LncRNA SNHG1靶向miR-497-5p调控乳腺癌细胞化疗耐药性的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)在紫杉醇(PTX)耐药乳腺癌(BC)细胞系MCF-7中的作用及相关的调控机制。方法 选取2020年5月-2021年6月张家港市中医医院接受手术治疗的BC患者34例,分为PTX有反应者(PTX敏感)17例和PTX无反应者(PTX耐药)17例。正常人乳腺细胞株MCF-10A、人BC细胞株MCF-7、在不含PTX的完全培养基中培养MCF-7/PTX细胞系。将MCF-7/PTX细胞分为阴性对照(sh-NC)组、靶向LncRNA SNHG1的短发夹RNA(sh-LncRNA SNHG1)组、sh-LncRNA SNHG1+miR-497-5p抑制剂(in-miR-497-5p)组和sh-LncRNA SNHG1+过表达Wnt3a(oe-Wnt3a)组。RT-qPCR检测BC组织和细胞中LncRNA SNHG1、miR-497-5p和Wnt3a mRNA表达水平;根据线性公式计算50%抑制浓度(IC_(50));显微镜观察集落数量并计数;流式细胞仪分析细胞凋LY294002体内实验剂量亡情况;Western blot检测Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc蛋白水平;将miR-497-5p、miR-NC与LncRNA SNHG1-野生型(WT)、Wnt3a-WT或LncRNA SNHG1-突变型(MT)、Wnt3a-MT共同转染MCF-7/PTX细胞,酶标仪测量荧光素酶活性。将转染sh-LncRNA SNHG1或sh-NC的MCF-7/PTX细胞(5×10~5个/100μL)皮下移植到裸鼠中,检测敲低LncRNA SNHG1对PTX耐药MCF-7细胞生长的影响。结果 与PTX敏感BC组织比较,PTX耐药BC组织中LncRNA SNHG1和Wnt3a m RNA表达增加[(3.28±0.57)vs.(1.05±0.24),(2.87±0.49)vs.(1.08±0.22)],miR-497-5p表达降低[(0.42±0.12)vs.(1.07±0.29)],差异均有统计学意义(t=14.867、13.741、8.540,P均<0.05)。与MCF-10A细胞比较,BC细胞系MCF-7中LncRNA SNHG1和Wnt3a mRNA表达增加,miR-497-5p表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与MCF-7细胞比较,MCF-7/PTX细胞中LncRNA SNHG1和Wnt3a mRNA表达水平进一步升高,miR-497-5p表达进一步降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LncRNA SNHG1组MCF-7/PTX细胞中LncRNA SNHG1和Wnt3a mRNA表达水平明显降低,miR-497-5p表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+in-miR-497-5p组MCF-7/PTX细胞中miR-497-5p表达水平明显降低,Wnt3a mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+oe-Wnt3a组MCF-7/PTX细胞中Wnt3a m RNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。当PTX≥0.1μmol/L时,与sh-NC组比较,sh-LncRNA SNHG1组MCF-7/PTX细胞中细胞增殖活力显著降低,PTX的IC_(50)降低(0.761μmol/L vs. 2.220μmol/L),差异均有统计学意义(P均<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+in-miR-497-5p组或sh-LncRNA SNHG1+oe-Wnt3a组MCF-7/PTX细胞中细胞增殖活力显著升高,PTX的IC_(50)升高(1.440或1.680μmol/L vs. 0.761μmol/L),差异均有统计学意义(P均<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LncRNA SNHG1组MCF-7/PTX细胞克隆形成数量、Wnt3a、β-catenin、c-Myc蛋白水平明显降低,细胞凋亡率显著升高,差异均CB-839采购有统计学意义(P均<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+in-miR-497-5p组或sh-LncRNA SNHG1+oe-Wnt3a组MCF-7/PTX细胞克隆形成数量、Wnt3a、β-catenin、c-Myc蛋白水平明显升高,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。双荧光素酶报告显示,miR-497-5p可能与LncRNA SNHG1或Wnt3a的3'-UTR结合;与miR-NC转染细胞比较,miR-497-5p转染细胞中LncRNA SNHG1-WT或Wnt3a-WT的相对荧光素酶活性降低,差异均有统计学意义(tHp infection=18.124、22.170,P均<0.05)。体内实验证实,敲低LncRNA SNHG1可明显降低移植耐PTXMCF-7细胞裸鼠的肿瘤体积和重量(t=13.065、15.092,P均<0.05)。结论 敲低LncRNA SNHG1可以抑制MCF-7细胞对PTX的耐药性,且此过程可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。