目的本研究以蒙古族聚居New Metabolite Biomarkers地的蒙古族人群为研究对象,探讨SLC12A3基因多态性及其表达量与蒙古族原发性高血压之间的关系,并对本研究新发现的蒙古族高血压易感位点SLC12A3 rs5805进行功能验证,为此类突变造成的高血压治疗药物的开发提供新的靶点。方法(1)本研究的研究人群主要来自于2017年8月～2019年9月期间在内蒙古自治区蒙古族聚居地(正蓝旗、锡林浩特市、东乌旗、镶黄旗)采集的蒙古族高血压病例对照人群,共计335人,包括寻找更多高血压患者235人和正常对照100人。(2)本研究通过检索NCBI数据库和查阅文献两种方式对SLC12A3基因上的SNPs位点进行筛选。运用多重高温连接酶反应技术进行SNPs基因分型,使用Epidata3.0软件收集和整理数据,应用SNPStats软件SNPStats:your web tool for SNP analysis.进行SNPs等位基因、基因型与原发性高血压的关联分析,分析的遗传模型包括共显性模型、显性模型、隐性模型、超显性模型和加性模型。(3)超高速离心受试者尿液,纳米粒子跟踪分析(NTA)技术、透射电镜证实该离心产物为尿外泌体。对包含77个蒙古族高血压患者和33个正常血压受试者的病例对照人群进行3DLabel Free蛋白组测序。(4)合成SLC12A3 rs5805野生型和突变型质粒,转染29selleck GDC-09733T细胞,利用双荧光素酶报告基因实验检测SLC12A3rs5805变异是否影响NCC蛋白的表达,分别检测转染48h和72h后293T细胞的荧光强度。进行三次独立实验并计算均值,SPSS25.0软件比较两组间差异。应用G-power软件进行统计效力分析。结果(1)本研究最终纳入6个SNPs(rs2304479、rs5801、rs5802、rs5804、rs2289113和rs5805)均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),证明我们选取的研究对象是随机人群,可用于后续关联分析;(2)SNPStats软件关联分析结果显示,rs5805的GG基因型与蒙古族原发性高血压显著相关,共显性模型(OR=2.38,95%CI=1.15-4.96,P=0.04)、隐性模型(OR=2.13,95%CI=1.08-4.17,P=0.03)和加性模型(OR=1.46,95%CI=1.03-2.08,P=0.03),提示携带GG基因型的个体具有更高的高血压发生风险;然而,在高血压组和对照组,其他SNPs等位基因和基因型均未发现与蒙古族原发性高血压相关。(3)离心提取的尿样沉淀被证实为外泌体,测序结果显示高血压组上调蛋白88种,其中包含SLC12A3基因编码蛋白NCC,并且这种差异性只表现在总体人群(EH/NC Ratio=1.724,P=0.01)和女性人群(F-EH/F-NC Ratio=1.968,P=0.04)中;(4)合成rs5805野生型和突变型质粒,分别转染293T细胞,48h和72h后检测两组荧光强度,结果显示两组间的荧光强度差异具有统计学意义(P<0.05),且突变型组荧光强度均高于野生型组。结论(1)SLC12A3基因rs5805多态性与蒙古族聚居地蒙古族人群原发性高血压发生风险相关;(2)蒙古族人群高血压患者尿外泌体中NCC表达量显著高于对照组人群;(3)rs5805位点突变会影响NCC的表达量。