目的:拟探讨生物钟基因BMAL1抑制鼻咽癌增殖、转移的分子机制。方法:1、BMAL1在鼻咽癌组织及细胞系中的表达及意义研究:免疫组化检测41例鼻咽慢性炎症组织和71例鼻咽癌组织中BMAL1的表达。PCR和Western blot分别检测鼻咽癌细胞株和人永生化鼻咽上皮细胞NP69中BMAL1的表达水平。2、BMAL1对鼻咽癌细胞增殖、侵袭转移及上皮-间质转化的影响研究:平板克隆、CCK8及裸鼠皮下成瘤实验检测BMAL1对鼻咽癌细胞体外、体内增殖能力的影响;划痕愈合、Transwell侵袭迁移实验检测BMAL1对鼻咽癌细胞体外侵袭迁移能力的影响;荧光活体成像、HE染色判断裸鼠尾静脉注模型转移情况。PCR和Western blot检测BMAL1对鼻咽癌细胞中EMT相关指标在转录和蛋白水平表达的影响。3、BMAL1抑制鼻咽癌增殖、转移的分子机制研究:利用生物信息学技术,ChIP实验,双荧光素酶报告基因实验,免疫荧光共定位实验及Co-IP等一系列分子生物学手段验证其机制。结果:1、BMAL1在鼻咽癌组织及细胞系中的表达研究结果显示:(1)BMAL1在鼻咽癌组织和细胞中表达降低;(2)BMAL1在鼻咽癌组织中的表达与鼻咽癌患者M分期有关(p=0.006)。2、BMAL1对鼻咽癌细胞增殖、侵袭转移及上皮-间质转化的研究结果显示:(1)过表达BMAL1可抑制鼻咽癌细胞的增殖能力、侵袭helminth infection及迁移能力,敲低BMAL1则相反;(2)过表达BMAL1可抑制鼻咽癌细胞的EMT。3、BMAL1抑制鼻咽癌增殖、转移的机制研究结果显示:(1)在TGF-β1启动子区存在5个BMAL1的结合位点,BMAL1可以直接结合在TGF-β1启动子区域,能够抑制TGF-β1的转录活性;(2)过表达BMAL1可抑制TGF-β1/Smads通路活性;(3)在重组人TGF-β1的诱导下,鼻咽癌细胞https://www.selleck.cn/products/Lapatinib-Ditosylate.html增殖能力增强,TGF-β1/Smads信号通路活性增强,鼻咽癌细胞发生EMT,细胞侵袭和迁移能力增加;过表达BMAL1后,TGF-β1不再促进TGF-β1/Smads信号通路活性,EMT受到抑制,细胞侵袭和迁移能力减弱;(4)在鼻咽癌细胞及组织中BMAL1与EZH2存在共定位关系及相互作用,BMAL1结合EZH2后可抑制TGF-β1转录及蛋白表达;(5)BMAL1联合TGF-β1在预测鼻咽癌是否转移上具有一定的诊断价值。结论:BMAL1在鼻咽癌中表达下调,其表达水平与鼻咽癌的发展及转移有关。BMAL1可抑制鼻咽PF-6463922癌细胞的增殖、上皮-间质转化及侵袭转移能力,其机制与抑制TGF-β1/Smads信号通路活性有关。推测可能成为鼻咽癌新的预后标志物和治疗靶点。