结直肠癌是临床常见恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率逐年增高。大多数患者早期症状不典型,且临床缺乏敏感性高的血清学标记物筛查结直肠癌,多数患者确诊时已到晚期,治疗手段单一且预后较差。外泌体是一种直径大小约40-160nm的微小囊泡,其中富含多种蛋白质、miRNA(micro RNA)、DNA等物质,参与肿瘤发生发展且广泛存在于体液循环中,其被膜结构可以作为“保护膜”让其内的生物活性因子保持相对稳定状态。基于此特点使外泌体miRNAs作为肿瘤标记物应用于临床成为可能。通过课题组前期基因测序结果发现miR-221-3p在结直肠癌细胞中的表达升高,但未进行大样本验证,同时查阅文献发现血浆miR-221-3p在胰腺癌、胃癌中表达升高,由此猜想miR-221-3p通过外泌体分泌到血液循环而成为潜在的诊断标记物,目前血浆外泌体miR-221-3p对结直肠癌的筛查及临床意义的研究少有报道。目的:明确结直肠癌组织miR-221-3p及结直肠癌血浆外泌体miR-221-3p的表达情况,并BIBW2992核磁分析血浆外泌体miR-221-3p对结直肠癌的筛查价值及其与临床病理特征的关系。方法:收集2022年2月至2022年11月于承德医学院附属医院消化内科及胃肠外科就诊者50例为结直肠癌组,收集空腹静脉血,行外科手术切除的结直肠癌及癌旁配对组织23例,且均经结肠镜及病理结果初次诊断为结直肠癌,同期收集体检科健康者47例作为健康组,收集空腹静脉血。通过试剂盒法提取循环血浆外泌体,通过透射电镜、粒径分析及Western Blot法鉴定外泌体;通过RT-q PCR方法检测结直肠癌及癌旁组织miR-221-3p和血浆外泌体miR-221-3p的表达情况,化学发光免疫分析法检测血浆CEA的表达情况;同期收集入组人群临床基本信息及病理结果,结合实验结果进行统计学分析。结果:1.结直肠癌及癌旁组织中miR-221-3p的表达情况selleckchem JNJ-42756493结直肠癌组织中miR-221-3p的表达远高于癌旁组织(P<0.05),结果具有统计学差异。2.血浆外泌体的鉴定通过透射电镜扫描、粒径分析及Western Blot检测对提取的血浆外泌体进行鉴定,电镜扫描结果提示外泌体呈典型的囊泡状结构,粒径分析显示平均粒径大小在124.6nm,粒径主峰107nm,Western Blot检测结果其特异性蛋白CD9、CD63均有表达。3.血浆外泌体miR-221-3p在结直肠癌组及健康组中的表达情况结直肠癌组血浆外泌体miR-221-3p的表达水平高于健康组(P<0.05),差异具有统计学意义。4.血浆外泌体miR-221-3p、血浆CEA及二者联合对结直肠癌的诊断价值血浆外泌体miR-221-3p对结直肠癌的诊断ROC曲线下面积为0.740,敏感性为0.760,特异性为0.640;血浆CEA对结直肠癌的诊断ROC曲线下面积为0.787,敏感性为0.680,特异性为0.830;血浆外泌体miR-221-3p、血浆CEA二者联合对结直肠癌的诊断ROC曲线下面积为0.818,敏感性为0.890,特异性为0.680。5.血浆外泌体miR-221-3p在各不同临床病理特征组别间的差异表达情况结果显示,血浆外泌体miR-221-3p在TNM分期中Ⅲ-Ⅳ期的表达高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)。TNM分期取决于浸润深度、淋巴结转移及远处转移三个因素。进一步分析显示,外泌体miR-221-3p在有淋巴结转移的Ⅲ-Ⅳ期患者表达高于无淋巴结转移的Ⅰ-Ⅱ期患者(P<0.05);同样,其在有远处转移的Ⅳ期患者表达高于无远处转移的前3期患者(P<0.05);但外泌体miR-221-3p在以浸润深度、肿瘤部位及肿瘤大小分类的不同组别间无表达差异(P>0.05)。6.血浆外泌体miR-221-3p的表达与临床病理特征的相关性分析通过Spearman相关性分析,结直肠癌组血浆外泌体miR-221-3p与淋巴结转移、远处转移呈正相关(P<0.05),与肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度无相关性(P>0.05)。结论:1.血浆外泌体miR-221-3p与CEA联合检测提高comorbid psychopathological conditions了敏感性,对结直肠癌筛查具有一定价值;2.血浆外泌体miR-221-3p高表达可能提示转移,对评估肿瘤分期有一定价值。