四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用

目的:探讨中药复方四君子汤通过调节NKG2A的表达影响自然杀伤(natural killer, NK)细胞抗结肠癌的作用。方法:分离、纯化来自健康人外周血NK细胞进行培养,分别构建人NK细胞单培、HCT116细胞单培和NK细胞与HCT116细胞共培模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR,RT-PCR)实验检测NK细胞中自然杀伤细胞2族成员A(naturaBarasertib供应商l killer group 2 member A,NKG2A)、白介素 (interleukin, IL) 15以及结肠癌细胞中组织相容性白细胞抗原E (histocompatibility leucocyte antigen E,HLA-E) mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELIKampo medicineSA)检测NK细胞中IL-15分泌;噻唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)实验筛选IL-15的适宜的实验浓度,检测四君子汤和IL-15对NK细胞活性和共培模型中HCT116细胞的活性的影响,RT-PCR实验检测四君子汤和IL-15对NK细胞中NKG2A和HCT116中HLA-E的mRNA的表达的影响;使用Monalizumab(M,Anti-NKG2A抗体)阻断NKG2A-HLA-E通路,MTT实验检测共培模型中HCT116细胞增殖情况。结果:NK细胞和HCT116细胞相互作用引起NK细胞的NKG2A和HCT116中的HLA-E mRNA表达均上调(P<0.05);IL-15的mRNA表达和分泌也增加(P<0.05);IL-15可增强 NK细胞活性Puromycin试剂和抗结肠癌作用(P<0.01),也可上调NKG2A的表达 (P<0.05);MTT实验结果显示与空白组比较,四君子汤组、四君子汤+IL-15组的NK细胞活性和抗结肠癌作用进一步增加(P<0.01),RT-PCR实验显示四君子汤组和四君子汤+IL-15组中NK细胞的NKG2A表达下调(P<0.05),共培模型中四君子汤组HCT116中的HLA-E表达下调(P<0.01);MTT结果显示与相应未加M组比较,M组与IL-15+M组HCT116细胞增殖被抑制(P<0.01)。结论:NK细胞与结肠癌细胞相互作用可引起NKG2A-HLA-E通路活化导致NK功能受损,四君子汤可抑制该信号激活从而恢复NK细胞抗结肠癌作用。