第一部分:中性粒细胞胞外诱捕网调控lncRNA MIR503HG激活NF-KB/NLRP3通路促进非小细胞肺癌转移的功能及机制研究目的:肿瘤转移是导致癌症相关发病率和死亡率居高不下的主要原因,也是肿瘤治疗失败的主要原因。然而,目前医疗手段仍然对肿瘤转移束手无策,治疗结果差强人意。因此,进一步深入阐明非小细胞肺癌(non-small cell lung cBioactive Cryptidesancer,NSCLC)转移分子机制,对于NSCLC的防治具有重要意义。目前研究表明中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)与NSCLC转移相关,然而具体机制仍不明确,本研究将深入探讨NETs促进NSCLC转移的具体机制,通过采用转录组芯片筛选出参与NETs促进NSCLC转移的关键lncRNA及相关信号通路,通过体内外实验阐明NETs刺激下关键lncRNA及其下游信号通路在NSCLC转移中的功能及具体作用机制。方法:检测健康者和NSCLC患者外周血NETs的表达;NSCLC患者肿瘤组织及癌旁组织NETs表达。提取并鉴定NETs,给予NETs刺激NSCLC细胞,检测NSCLC细胞侵袭、迁移、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的变化。收取NETs刺激NSCLC细胞的RNA样本,送检RNA样本行转录组芯片高通Secretase抑制剂量检测,生信分析差异表达的lncRNAs和mRNAs分子以及基因富集的相关信号通路,筛选出参与NETs促进转移的关键lncRNA MIR503HG及下游信号通路。进一步采用qRT-PCR验证转录组芯片结果,接着通过UCSC和NCBI在线数据库了解lncRNAMIR503HG的基本信息;CPC 2.0、CPAT和lncATLAS在线数据库分析MIR503HG编码蛋白能力和亚细胞定位;并通过核质分离技术验证MIR503HG的亚细胞定位。GEPIA在线数据库分析MIR503HG在NSCLC患者肿瘤组织及癌旁组织中的表达;并通过临床样本验证,分析DolutegravirMIR503HG表达与NSCLC患者转移风险。构建MIR503HG过表达NSCLC细胞株,给予NETs刺激后检测NSCLC细胞侵袭、迁移、EMT变化;采用小鼠肺转移瘤模型体内实验检测NETs对过表达MIR503HG的NSCLC细胞转移的影响。检测NETs刺激NSCLC细胞后NF-κB/NLRP3炎性小体信号通路及活性氧(re…