1.目的:基于尿液代谢组学探讨脾肾亏虚证系膜增生性肾炎(Mesangial Proliferative Glomerulo-Nephritis,Ms PGN)患者与正常人代谢物表达差异,探讨其与脾肾亏虚证Ms PGN患者中医证候积分、24h尿蛋白定量的相关性。2.方法:收集5例Ms PGN患者和5例正常人的晨起中段尿,经液相色谱-质谱(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)分析,筛选差异性代谢物及代谢通路,分析差异性代谢物与脾肾亏虚证Ms PGN患者中医证候积分、24h尿蛋白定量的相关性。3.结果:3.1筛选出32个差异代谢物(P<0.05,VIP>1),其中上调12个,下调20个,主要涉及脂质代谢、氨基酸代谢、三羧酸循环等代谢途径。上调的代谢物包括硫酸盐(Sulfate)、焦谷氨酸(Pyroglutamic acid)、烟酰胺(Niacinamide)、硫酸雄甾酮(Androsterone sulfate)、氨基异丁酸((R)-beta-Aminoisobutyric acid)等;下调的代谢物包括溶血磷脂胆碱(Lyso PC(22:1(13Z)/0:0))、磷脂酸(PA(0:0/16:0))、异柠檬酸(Isocitric acid)、四氢醛固酮3Β-葡萄糖苷酸(Tetrahydroaldosterone-3-gl ucuronide)、柠檬酸(Citric acid)、11b,17a,21-三羟基孕烯醇酮(11b,17a,21-Trihyd roxypreg-nenolone)等。3.2筛选出10条代谢通路(P<0.05),包括癌症中的胆碱代谢、类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢、柠檬酸循环、戊糖和葡萄糖醛酸的相互转化等代谢通路,其中癌症中的胆碱代谢(Choline metabolism in cancer)通路差异显著(P<0.01),涉及到的差异性代谢产物为溶血磷脂胆碱(Lyso PC(22:1(13Z)/0:0))、磷脂酸(PA(0:0/16:0))。3.3相关性分析发现,Ms PGN患者Lyso PC(22:1(13Z)/0:0)表达量与脾肾亏虚证中医证候积分呈负相关,即表达量随着脾肾亏虚证临床表现的加重而减少,PA(0:0/16:0)表达量与中医证候积分无相关性。Lyso PC(22:1(13Z)/0:0)、PA(0:0/16:0)表达量随着24h尿蛋白定量增加而减少,均呈负相关。4.结论:4.1脾肾亏虚证MsPGN患者与正常人的代谢物在尿液代谢中存在差异,主要涉及脂质代谢、氨基酸代谢、三羧酸循环等代谢途径。4.2 Ms PGN患者Lyso PC(22:1(13Z)/0:0)的表达量与脾肾亏虚证临床表现呈负相关;Lyso PC(22:1(13Z)/0:0)、PA(0:0/16:0)的表达量与24h尿蛋白定量呈负相关。1.目的:综合网络药理学和代谢组学,建立Ms PGN大鼠模型,经参地颗粒干预,探讨参地颗粒治疗Ms PGN作用机制。2.方法:将30只大鼠随机均分为正常组、模型组和治疗组,每组各10只。模型组和治疗组通过Thy-1抗体注射复制Ms PGN大鼠模型。抗体注射7天后,尿蛋白试纸检测阳性为模NSC125066抑制剂型成功标志。造模成功2周后予4g/kg·d参地颗粒水溶液灌胃,每天1次,连续给药12周,分别于第0周、4周、8周、12周用代谢笼收集大鼠24小时尿液,尿液收集管下端置于冰面或冰袋中,分别用于检测24小时尿蛋白定量,部分用于代谢组学检测;灌胃12周结束后,腹主动脉采血检测血肌酐,取肾脏组织用于病理学观察。尿液样本经LC-MS分析,筛选差异性代谢物及代谢途径。综合代谢组学与网络药理学,探讨其参地颗粒治疗Ms PGN的作用机制。3.结果:3.1 24h尿蛋白定量:模型组、治疗组大鼠较正常组大鼠24h尿蛋白定量明显升高(P<0.05);经参地颗粒干预第4周、8周、12周后,治疗组较模型组大鼠,24h尿蛋白定量明显下降(P<0.05)。3.2血肌酐:12周后,各组大鼠血肌酐Scr较基线水平无明显变化(P>0.05)。3.3肾脏病理结果:HE及PAS染色提示正常组毛细血管开放良好,未见系膜细胞增殖及系膜基质增多。模型组大鼠可见弥漫性系膜细胞增生,基质明显增多。治疗组大鼠系膜细胞增殖及系膜基质增多较模型组明显减轻。3.4经代谢组学筛选,共鉴定出4个经参地颗粒干预后显著变化的差异性代谢物。其中下调的差异代谢物四氢生物蝶呤(Tetrahydrobiopterin,BH4)、血栓素B2(Thromboxane B2,THB2)、溶血磷脂胆碱(Lyso PC(17occult hepatitis B infection:0/0:0))、溶血磷脂胆碱(L yso PC(18:0/0:0)),经参地颗粒干预后出现显著上调。3.5经网络药理学筛选,参地颗粒治疗Ms PGN潜在靶点为共38个,其物质基础包括山奈酚(kaempferol)、肉豆蔻酮(Myricanone)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)等;GO富集分析发现生物学功能主要涉及细胞增殖、氧化应激等生物学过程;KEGG富集到143条信号通路,与代谢组学相关的主要涉及脂质与动脉粥样硬化信号通路、TNF信号通路、AGE-RAGE信号通路、癌症的胆碱代谢通路等通路;构建P PI网络,整合基因靶点发现AKT1、CASP3、PTGS2等14个靶点是参地颗粒治疗Ms PGN的核心靶点。3.6selleckchem MLN4924代谢组学筛选出16条代谢通路,网络药理学富集到143条信号通路,综合网络药理学及代谢组学,共识别出癌症中的胆碱代谢(Choline metabolism in cancer)1条共同通路,涉及到的差异代谢物为Lyso PC(17:0/0:0)、Lyso PC(18:0/0:0)。4.结论:4.1参地颗粒可降低Ms PGN模型大鼠尿蛋白水平,减轻肾脏病理损伤。4.2参地颗粒可能通过上调BH4、TXB2、Lyso PC(17:0/0:0))、Lyso PC(18:0/0:0)等差异性代谢物表达量,干预炎症反应、细胞凋亡、细胞增殖等生物学过程,从而改善Ms PGN的病理损伤。4.3综合代谢组学和网络药理学分析,参地颗粒治疗Ms PGN的作用机制可能是通过干预MAPK信号通路,从而上调Lyso PC(17:0/0:0)、Lyso PC(18:0/0:0)水平,减轻系膜细胞增殖而发挥作用。