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背景原发性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称肝癌)是全世界最严重的的恶性肿瘤之一,具有发病率高、死亡率高、难以根治、预后差等特点,严重危害人类健康。化疗作为传统肿瘤治疗方法,在抑制肿瘤生长,延长患者生存时间上应用广泛。然而,单一化疗存在毒副作用大,易诱导肿瘤多药耐药等不足,影响治疗效果。局部给药、纳米载药系统是药物治疗的发展趋势,同时多模式协同抗肿瘤疗法也有利于减轻药物毒性,增强疗效。雷公藤红素(CEL)是中药雷公藤中最主要的抗肿瘤活性单体成分之一。现代药理研究表明,CEL具有广谱、高效的抗肿瘤活性,对多种肿瘤细胞具有良好的抑制作用,同时可逆转机体多药耐药。然而其水溶性差,溶出低,生物利用度低及一定肝肾毒性影响了其临床转化。纳米载药系统、局部给药等技术手段,有助于提高雷公藤红素生物利用度,增效减毒。目的本研究拟使用CEL作为模型药物,高分子聚合物聚多巴胺(PDA)作为光热剂,结合纳米技术,设计两类具有光热-化疗协同作用的纳米给药体系,以期克服CEL的不足,弥补单一模式的缺陷,起到增效减毒的作用。方法(1)制备及表征:首先制备了一种无载体纳米给药体系,以泊洛沙姆188为稳定剂,采用沉淀法制备雷公藤红素自组装纳米粒(CEL-NS),通过氧化聚合法表面修饰聚多巴胺(PDA),同时单因素考察了修饰量,得到光热修饰的载药纳米粒子(PDA@CEL-NS)。通过纳米粒径仪、扫描电子显微镜、X-射线衍射仪、红外光谱仪对其粒径大小、形貌特征、晶体特征、红外图谱等进行表征,对其储存稳定性及不同生理介质稳定性进行了考察,进行了体外药物释放实验以及体外光热升温实验评价其释放性能及体外光热升温性能。之后,制备了以金属有机骨架材料(MOFs)为载体的纳米给药体系。首先通过单因素考察及正交实验设计对UIO-66、ZIF-8与MIL-101(Fe)三种MOFs的制备工艺进行优选并比较,从三种常见Th1 immune response纳米MOFs中筛选出最宜的一种作为药物载体,经过吸附法负载CEL,氧化聚合法表面修饰PDA,单因素考察载药工艺及PDA修饰比例,构建载药量高、光热性能好的光热修饰载药MOFs(PDA@MOFs-CEL),对其粒径大小、形貌特征、晶体结构、热重变化、载药量、体外释放及体外光热性能等理化性质进行表征;此外,制备以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和HPMC为基质的温敏凝胶,纳米粒子分散其中制得金属有机骨架/温敏凝胶复合体系(PDA@MOFs-CEL-GEL),对其胶凝温度、黏度变化及体外溶蚀情况进行考察。(2)体外细胞学评价:以HepG2肝癌细胞为模型,采用CCK-8法评价纳米粒子生物安全性、细胞毒性及光热联合化疗细胞药效,DAPI染色法观察纳米粒子对细胞核形态的影响,细胞划痕损伤修复实验探讨纳米粒子对细胞迁移的影响,流式细胞仪测定纳米粒子对细胞凋亡的影响。(3)体内药效评价:建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,直接观察皮下注射温敏凝胶的滞留情况;通过红外热像仪评价纳米粒子在荷瘤小鼠体内的光热升温效果及瘤内滞留情况;近红外荧光活体成像法监测纳米粒子在荷瘤小鼠体内的生物分布及滞留时间;通过瘤内注射给药,监测瘤体积及瘤重评价光热-化疗协同抗肿瘤药效;取小鼠血清,谷丙/谷草转氨酶检测试剂盒初步评估纳米粒子的肝毒性;药效试验后取小鼠主要脏器进行HE染色,组织病理学评价纳米粒子体内系统毒性。结果(1)体外表征结果表明,制备的PDA@CEL-NS为类球形纳米粒子的水分散溶液,粒径大小189.67±2.08 nm,分布均匀,载药量高达60.33±1.09%。其在考察期间具有较好的稳定性,体外释放表明PDA@CEL-NS可显著增强药物溶出,累计释放率可达60%,体外光热升温研究表明其具有浓度依赖性升温,光热稳定性较好。体外细胞学评价表明,PDA@CEL-NS可浓度依赖性抑制肿瘤细胞增殖,IC50(以CEL计)为2.238 μg/mL,药效强于游离药物(ILBH589临床试验C50值为2.609μg/mL),经808 nm激光处理后,PDA@CEL-NS的肿瘤细胞抑制效果显著增强;DAPI染色实验证实纳米粒子可影响细胞核形态,具有凋亡诱导性,细胞划痕损伤实验表明纳米粒子可抑制细胞迁移,细胞凋亡实验表明诱导细胞凋亡是其细胞毒性机制之一。体内研究证实PDA@CEL-NS在小鼠体内具有较好的光热升温效果,升温效率随着时间推移而降低,表明了纳米粒子被逐步代谢,同时体内药物分布显示纳米粒子肿瘤滞留效果优于原药,药物在体内主要分布于肿瘤组织,在其它主要脏器分布较少,体现了纳米制剂和瘤内给药的优越性。抗肿瘤药效结果表明,PDA@CEL-NPLX3397供应商S外加激光组抑瘤率可达92%,是单独PDA@CEL-NS组的1.57倍,是游离雷公藤红素药物的2.73倍,表现出纳米制剂良好的“增效”作用以及光热-化疗双模式协同抗肿瘤的优越性。最后小鼠血清肝毒性生化指标测定及组织病理学考察,证明了纳米制剂对小鼠主要脏器基本无毒副作用,且相较于原药具有一定肝保护作用。(2)制备了三种常见MOFs纳米载体UIO-66、ZIF-8、MIL-101(Fe),通过粒径大小比较及制备难易比较,筛选出ZIF-8作为纳米载体,制备CEL纳米给药体系,进而PDA表面修饰制备载药量高、光热性能好的PDA@ZIF-8-CEL纳米粒子。制备的PDA@ZIF-8-CEL纳米粒子的粒径305.8±8.4 nm,形貌为类球形,形状规则,结晶度好,载药量约为23.47±0.26%。体外释放研究证实其具有良好的缓释效果,且经808 nm激光处理后,体外光热升温性能好,光热稳定性高。制备了以泊洛沙姆和HPMC为基质的温敏凝胶,胶凝温度29℃,将纳米粒子分散于空白凝胶中即可得PDA@ZIF-8-CEL温敏凝胶复合体系(PDA@ZIF-8-CEL-GEL),胶凝温度基本未改变。体外细胞实验评价了PDA@ZIF-8-CEL纳米粒子细胞毒性。实验剂量下,ZIF-8与PDA@ZIF-8具有良好的生物安全性,PDA@ZIF-8-CEL对HepG2细胞半数抑制浓度为2.078 μg/mL,显著优于游离药物,PDA@ZIF-8-CEL加近红外激光处理可进一步增强抗肿瘤效果,体现了良好的光热协同治疗作用。此外,DAPI染色实验、细胞划痕实验及细胞凋亡实验证实PDA@ZIF-8-CEL可通过诱导细胞凋亡诱导细胞核破裂变形及抑制细胞迁移殖。动物体内研究表明,瘤内注射温敏凝胶后,具有良好的瘤内滞留效果,通过直观观察、瘤内光热升温、体内药物分布实验均可得到验证,纳米粒子主要分布于肿瘤组织,在其他主要脏器分布较少,在肿瘤组织滞留时间长,注射后第5天经激光处理,仍可升温至50℃以上。药效试验证实,PDA@ZIF-8-CEL-GEL外加激光组抑瘤作用显著优于其他组,治疗结束后,有两只小鼠肿瘤完全消失,抑瘤率高达97%,显示出温敏凝胶复合体系良好的促进光热-化疗协同作用发挥的功效。取药效试验后小鼠血清,测定肝毒性相关生化指标,结果显示纳米粒子可显著降低血清中谷丙转氨酶含量,表明纳米粒子相较于原药对肝损伤情况有所改善,具有“减毒”作用。组织病理学研究也证实了纳米给药体系对小鼠主要脏器基本无毒副作用。结论本文基于中药活性单体雷公藤红素,结合纳米技术,构建了有无载体两类纳米给药体系,用于光热-化疗双模式协同抗肿瘤。首先构建了聚多巴胺修饰雷公藤红素自组装纳米给药体系,可增强药物溶出,克服了单一模式的不足,体现了光热治疗与化疗双模式抗肿瘤的相辅相成;其次,基于瘤内长效滞留考虑,设计了金属有机骨架/温敏凝胶复合纳米给药体系,将纳米粒子与温敏凝胶有机结合,实现了局部长效滞留,促进了光热-化疗协同作用的发挥,实现了增效减毒的目的。通过纳米技术,将光热治疗、化疗双模式结合抗肿瘤,为肿瘤治疗提供新思路,为雷公藤红素抗肿瘤应用提供一定基础。

糖基转移酶是一类负责生物分子糖基化修饰的酶类。在植物由水生向陆生以及由低等植物向高等植物进化的过程中,糖基转移酶家族的成员数量不断扩张,反映了这类酶在高等植物适应陆地生活环境中的重要性。在植物糖基转移酶超家族中,负责次生代谢小分子物质(包括激素)糖基化的那部分酶,通常是以UDP-糖作为糖供体,所有介导这类修饰反应的酶被称作UDP-糖基转移酶(UGTs)。UGTs能够改变小分子代谢物的结构、生物活性、稳定性等,深刻影响着植物次生代谢物的结构以及功能的复杂性,进而影响植物的生长发育和环境响应。然而,由于UGT家族内成员数量众多,功能复杂多样,目前对这类酶大多数成员的功能尚不清楚。本论文主要针对拟南芥中的两个糖基转移酶基因UGT92Amaterno-fetal medicine1和UGT72D1进行了研究,从多个方面揭示了它们参与植物非生物胁迫的适应性调节,并且发现它们以相反的方式发挥作用。依据相关芯片数据预测,拟南芥的糖基转移酶基因UGT92A1和UGT72D1可能参与植物对盐和渗透胁迫的响应过程。为了研究其逆境响应特性,通过qRT-PCR技术分析了这两个基因在高盐和渗透胁迫下的表达情况。结果发现UGT92A1的表达被诱导上调,而UGT72D1被诱导下调。进一步克隆了UGT92A1和UGT72D1的cDNA并构建了过表达载体,通过遗传转化分别获得了拟南芥的高表达纯合株系;同时,利用CRISPR/Cas9技术也获得了两个突变体纯合株系。利用这些突变体和过表达材料,分获悉更多析了UGT92A1和UGT72D1基因对于植物应对高盐和渗透胁迫的贡献。当对过表达株系和突变获悉更多株系进行盐和甘露醇等逆境胁迫处理时,发现UGT92A1过表达株系在种子萌发、子叶转绿和主根生长等方面表现出比野生型更强的耐逆性表型,而其突变株系则对逆境胁迫处理更加敏感。相比于UGT92A1基因,UGT72D1的转基因株系却表现出相反的表型,表现为其过表达株系对逆境胁迫更加敏感,而其突变株系则耐性更强。进一步地,通过土壤培养体系研究了各转基因株系对胁迫的响应,发现UGT92A1过表达株系的耐旱性和耐盐性比野生型增强,而UGT72D1的过表达株系却对干旱更加敏感。两个基因的突变体都与它们的过表达株系表现出了相反的表型。这些实验结果证明了糖基转移酶基因UGT92A1和UGT72D1在植物应对盐和渗透胁迫的过程中发挥重要作用,但是两个基因的贡献却是相反的。为了探究UGT92A1和UGT72D1参与植物非生物胁迫耐性的生理学基础,测定了UGT92A1和UGT72D1过表达株系和突变株系在盐和甘露醇处理下的一系列生理学指标。通过DAB和NBT细胞学染色实验发现,UGT92A1过表达株系清除活性氧的能力比野生型增强,突变株系清除活性氧能力减弱。与此相反,UGT72D1突变株系增强了活性氧清除能力,而其过表达株系清除活性氧能力较弱。考虑到脯氨酸可以调节植物细胞的渗透平衡,丙二醛会对植物细胞质膜造成损伤,它们的含量水平将在一定程度上反映植物耐受逆境胁迫的能力。因此,分别测定了在盐和甘露醇处理下UGT9A1和UGT72D1过表达株系和突变株系的脯氨酸和丙二醛含量。发现UGT92A1过表达株系中脯氨酸含量较野生型高,丙二醛含量较野生型低;而UGT72D1过表达株系中则是脯氨酸含量较野生型低,丙二醛含量较野生型高。两个基因的突变体都与它们的过表达株系表现出了相反的生理学变化。最后,分别检测了UGT92A1和UGT72D1过表达株系和突变株系在逆境胁迫下DREB2A、RD22、COR47和CAT1等耐逆相关基因的表达变化。发现这些基因在UGT92A1过表达株系中上调倍数比野生型更高,而在UGT72D1过表达株系中上调倍数比野生型更低。在UGT92A1和UGT72D1的突变体中,耐逆相关基因的表达水平与它们的过表达株系都出现了相反的变化。这些实验数据表明,在逆境胁迫下,UGT92A1和UGT72D1转基因株系的生理学变化与上述观察到的耐逆表型变化是一致的。通过以上研究,不仅证明了糖基转移酶基因UGT92A1和UGT72D1参与植物非生物胁迫耐性的功能,并且揭示了这两个糖基转移酶基因以相反的方式发挥作用。论文结果丰富了糖基转移酶基因家族的研究,也为抗逆基因的进一步研究和应用奠定理论基础。但由于时间关系,对这两个基因编码的糖基转移酶UGT92A1和UGT72D1的作用底物和分子机制还缺乏了解,仍需进一步研究。

蜡样芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌,其分布广泛,且具有一定的致病性。不同的蜡样芽孢杆菌携带有不selleck PLX4032同的毒力因子集,这直接决定了蜡样芽孢杆菌致病性的差异。研究和探讨毒力因子分布以及具体毒素的生物活性有助于对蜡样芽孢杆菌病采取更科学的防控。本课题组从猝死牛的脾脏中分离到一株牛源致病性蜡样芽孢杆菌,该菌株的生理、生化、耐药性、致病力和毒力基因分布已在前期工作中进行了初步研究。本研究旨在进一步分析和探讨牛源致病性蜡样芽孢杆菌溶血素BL(由Hbl B、Hbl L1和Hbl L2三亚基组成)的生物学活性。本研究通过生物信息学方法预测了溶血素BL三亚基的理化特性、跨膜结构域和信号肽序列,在原核表达系统中将其重组表达,并对成功表达的蛋白进行了纯化和部分生物学活性的检点击此处测。结果表明,牛源致病性蜡样芽孢杆菌溶血素BL可以在molecular pathobiology原核表达系统中成功表达和纯化,该菌的溶血素BL拥有溶血性、细胞毒性、很好的免疫原性以及对小鼠具有一定的免疫保护性。本研究成功重组表达了溶血素BL三亚基,并探究了溶血素BL的生物学活性。为进一步揭示牛源致病性蜡样芽孢杆菌溶血素BL的作用机制和开发针对牛源致病性蜡样芽孢杆菌病的诊断和防治方法奠定了理论基础。

目的：探讨circRNA＿09505(circ09505)是否通过介导M2型巨噬细胞极化失衡参与强直性脊柱炎（AS）的发病机制。方法：采用高通量ciwaning and boosting of immunityrcRNA测序分析确定AS患者和健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）中差异表达的circRNA。将SKG小鼠随机分为对照组、sh-NC组和sh-circ09505组，每组10只。各组小鼠通过腹腔注射3 mg可德胶以建立AS模型。对sh-circ09505组小鼠尾静脉注射circ09505敲减慢病毒，以检查circ09505敲减对AS进展的影响。体外考察circ09505过表达或敲减对巨噬细胞极化影响，并通过流式细胞术分析M1和M2型巨噬细胞比例。结果：circ09505是AS患者PBMC中上调最显著的circRNA。sh-circ09505组小鼠脊柱免疫细胞浸润和软骨破坏较sh-NC组减轻，脊柱炎评分显著降低（P<0.01）。与sh-NC组相比，sh-circ09505组中炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低（P<0.01），并且脊柱组织中CD11b+CD40+细胞数目显著降低（P<0.01）,CD11b+CD206+细胞数目显著增加（P<0.01）。流式细胞术分析表明，circ09505过表达降低了M2巨噬细胞比例（P<0.01），而circ09MLN8237浓度505敲减则增加了M2巨噬细胞比例（P<0.01）。circ09505过表达增加了LPS+IFN-γ处理组的M1巨噬细胞比例（P<0.01），而circ09505敲减则降低了M1巨噬细胞比例（P<0.01）。结论：circ09505通过促Tofacitinib浓度进M1巨噬细胞极化和抑制M2巨噬细胞极化来加重AS小鼠的脊柱炎症损伤。

黏液层覆盖在黏膜上方，是人体的免疫防线,其在利用静电和疏水作用高效吸附并滞留外来粒子的同时也阻碍了载药纳米粒子的穿透,这给基于纳米载体的跨黏膜疾病的治疗带来困难.本文制备了一种近红外光驱动的具有黏液惰性的纳米马达,用于快速穿透黏液层进行黏膜递送.该纳米更多马达以表面氨基化的介孔二氧化硅纳米粒子作为主体,将两性离子聚合物聚羧基甜菜碱甲基丙烯酸酯(pCBMA)接枝于其上得到黏液惰性的纳米粒子MSNs-pCBMA;随后,通过将金沉积在MSNs-pCBMA半表面上得到Janus型纳米马达JMSNs-pCBMA,其可以在近红外光的照射下定向运动.透射电子显微镜、傅里叶变换红外光谱、 X射线能谱和热重分析等表征结果表明合成了JMSNs-pCBMA,水合粒径为(329±14) nm, pCBMA的接枝量为0.114 g/g.光热响应实验表明, JMSNs-pCBMA溶液在近红外光照射下具有良好的升温能力.此外,黏液渗透实验表明，p CBMA的接枝和近红外光驱动均提高了纳米粒子在黏液中的渗透能力,其中JMSNs-pExtra-hepatic portal vein obstructionCBMA在近红外光照射4 h后黏液渗透率达到了52.4%,表观渗透系数达到21.9×10-6 cm/s,且在黏液中的运动速度为3.28μ确认细节m/s.体外细胞实验表明, JMSNs-pCBMA具有良好的生物相容性,可在体外被Calu-3细胞高效摄取.本文制备了一种具有快速穿透黏液层能力的纳米马达,为跨黏液层递送载体的构建提供了新思路,将推动纳米马达在黏膜递送中的应用.

地球自转导致24 h周期环境从而产生昼夜节律,几乎所有生物体都具有内源性的计时机制。昼夜节律调控分子机制最重要的发现是转录翻译反馈环(transcriptional translational feedback loop,TTFL)的分子调控Microlagae biorefinery模式。多个生物钟基因参与调节昼夜节律的转录翻译反馈环路。在果蝇中,TTFL中重要的一环是依赖于异二聚体转录因子复合物CLOCK(CLK):CYCLE(CYC)在白天与基因启动子区域特定元件结合,以激活反馈抑制基因period(per)和timeless(timDolutegravir)的转录。积累后,PER和TIM形成异二聚体,从细胞质转移到细胞核以抑制CLK:CYC介导的夜间转录活性。尽管某些生物钟分子因物种而异此网站,但这种基于转录翻译的负反馈回路的基本框架在几乎所有生物中都是保守的。在哺乳动物中,CLK:BMAL1异二聚体激活反馈抑制因子Per1/Per2和Cry1/Cry2。积累后,PER和CRY易位至细胞核以抑制CLK:BMAL1活性。但是,PER和CRY2对CLK:BMAL1的转录激活能力抑制的一些细节尚未完全了解,比如PER和CRY2是一定要形成复合物还是可以单独行使抑制功能?二者在昼夜节律调控中是否存在差异?鳞翅目昆虫的内在时钟分子机制与果蝇有所差异,其生物钟机制介于典型的果蝇和哺乳动物之间。本研究聚焦鳞翅目昆虫小菜蛾昼夜节律的分子机制,建立了小菜蛾昼夜活动节律监测系统,利用CRISPR/Cas9技术对生物钟基因Pxper和Pxcry2进行单基因和双基因敲除,利用体外体内基因功能研究和时间序列转录组测序分析等手段,重点阐明小菜蛾生物钟基因Pxper和Pxcry2介导的昼夜节律调控差异。主要研究内容和结果如下:(1)参考果蝇昼夜活动监测系统,建立小菜蛾昼夜活动节律行为监测体系。光照黑暗循环(LD)条件下,雄虫和雌虫都表现出夜间活动模式,活动在熄灯后1h内达到顶峰,在开灯后迅速下降。在26℃条件下,小菜蛾雌虫和雄虫在完全黑暗(DD)条件下的自由活动节律监测比较困难。在20℃条件下,雄虫更适合用于研究小菜蛾自由活动的昼夜节律。(2)分析比对小菜蛾基因组数据库,克隆小菜蛾关键生物钟基因Pxper和Pxcry2,并对其表达和体内外功能进行分析。发现小菜蛾存在1个PER样基因(Pxper)和3个CRY样基因(Pxcry1、Pxcry2和6-4 photolyase)。克隆测序确定了小菜蛾的Pxper和Pxcry样基因的准确序列信息,发现Pxper和Pxcry2基因在小菜蛾头部表达均存在明显节律变化,但节律表达的模式并不一致。Px CRY2而非Px PER或其他CRY样蛋白表现出对CLK:BMAL1转录激活能力的强抑制。小菜蛾Px PER的功能可能是物种特异性的,并不完全类似果蝇Dm PER的功能。Pxcry1而非Pxcry2或6-4 photolyase的表达恢复了果蝇Dmcry~b突变体对光刺激的反应。(3)构建小菜蛾Pxper和Pxcry2单基因突变体,Pxper和Pxcry2双基因突变体,对突变体的昼夜节律行为进行分析。确认果蝇“无节律”突变体Dmper~(01)的Q464残基在小菜蛾Px PER中的Q382位置是保守的。构建了小菜蛾Pxper基因突变体(Pxper-KO),对应Q382附近的1个碱基对缺失导致翻译提前终止。构建了靶向Pxcry2基因1号外显子区域的突变体(Pxcry2-KO),其为2个碱基对缺失导致缺失处附近翻译提前终止。通过杂交和分子鉴定筛选的方式成功制备Pxper和Pxcry2双突变体Pxper Pxcry2-d KO。昼夜活动节律和羽化节律分析表明,Pxper和Pxcry2突变均导致LD条件下关灯后的活动高峰消失,Pxcry2缺失还导致整体活动量下降和活动节律消失。Pxcry2在DD条件下维持小菜蛾的内源活动和羽化节律至关重要。(4)利用转录组测序分析生物钟基因Pxper和Pxcry2在小菜蛾头部介导的基因表达节律调控差异。LD条件下:对照组小菜蛾头部有1098个节律表达基因,其中大部分基因的节律变化依赖Pxper和Pxcry2的正常功能。Pxper-KO明显影响节律基因表达的相位,而Pxcry2-KO不影响。转录组检测的对照组小菜蛾Pxper和Pxcry2表达节律与q PCR检测的结果一致,Pxcry2的表达相位相比Pxper发生了接近4 h的推迟。不同核心生物钟基因的表达节律或表达水平在Pxper-KO或Pxcry2-KO表现多样,只有部分基因的表达符合PER:CRY2复合体抑制CLK:BMAL1的转录激活能力的模型预测,提示Px PER和Px CRY2对其它核心生物钟基因的调控存在显著差异。大部分核心生物钟基因在Pxper和Pxcry2相关突变体中的表达节律均消失,而Pxcry2在这些突变体中均能维持节律表达,但是节律表达振幅(r AMP)非常明显下降,并且表达相位也发生改变。小菜蛾大脑中的节律基因涉及光转导信号、核苷酸切除、脂肪酸延长和剪接体等多种生物过程,这些生物过程的节律变化同时依赖Pxper或Pxcry2的正常功能。DD条件下:对照组小菜蛾头部的节律表达基因与其在LD条件下的节律表达基因重叠非常低,仅为78个。随着进入DD时间的延长,小菜蛾头部核心生物钟基因的表达节律会非常明显地减弱或消失。综上所述,本课题建立了小菜蛾昼夜活动节律行为监测体系,鉴定表征了小菜蛾关键生物钟基因Pxper和Pxcry2并构建了突变体,昼夜节律行为和转录组分析揭示了小菜蛾Px PER和Px CRY2参与生物钟基因转录翻译反馈环路的可能调控机制。小菜蛾生物钟基因Pxper和Pxcry2介导的昼夜节律行为和分子调控存在差异,并不只是简单的原先假设的PER:CRY2形成复合物一起抑制CLK:BMAL1的转录激活能力,存在更复杂的调控机制。本研究也为夜行性动物生物钟转录翻译反馈调控机制提供一个新的参考模型。

目的：比较辨证针刺与艾司唑仑治疗慢性失眠的临床疗效及对认知功能的影响。方法：将90例慢selleck Bemcentinib性失眠患者随机分为针刺组和药物组，各45例。针刺组采用辨证针刺治疗，穴取四神聪及双侧神门、三阴交，并结合辨证配穴，每日治疗1次，连续治疗6 d后休息1 d，共治疗4周；药物组采用睡前口服艾司唑仑片治疗，每次1片，共治疗4周。比较两组患者治疗前后匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）、简易精神状态BIBW2992体内实验剂量检查量表（MMSE）、蒙特利尔认知评估量表（MoCA）及听觉词语记忆测验（AVMT）评分，并评定临床疗效。结果：治疗后，两组患者PSQI各项评分及总分均较治疗前降低（P<0.05），且针刺组低于药物组（P<0.05）；两组患者MMSE、MoCA评分及AVMT各项评分均较治疗前升高（P<0.0Medial pivot5），且针刺组高于药物组（P<0.05）。针刺组总有效率为80.0%(36/45)，高于药物组的53.3%(24/45,P<0.05)。结论：辨证针刺可改善慢性失眠患者的睡眠质量和认知功能，疗效优于艾司唑仑。

目的：观察万寿菊水提物对三氧化二砷（As_2O_3）处理的小鼠胰岛素瘤β细胞（NIT-1）存活率、凋亡以及活性氧水平的影响。方法：以NIT-1细胞为受试对象，使用不同浓度As_2O_3和万寿菊提取物以不同的联合方式处理细胞24 h，以CCK-8法检测细胞存活率，以Hoechst染色法检测细胞凋亡，利用荧光探针法检测活性氧（ROS）水平。结果：在0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 mg/L As_2O_3的处理下，NIT-1细胞的存活率依次是100%、104.05%、109.43%、92.47%、77.36%、49.44%、22.08%，呈逐渐下降的趋势，差异有统计学意义（P<0.05selleck产品）；在0、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28 mg/mL万寿菊水提物处理后，NIT-1细胞的存活率分别为100.00%、104.05%、109.43%、92.47%、77.36%、49.44%、22.08%，呈现先上升后下降的趋势，差异有统计学意义（P<0.05）;0.08 mg/mL万寿菊水提物与As_2O_3共处理的细胞存活率均低于砷单染和万寿菊单染组，差异有统计学意义（P<0.05）;3.20 mg/L As_2O_3染毒细胞2 h后给予0.08 mg/mL万寿菊水提物处理的细胞存活率为66.53%，高于砷单染组（56.54%）;As_2O_3组的Erastin采购细胞凋亡率为21.33%，万寿菊水提物后处理可有效逆转As_2O_3引起的细胞凋亡（17.17%）;ROS检测结果显示，万Enfermedad renal寿菊水提物组，As_2O_3组，联合处理组分别为“0”组的0.97、1.12和1.06倍，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：万寿菊水提物在低浓度下可促进NIT-1细胞的增殖，高浓度则降低细胞存活率，万寿菊水提物可在一定程度上逆转As_2O_3引起的细胞存活率下降，可能与清除细胞内的活性氧进而抑制细胞凋亡有关。

目的 建立一套基于多重PCR-连接酶检测反Z-VAD-FMK纯度应（ligase detection reaction,LDR）技术的近交系大鼠单核苷酸多态性（single tetrapyrrole biosynthesisnucleotide polyAurora Kinase抑制剂morphisms,SNP）检测方案。方法 在5个品系的SPF级近交系大鼠1～20号常染色体和X染色体上共选取40个大鼠SNP位点，将SNP位点随机分为4组，构建基于多重PCR-LDR技术的近交系大鼠4组SNP位点基因检测方案。采用本方案检测国内另两家大鼠供应商的9个常用大鼠品系。最后，通过第三方实验室对不同DNA聚合酶的扩增效果进行比对，验证本方案的可行性。结果 用所构建的近交系大鼠SNP遗传检测方案测试5个大鼠品系时，各样本的所有位点均得到了良好的扩增结果。采用本方案检测国内另两家大鼠供应商的9个常用大鼠品系时也得到了良好的扩增结果，40个SNP位点在每个近交系大鼠中均为纯合。用3种来源不同的DNA聚合酶同时检测相同大鼠DNA样本的结果显示，Multiplex PCR Kit、AmpliTaq Gold?360 DNA聚合酶、Platinum Ⅱ Taq热启动DNA聚合酶在第1～3组SNP位点均有扩增产物的电泳峰，其中Platinum Ⅱ Taq热启动DNA聚合酶在第4组SNP位点中少了一个扩增产物的电泳峰。另外，不同实验室间的比对结果显示，相同扩增体系的检测结果一致。结论 基于多重PCR-LDR技术成功建立了一套覆盖所有常染色体与X染色体的大鼠SNP检测方案，该方法的稳定性和重复性俱佳。

聚集诱导发光(AIE)分子具有优异的抗光漂白性、生物相容性和高发射强度等优点,能够从根本上解决传统有机荧光分子存在的聚集诱导猝灭(ACQ)问题。AIE荧光材料的兴起,为分析检测、生物成像等领域提供了新的选择。其中,三苯胺作为经典的AIE分子骨架,易于引入多种官能团,合成丰富多样的三苯胺衍生物,本论文中,设计并合成了两种基于三苯胺骨架的AIE分子,用于致病菌的检测和光动力杀灭。具体研究内容如下:1.设MLN4924配制计合成了含有邻羟基苯甲醛结构的三苯胺衍生物TPA-OH,该分子具有激发态分子内质子转移(ESIPT)性质和AIE特性。在TPA-OH分子的羟基上引入β-半乳糖苷酶的特异性识别基团,进一步合成了探针TPA-gal,ESIPT过程从而被阻断,导致荧光关闭。TPA-gal能够特异性地识别β-半乳糖苷酶,被水解为TPA-OH,ESIPT过程重新恢复,体系呈现荧光开启现象。通过荧光强度的变化进而实现对β-半乳糖苷酶的特异性定量检测,体系荧光强度与β-半乳糖苷酶浓度在5-250 U/L及250-1000U/L分别存在良好的线性关系,检出限低至3.64 U/L。同时,使用噬菌体偶联的磁珠(p MBs)对大肠杆菌O157:H7进行分离和富集,并裂解大肠杆菌O157:H7释放出β-半乳糖苷酶,进而实现大肠杆菌O157:H7的特异性定量检测。该方法还能有效削弱检测基质的影响,Medical translation application software成功用于水样及牛奶中10-10~6 CFU/m L大肠杆菌O157:H7的定量检测,体系荧光强度与大肠杆菌O157:H7浓度的对数均存在良好的线性关系。探针TPA-gal易于制备,具有良好的选择性、灵敏度以及较好的实际样品检测能力。2.设计合成了基于三苯胺骨架的AIE分子TTQ-PF_6,该化合物具有强D-π-A结构,大的斯托克斯位移,能够有效地产生活性氧。成功将TTQ-PF_6用于光动力抗菌,通过扫描电镜验证了抗菌效果,并在一定程度上实现了对细菌的选择性荧光成像。此外,MTT法细胞毒性实验表明分子TTQ-PF_6对小鼠巨噬RaLY2157299体内w细胞的毒性较低,进而建立了感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的小鼠模型。经过TTQ-PF_6光动力治疗的小鼠恢复速度提高(伤口相对面积～10%),且效果略优于治疗MRSA感染的抗生素万古霉素Van(伤口相对面积～13%),显示出优良的体内抗菌活性。利用不同原理设计合成的基于三苯胺骨架的AIE分子,均表现出优良的光物理性质,成功用作酶活性、细菌检测的荧光探针以及光动力杀菌材料,为其在分析检测、生物医学以及环境中的应用提供了良好的基础,具有广阔的应用前景。