本研究对泰和乌鸡的性状特征和独特化学成分进行探究,基于机器视觉、元素分析、蛋白组学等研究方法,以白羽肉鸡及其他品种乌鸡作为对照,筛选泰和乌鸡“优形优质”质量标志物,为药用泰和乌鸡相关标准的制定奠定基础。(1)泰和乌鸡黑色素含量测定及“乌色”量化模型建立根据前期文献调研,本文分别选择泰和乌鸡“乌色”作为其“优形”指标、黑色素作为其“优质”指标,对不同周龄(3、7、16、32、48周龄)泰和乌鸡的不同组织(胸皮、腿皮、胸肉、腿肉、胸骨、腿骨、趾骨)进行乌色和黑色素的测定。为了使“乌色”指标能客观表达,将人眼识别颜色的主观经验转为客观数值,本文采用色差仪对不同泰和乌鸡样本进行色度值数据采集,为泰和乌鸡外观颜色的质量控制提供一个客观准确的定量指标。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定黑色素浓度,结果显示32周龄泰和乌鸡腿骨组织黑色素浓度最低,48周龄泰和乌鸡骨组织黑色素浓度最高,且黑色素浓度与色差仪亮度值L*呈极显著负相关。在此基础上,利用人工智能和机器学习BP-ANN和PLSR方法建立了泰和乌鸡“乌色”量化模型,即可通过色差仪测定色度值对泰和乌鸡黑色素含量进行准确预测。因此,选择黑色素作为候选质量标志物。(2)泰和乌鸡矿物质元素含量测定本文采用ICP-MS对不同周龄(3、7、16、32、48周龄)泰和乌鸡的不同组织(胸皮、腿皮、胸肉、腿肉、胸骨、腿骨、趾骨)进行矿物质元素含量的测定,矿物质元素包括Mg、Ca、Cr、Fe、Cu、Zn、Se。结果显示,不同周龄、不同组织泰和乌鸡的矿物质元素含量存在显著差异,其中骨组织中矿物质元素浓度较高,皮肤组织和肌肉组织中矿物质元素浓度较低,且腿骨、胸骨、趾骨组织中钙元素浓度随周龄增加呈上升趋势,其他组织中各元素浓度随周龄增加均呈下降趋势。因此,选择钙元素作为候选质量标志物。(3)泰和乌鸡蛋白质量标志物筛选定量和定性蛋白质组研究通常被用于比较不同组织和发育阶段动物蛋白质丰度的变化,在此基础上可预测差异蛋白质的功能。基于前期实验结果,本文首先以白羽肉鸡作为对照,采用无标签定量蛋白质组(label-free)分析方法,分别比较了泰和乌鸡骨组织、皮组织和肉组织和白羽肉鸡骨组织、皮组织和肉组织的蛋白表达水平;并对泰和乌鸡进行体外模拟胃肠消化,筛选获得胃肠消化产物中存在的泰和乌鸡特异表达蛋白作为候选质量标志物;在此基础上,参考泰和乌鸡传统功效、现代药理活性相关文献,获得4个可能与泰和乌鸡药理作用相关的蛋白,这些蛋白分别是蛋白磷酸激酶α1(Phosphorylase b kinase regulatory subunit,PHKA1)、胰淀粉酶A2(Alpha-amylase,AMY2A)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、过氧化还原酶3(PerE-616452试剂oxiredoxin 3,PRDX3)。(4)泰和乌鸡“优形优质”质量标志物的鉴定本文选择了7个具有代表性的其他品种乌鸡(雪峰乌鸡、略阳乌鸡、朝那乌鸡、盐津乌鸡、德化黑鸡、无量山乌鸡、江山乌鸡)进行黑色素、钙元素、蛋白磷酸激酶α1(Phosphorylase b kinase regulatory subunit,PHKA1)、胰淀粉酶A2(Alpha-amylase,AMY2A)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)蛋白含量的测定,并与泰和乌鸡进行比较。结果显示,泰和乌鸡骨组织中黑色素、钙元MG132生产商素、蛋白磷酸激酶α1(PhosphFebrile urinary tract infectionorylase b kinase regulatory subunit,PHKA1)含量均显著高于其他品种乌鸡,黑色素、钙元素和蛋白磷酸激酶α1可作为泰和乌鸡“优形优质”的质量标志物,为进一步建立药用泰和乌鸡质量标准奠定基础。