黄芩素还可降低效应(CD44hi CD62Llow)CD4 T细胞的比例和抑制致病性Th17细胞。此外,黄芩素可降低EAE中CXCR6+CD4和CD8细胞的比例与显著抑LBH589体外制CXCR6+Th17细胞。结论:黄芩素是一种有前途的小分子化合物,能够改善多发性硬化症状,其作用机制可能是通过抑制致病的CXCR6+CD4细胞来改善EAE。