研究目的:肾脏纤维化是评估肾功能衰竭的重要指标,对于糖尿病肾病的各个阶段都具有重要意义。FASN作为脂肪酸合成酶,可以驱动脂肪的重新生成并介导促纤维化信号。MicroRNA-544作为mmedicinal marine organismsicroRNA 379-656基因簇中的重要成员,有研究报道其能够影响成纤维细胞的分化进而影响纤维化过程。但microRNA-544在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用尚未有报道。本研究旨在探究microRNA-544是否通过靶向FASN调控糖尿病肾病的肾脏纤维化,为此类疾病的防范与救治谋求新靶点。研究方法:1.使用实时定量PCR以及Western blot技术分别检测db/db小鼠(一种瘦素受体被敲除的糖尿病肾病小鼠模型)以及野生型小鼠(WT对照组)肾组织中microRNA-544以及FASN的表达情况。2.通过生物信息学软件预测FASNm RNA3’UTR与microRNA-544的结合位点。3.通过双荧光素酶报告系统验证microRNA-544对FASN的靶向调控。4.使用Western blot技术分别检测在SV40MES13细胞中转染microRNA-544mimics以及microRNA-544inhibitors 24小时后FASN的表达情况。5.db/db小鼠分别转染microRNA-544 agomir和mPLX5622研究购买icroRNA-544 antagomir,使用实时定量PCR技术检测各组小鼠肾脏microRNA-544的表达情况,使MK-2206使用方法用免疫组化染色观察各组间肾脏纤维化及纤维连接蛋白的表达情况,使用Western blot技术对各组纤维连接蛋白及IV型胶原的表达情况进行定量分析。研究结果:1.相较于对照组,在糖尿病肾病小鼠肾脏中microRNA-544表达减少,而FASN表达增多。2.MicroRNA-544可以靶向结合FASNm RNA3’UTR,并实现对FASN转录后翻译的调控。3.在SV40MES13细胞中,microRNA-544的表达增多可以使FASN的表达减少,而microRNA-544的表达减少可以使FASN的表达增多。4.在糖尿病肾病小鼠模型中,microRNA-544的表达增多使肾脏纤维连接蛋白及IV型胶原的表达减少,肾脏纤维化减轻;而microRNA-544的表达减少使肾脏纤维连接蛋白及IV型胶原的表达增多,肾脏纤维化加重。研究结论:MicroRNA-544可以通过负向调控FASN的表达,减轻糖尿病肾病的肾脏纤维化。这一发现为糖尿病肾病的肾脏纤维化的治疗提供了新的潜在靶点。