乙肝病毒X基因突变的人肝癌细胞稳转株的构建及其生物学行为变化

目的 构建稳定表达乙肝病毒X基因(HBx)突变(C1653T、T1753C)的HepG2、Huh7细胞株,探讨突变点对肝癌细胞生物学行为的影响。方法以含HBx的pLVX-HBx-IRES-tdTomato质粒为模板,点突变合成pLVXHBx C1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBx T1753C-IRES-tdTomato慢病毒质粒。双酶切和Sanger测序的方法鉴定重组质粒的准确性。空白HepG2、Huh7细胞为对照组,pLVX-HBx-IRES-tdTomato、pLVX-HBx C1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBx T1753C-IRES-寻找更多tdTomato慢病毒液感染HepG2、Huh7细胞,0.6μg/mL嘌呤霉素筛选单克隆细胞进行扩大培养。免疫染色和Western blot法检测X蛋白(HBX)的表达鉴定稳转株的构建;Pollutant remediationCCK-8法测定细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞中EMT相关信号分子的表达情况。两组间进行独立样本t检验。结果 双酶切和Sanger测序结果显示重组慢病毒质粒酶切后片段大小正确,点突变位置及碱基替换正确,成功构建pLVX-HBx-IRES-tdTomato、pLVXHBx C1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBx T1753C-IRES-tdTomato慢病毒质粒。免疫染色及Western Blot结果显示转染HBx及突变型的HepG2、Huh7细胞均有HBX表达,空白对照组均无HBX表达,成功获得稳定表达HBx、HBx C1653T和HBx T1753C的HepG2、Huh7细胞稳转株。增殖实验表明HBx及突变型均较对照组明显促进肝癌细胞的增殖(P<0.01),而HBx C1653T突变较HBx进一步促进肝癌细胞的增殖(P<0.05)。同时HBx C1653T突变明显上调N-cadherin的表达、下调E-cadherin的表达,促进了上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition, EMT)MAPK抑制剂的发生。结论 成功获得稳定表达HBx、HBx C1653T和HBx T1753C的人肝癌细胞HepG2、Huh7细胞稳转株;HBx C1653T突变可导致肝癌细胞的增殖能力增强及EMT发生。

中国被毛孢醇提物通过MAPK/NF-κB通路双向调控巨噬细胞的免疫功能研究

目的 利用巨噬细胞和小鼠模型,探究中国被毛孢醇提物(Hirsutella sinensis alcohol extract,HSAE)的免疫调控功能和机制。方法 CCK-8法检测HSAE对RAW264.7巨噬细胞活力的影响;通过血清溶血素实验明确HSAE对小鼠免疫功能的影响;利用qRT-PCR技术检测炎症相关因子表达,探究HSAE对RAW264.7细胞静息状态下的免疫促进功能和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的炎症激活状态下的炎症抑制作用;通过Western blotting检测HSAE对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和核因子-κB(nucleaBlebbistatin价格r factor-κB,NF-κB)信号通路的调控作用。结果 HSAE能够显著增加巨噬细胞的吞噬功能和小鼠血清溶血素水平(P<0.01、0.001);HSAE能PLX-4720采购够激活静息状态下的巨噬细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,Tnf)、干扰素β1(interferon beta 1,Ifnb1)、CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10,Cxcl10)的m RNA表达(P<0.01、0.001),而在LPS诱导的炎症激活的巨噬细胞中,HSAE可显著抑制上述炎症因子的m RNA表达水平(P<0.05、0.01、0.001);此外,HSAE显著增强静息状态下巨噬细胞中MAPK信号通路关键蛋白细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38和NF-κB信号通路p65的磷酸化水平(P<0.05、0Recidiva bioquímica.01、0.001),并在炎症激活后抑制相关蛋白的磷酸化(P<0.01、0.001)。结论HSAE对小鼠巨噬细胞具有双向免疫调节作用,即静息状态下的免疫促进作用和炎症激活状态下的免疫抑制作用,该双重调控作用可能与其调控MAPK和NF-κB免疫信号通路相关。

BODIPY设计合成及其抑制肠道菌群的应用研究

阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)作为一种慢性的神经退行性疾病,丧失记忆力、无法进行日常生活和行为上的改变是其主要特征。肠道菌群失调产生的淀粉样蛋白会引发神经炎症和神经细胞凋亡,损害复杂的大脑功能,进一步影响AD病理。抗菌光动力疗法是一种潜在的治疗方式,具有安全、有效、可重复给药、生物相容性强、可协同作用等优点;氟硼二吡咯(BODIPY)是一类重要的新兴荧光探针,不仅具有强大的光稳定性和可调的光物理性质,而且可被灵活地修饰以适应多种功能用途。基于这些突出特性,BODIPY在生物应用方面显示出巨大的潜力,已被开发应用于广泛的尖端抗菌光敏剂。本论文设计合成了系列BODIPY,SB203580供应商研究其抑制肠道细菌的机理,揭示BODIPY通过灭菌抑制AD的机制。课题以AD的“肠道微生物群学说”为理论基础,以诱导AD的肠道细菌为核心靶点,以发挥抗菌作用的小胶质细胞为辅助,一方面研究新型高效的BODIPY光动力灭菌光敏剂,另一方面在此基础上进一步研究BODIPY和小胶质细胞协同高效抑制肠道细菌诱导的神经Single Cell Sequencing毒性,从而达到对AD进行预防和治疗的效果。本文主要创新成果如下:(1)在这项工作中,共合成了五种BODIPY光敏剂5MeBDP、5MeBDP-I、4MeBDP、4MeBDP-I、PhBDP。通过在BODIPY母核的2和6位上缀入两碘原子,利用结构活跃的旋转能级增加非辐射跃迁的可能性,从而提升单线态氧产生效率;在BODIPY母核的meso位引入苯环可以改变BODIPY的π共轭体系,使其最大吸收峰发生红移,并在可见光的激发下发生光响应,生成活性氧,从而获得更好的光动力治疗效果。(2)评估五种光敏剂产单线态氧的能力和抗菌特性,以确定其在抗菌光动力疗法中的潜在应用。研究结果表明,含碘和苯环的5MeBDP-I、4MeBDP-I和PhBDP具有更强的产单线态氧能力,同时其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌活性也相对较高,这说明引入碘原子和苯环对提高其转动能级和增加非辐射跃迁的概率起到关键作用。(3)利用牛津杯法抑菌试验证实小胶质细胞BV-2对9个浓度梯度的金黄色葡萄球菌和7个浓度梯度的大肠杆菌具有拮抗作用;BV-2对两种细菌(10~8~10~9 CFU/m L)的抑制浓度为6.25×10~4~1.25×10~5个/m L,对大肠杆菌的抑制效率最高,具有良好的抑菌性能;通过对细菌做扫描电镜,观察到BV-2分泌的溶菌酶不可逆地损坏了大部分细菌的细胞膜,致使细菌死亡。采用CCK-8法来评价两种菌对BV-2的抑制和毒性,随着菌液浓度的降低,BV-2的细胞活力逐渐上升;此外,扫描电镜可直观地看到菌液孵育的BV-2胞体受刺激后外形发生变化,随着菌液浓度的升高,细胞表面附着的细菌数量增多,表明BV-2与细菌两者的相互抑制作Dorsomorphin分子式用对剂量具有明显依赖性。通过Doseresp线性拟合分析,发现金黄色葡萄球菌相比于大肠杆菌的细胞毒性更强,说明对大肠杆菌的抑制效率更高;荧光成像趋势辅助表明两种菌液的细胞毒性与浓度基本上成正比。(4)应用抗菌光动力疗法和小胶质细胞BV-2对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的灭活效果,研究BODIPY与小胶质细胞BV-2的协同灭菌效应。实验结果显示BODIPY与小胶质细胞具有良好的生物相容性;小胶质细胞联合光诱导抗菌实验中,BODIPY的加入促进小胶质细胞对细菌的直接吞噬摄取和细胞内杀伤,同时BODIPY对细菌的杀伤作用存在明显的剂量依赖性,小胶质细胞的加入缩小BODIPY对于革兰氏阳性/阴性细菌抗菌效率的差异。两者联合大幅提升抗菌效率,为预防和治疗AD提供实验依据和新的研究方向。

明目逍遥颗粒防治原发性青光眼视神经损害的临床研究

目的 观察明目逍遥颗粒保护眼压控制稳定的原发性青光眼患者(肝郁血虚证)视神经的临床疗效。方法 纳入2016年11月—2019年1月中国中医科学院广安门医院眼科诊治的肝郁血虚型原发性青光眼患者72例(144只眼),以随机数字表法分为试验组和对照组,每组各36例(72只眼)。试验组予明目逍遥颗粒口服,对照组予安慰剂口服。2组均治疗6个月。分别于治疗前、治疗后3个月和6个月检测受试者的视野平均缺损(MD)、晚期青光眼干预研究(AGIS)计分、P点个数、杯盘比(C/D)、最佳矫正视力(BCVA)、眼压和中医症候评分,并做统计分析。结果 2组治疗前,以下各指标均无统计学意义(P>0.05)。(1)BCVA和眼压:治疗前后比较及治疗后组间比较,2组在BCVA和眼压方面均无统计学意义(P>0.05)。(2)视野指标:对照组治疗后MD较治疗前增加,差异有统计学意义(t=2.768,P=0.008)。治疗后2组间比较,试验组MD较对照组减少,差异有统计学意义(t=2.012,P=0.047)selleckchem STM2457。试验组治疗后AGIS总分较治疗前减少,差异有统计学意义(t=2.114,P=0.039)。治疗后2组间比较,试验组AGIS总分较对照组减少,差异有统计学意义(t=2.010,P=0.047)。试验组治疗后P点总数较治疗前减少,差异有统计学意义(t=2.070,P=0.043);对照组治疗后P点总数较治疗前增加,差异有统计学意义(t=3.110,P=0.000)。治疗后2组间比较,试验组P点总数较对照组减少,差异有统计学意义(t=2.587,P=0.011)。(3)C/D:治疗前后比较及治疗后组间比较,2组在C/D方面均无统计学意义(P>0.05)。(4)中医症状积分:2组治疗后中医症状积分均较治疗前减少,差异均有统计heterologous immunity学意义(PLX4032纯度t_(试验组)=6.169,P=0.000;t_(对照组)=3.101,P=0.004)。治疗后2组间比较,试验组中医症状积分较对照组减少,差异有统计学意义(t=4.302,P=0.000)。结论 明目逍遥颗粒可改善眼压控制稳定的原发性青光眼患者(肝郁血虚证)的视野敏感度,减少视野局部损害,有较好的视神经保护作用,同时能够调整机体情志状态。

大中微量元素配施对雪茄烟叶生理特性及产质量的影响

为探究大中微量元素配施对雪茄烟叶生理特性和产质量的影响。本试验于2021-2022年在四川省德阳市什邡市师古镇洛阳村进行,以德雪1号为试验材料,研究了CK(T1)、CK+Mg(T2)、CK+S(T3)、CK+Mg+S+Zn(T4)、CK+Mg+S+Mn(T5)、CK+Mg+S+B(T6)、CK+Mg+S+Zn+Mn+B(T7)7个大中微量元素配施处理对雪茄烟叶光合特性、碳氮代谢、膜脂过氧化特性及发酵后烟叶化学成分、物理特性、感官质量与风格评价和经济学性状的影响。结果如下:1、不同处理烟叶叶绿素和herpes virus infection类胡萝卜素含量随生育期的推进均呈先上升后下降的变化趋势,且大多数时期各大中微量元素配施处理叶绿素和类胡萝卜素含量均高于CK;全生育期内不同处理雪茄烟叶净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和气孔导度(Gs)均呈先增高后降低的变化,而胞间CO_2浓度(Ci)整体呈上升趋势,且各配施处理于移栽后50d时增速或含量均较CK有所降低。处理间比较,T7处理烟叶质体色素含量、净光合速率、蒸腾速率和气孔导度均最高,胞间CO_2浓度最低,T4处理次之。2、各处理烟叶淀粉酶(AL)活性、中性转化酶(NI)活性、总糖和还原糖含量随生育期的进行均呈先升高后降低的变化规律。同一时期各配施处理AL和NI活性均明显高于CK,烟叶总糖含量均高于CK,还原糖含量始终表现为T7>T4>T3>T2>T6>T5>T1www.selleck.cn/products/ferrostatin-1,且各配施处理与CK间差异显著。不同处理烟叶硝酸还原酶(NR)和谷氨酰胺合成酶(GS)活性随时间的增加呈先上升后下降趋势,烟碱含量呈上升趋势,而总氮含量呈下降趋势。同一测定时期,各处理烟叶NR和GS活性均以T7最高,T4、T3、T2、T6、T5处理次之,CK最低;而同一时期各配施处理烟叶总氮含量均显著低于CK,且CK处理烟碱含量始终保持在较高水平。3、随着烟叶生长发育的进行,各处理超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先升高后降低变化,过氧化物酶(POD)活性和丙二醛(MDA)含量呈上升变化,而过氧化氢酶(CAT)活性整体上则呈一直降低趋势。各大中微量元素配施处理烟叶SOD、POD和CAT活性,除T6处理酶活性在移栽后40d时低于CK,但差异不显著外,其余各配施中微量元素处理均显著高于CK;而除移栽后70d时,其余时期各配施处理烟叶MDA含量均低于CK。T7和T4处理烟叶抗氧化酶活性较高,且MDA含量一直处于较低水平,烟叶膜脂过氧化程度较轻。4、通过对发酵后不同大中微量元素处理烟叶常规化学成分、矿质元素、多酚、有机酸和中性致香成分含量的比较:(1)大中微量元素配施能显著提高发酵后烟叶两糖、淀粉、钾和氯含量,显著降低烟碱、总氮和蛋白质含量,烟叶氮碱比、钾氯比适宜;而各配施处理烟叶矿质元素含量,除S元素外,Mg、Zn、Mn、B含量均显著高于CK。以T7处理各化学成分含量最为适宜、比值最为协调以及矿质元素含量最高。(2)各大中微量元素配施处理烟叶绿原酸、芸香苷和莨菪亭含量均较CK有所增加。以T7处理绿原酸、芸香苷和莨菪亭含量最高,烟叶内含物质转化充分,烟叶颜色转深,雪茄烟叶色泽和香气状况改善。(3)大中微量元素配施处理均不同程度地提高了烟叶中8种有机酸的含量,处理间差异显著,但有机酸的组成和含量处理间存在明显差异。草酸、富马酸和苹果酸含量以T7最高;T5处理丙二酸和T2处理丁二酸含量均显著高于其余各处理,而柠檬酸含量则以CK最高,T7处理最低;十六酸含量除CK外,其余各处理均未检测到,油酸含量以CK最高,显著高于各配施处理。(4)大中微量元素配施明显提高了发酵后烟叶类胡萝卜素降解产物、类西柏烷类降解产物、叶绿素降解产物和中性致香物质含量。处理间比较,T3处理发酵后烟叶类胡萝卜素降解产物、螺岩兰草酮、藏花醛、愈创木酚、其它类香气物质及中性致香成分总量最高;T7处理茄酮含量最高,中性致香物质总量、棕色化反应产物和中性致香物质总量(除去新植二烯)含量积累适宜。5、各大中微量元素配施处理烟叶叶质重、拉力和叶片厚度均高于CK,叶片含梗率则显著低于CK,而烟叶平衡含https://www.selleck.cn/products/Bleomycin-sulfate.html水率除T6处理低于CK,且两者间无显著差异外,其余各配施处理均显著高于CK。以T7处理烟叶整体表现最好,烟叶拉力值与平衡含水率最高,叶质重与叶片厚度适中,含梗率较低,雪茄烟叶可加工性最优。6、大中微量元素配施能明显改善烟叶感官质量,降低烟叶杂气,且烟叶雪茄风格和香韵特征得到进一步彰显。整体来看,T7处理表现较优,其雪茄风格特征较显著,以豆香为主体香韵,辅以蜜甜和焦甜香韵;烟气浓度较浓,香气量较足,杂气小,甜润感稍欠,燃烧性较好,灰色白。7、大中微量元素配施可以改善雪茄烟叶经济性状,提高经济效益。T7和T4处理烟叶的均价、产值和产量均最高,烟叶茄衣比例以T7处理最优。

小麦雄性不育突变体NWMS1的分子遗传机制及其在群体改良中的应用

小麦是世界上最重要的粮食作物之一,人工创制的小麦雄性不育突变体对小麦生产具有重要意义。本研究利用化学诱变剂EMS处理小麦品系“盛农1”,获得了一个可以稳定遗传的小麦雄性不育突变体系,命名为NWMS1,表现为花药发育异常,小孢子败育。研究内容主要包括4个方面:一是对突变体NWMS1进行表型鉴定;二是对突变体NWMS1进行遗传分析和基因定位研究;三是对突变体NWMS1进行花粉败育的分子调控机制解析;四是建立了基于小麦雄性不育系NWMS1的小麦群体改良技术体系。主要研究结果如下:1、突变体NWMS1的表型鉴定与盛农1相比,突变体NWMS1的农艺性状大多相似,但发育进程平均延迟一周;突变体NWMS1的叶尖从幼苗期开始出现椭圆形和浅黄色的表型,可作为鉴定雄性不育植株的形态学标记。突变体NWMS1花药的药室中可以观察到明显的花粉粒,但花粉活性、育性极Infected fluid collections低,雄性不育彻底,自交结实率为零。突变体NWMS1和盛农1的花器官发育从孢子组织分生期,逐渐呈现差异。突变体NWMS1的减数分裂进程基本正常,小孢子精核逐渐降解消失,花粉粒为椭圆形,有严重的质壁分离现象,无淀粉粒,一些自噬体在大液泡的边缘出现。突变体NWMS1在二核小孢子期发生细胞凋亡最终导致了雄性不育。因此,突变体NWMS1属于二核小孢子败育类型,花粉败育始于单核小孢子早期;花粉粒塌陷、质壁分离和淀粉粒缺失是异常小孢子的三个典型特征。2、突变体NWMS1的遗传分析突变体NWMS1的雄性不育表型与染色体结构变异无关。分离群体的后代表型分离比为1:1,为显性核雄性不育基因控制。突变体NWMS1是一个新型雄性不育突变体,突变体NWMS1雄性不育表型的遗传方式为单基因显性遗传,且突变基因位点位于2BS染色体上15.52 Mb(78111874 bp..94031598 bp)的区段内,预测基因Traes CS2B01G120200为NWMS1的候选基因。3、突变体NWMS1花粉败育的分子调控机制解析选择突变体NWMS1和盛农1的幼穗或花药,共三个时期进行RNA-seq:花药发育早期(S1)、减数分裂期(S2)、二核小孢子期(S3),在S1-NWMS1 vs.WT、S2-NWMS1 vs.WT和S3-NWMS1 vs.WT共3组样本对中,分别鉴定出1402、170和7658个DEGs。DEGs的大多数基因与营养运输和代谢有关。K-means类聚分析显示共有9条代谢途径被认为是与雄性不育相关的候选途径,WGCNA分析发现不同的分类模块与样本之间具有高度相关性,且WGCNA的分析结果与K-means聚类分析结果相似,明确了参与花药发育异常的主要生物学代谢途径,包括蛋白质在内质网中的加工、淀粉和蔗糖代谢、脂类代谢、激素信号传导等。切片组织染色明确了淀粉等糖类物质的缺失是突变体DS-3201价格NWMS1表现为雄性不育的主要因素,鉴定得到20个与花药发育异常相关的关键基因,包括SKP1B、BIP5、KCS11、ADH3、BGLU6和TIFY10B等,确定了突变体NWMS1的花药异常发育涉及复杂的基因调控网络,并建立了花药异常发育的Microtubule Associat抑制剂初级分子调控模型。4、基于突变体NWMS1的小麦群体改良应用雄性不育系NWMS1具有适应河南气候条件,高产、白粉病免疫、一般配合力高,后代继承其多粒、结实性好等优点。目前,已成功建立了基于雄性不育系NWMS1的小麦群体改良技术,以小麦雄性不育系NWMS1为初始母本的小麦群体改良已取得了良好的效果,群体改良不同组合的品系(或株系)籽粒容重大部分在815 g/L以上,籽粒硬度等级包括软粒、硬粒、中等。群体改良后代株系的产量潜力明显提高,增产达6.5-8.9%,平均增产7.8%,增产效果显著。轮回群体改良后代已选育出一些优良可育单株,进入株系选择鉴定程序,为新品种的选育和审定提供了品系。

CDK5RAP3调控内质网应激通路在雨蛙肽诱导胰腺腺泡细胞损伤中的作用及机制

研究背景:胰腺是由内分泌部和外分泌部组成的消化器官和内分泌器官。其中,胰腺腺泡细胞(PACs)是胰腺外分泌部的最主要细胞及功能单位,主要负责消化酶的合成、储存和分泌。胰腺炎是一种首先发生于PACs,并由PACs损伤驱动的炎症性疾病。因此,阐明PACs损伤的分子机制,对于胰腺炎的防治具有重要的科学意义。周期素依赖性激酶5调节亚单位相关蛋白3(CDK5RAP3)是一多功能分子,在DNA损伤反应、细胞周期的进展、蛋白翻译后修饰、细胞信号转导等不同的细胞生物学过程PF-6463922采购中发挥作用。此外,CDK5RAP3在胚胎发育、哺乳动物的肝细胞和肠上皮细胞功能维持以及肿瘤发生发展中具有重要作用。但CDK5RAP3与胰腺炎的关系未见国内外公开报道。有趣的是,本研究团队前期研究发现,条件性敲除PACs中CDK5RAP3可导致小鼠PACs大量萎缩,胰腺组织淀粉酶表达降低,提示CDK5RAP3在维持PACs的存活与功能中具有重要作用。本课题旨在继续探究CDK5RAP3在胰腺炎诱导PACs损伤中的作用及其潜在的分子机制。目的:基于内质网应激(ERS)通路探讨CDK5RAP3在雨蛙肽诱导的PACs损伤中的作用。方法:1.实验分组及处理:(1)小鼠急性(AP)和慢性(CP)胰腺炎模型:模型组(腹腔注射雨蛙肽)和对照组(腹腔注射等量PBS);(2)雨蛙肽诱导AR42J损伤模型:不同浓度(0、100、400、800 n M组)雨蛙肽处理48 h和800 n M雨蛙肽处理不同时间(0、12、24、48 h组);(3)外源性干预CDK5RAP3表达实验:Cer组(雨蛙肽处理)、si NC+Cer组(转染Negative control si RNA+雨蛙肽处理)或vector+Cer组(转染vector+雨蛙肽处理)、#1+Cer组(转染#1-CDK5RAP3si RNA+雨蛙肽处理)或over+Cer组(转染CDK5RAP3过表达质粒+雨蛙肽处理);(4)淀粉酶诱导实验:未处理组(正常培养细胞)、雨蛙肽组(雨蛙肽处理)、地塞米松组(地塞米松处理)、雨蛙肽+地塞米松组(雨蛙肽联合地塞米松处理);(5)ERS抑制剂4-PBA干预实验:si NC组(转染Negative control si RNA+雨蛙肽处理)、si RNA组(转染#1-CDK5RAP3 si RNA+雨蛙肽处理)、vehicle组(转染Negative control si RNA+PBS+雨蛙肽处理)、4-PBA组(转染Negative control si RNA+4-PBA+雨蛙肽处理)vehicle+si RNA组(转染#1-CDK5RAP3 si RNA+PBS+雨蛙肽处理)、4-PBA+si RNA(转染#1-CDK5RAP3 si RNA+4-PBA+雨蛙肽处理)。2.AP和CP的评估:构建雨蛙肽诱导的AP和CP模型,苏木素-伊红(H&E)染色观察小鼠胰腺组织的病理形态;Masson染色评估CP模型小鼠胰腺组织的胶原纤维沉积程度。3.CDK5RAP3的蛋白表达评估:Western Blot或免疫组化方法检测组织或细胞中CDK5RAP3的蛋白表达水平。4.AR42J细胞损伤评估:(1)CCK-8实验检测细胞活力;(2)细胞毒实验检测细胞LDH漏出率;(3)Hoechst 33342/PI荧光双染法观察细胞凋亡;(4)Western Blot法检测凋亡相关蛋白:PARP、Bcl-XL、Bcl2/Bax、Cleaved-Caspase3、Bad;(5)Western Blot和AMS法检测细胞中淀粉酶的表达及含量。结果:1.雨蛙肽体内外诱导PACs损伤及下调CDK5RAP3的表达(1)与对照组比较,AP和CP模型组胰腺腺泡结构破坏,PACs损伤及炎症细胞浸润,且病理评分更高(均P<0.001),而且CP模型组胰腺组织中胶原纤维沉积更多(P<0.01),AP和CP模型组胰腺组织中CDK5RAP3的蛋白表达均更低(P<0.001和P<0.01)。(2)与0 n M雨蛙肽组比较,雨蛙肽(400、800 n M)显著抑制AR42J细胞活力(均P<0.001),增加AR42J细胞LDH漏出率(P<0.05和P<0.001)和细胞凋亡,上调促凋亡相关蛋白Bad、PARP、Cleaved-Caspase 3的蛋白表达(均P<0.05),而下调Bcl2/Bax、Bcl-XL及CDK5RAP3的蛋白表达(均P<0.001);与0 h雨蛙肽组比较,48 h雨蛙肽组AR42J细胞活力明显降低(P<0.001),LDH漏出率(P<0.001)和细胞凋亡明显增加,Bad、PARP、Cleaved-Caspase 3的蛋白表达增加(P<0.05、P<0.01、P<0.05),而Bcl2/Bax、Bcl-XL及CDK5RAP3的蛋白表达降低(P<0.001、P<0.01、P<0.001);与未处理Technology assessment Biomedical组比较,雨蛙肽+地塞米松组的AR42J细胞淀粉酶表达及含量明显增加(均P<0.001)。2.CDK5RAP3减轻雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤(1)与Cer组比较,#1+Cer组CDK5RAP3表达、AR42J细胞活力显著降低,LDH漏出率、淀粉酶的表达及含量升高(P<0.01、P<0.05、P<0.001),凋亡细胞增加,Bad、PARP、Cleaved-Caspase 3的蛋白表达增强(P<0.05、P<0.01、P<0.01),而Bcl2/Bax、Bcl-XL的蛋白表达降低(P<0.001、P<0.05)。(2)与Cer组比较,over+Cer组CDK5RAP3表达、AR42J细胞活力显著增加(P<0.001、P<0.01),LDH漏出率、淀粉酶的表达及含量均下降(P<0.001、P<0.001、P<0.05),凋亡细胞减少,Bad、PARP、Cleaved-Caspase 3的蛋白表达降低(P<0.05、P<0.05、P<0.01),而Bcl2/Bax、Bcl-XL的蛋白表达增强(均P<0.05)。3.CDK5RAP3通过调控ERS减轻雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤(1)与0 n M雨蛙肽组比较,800 n M组雨蛙肽处理48 h显著增加AR42J细胞的ERS相关蛋白IRE1α、p-e IF2α、ATF6、CHOP、XBP1s的蛋白表达(均P<0.01),但GRP78/Bip的蛋白表达却降低(P<0.01);与0 h雨蛙AY-22989临床试验肽组比较,800n M雨蛙肽12 h组IRE1α、p-e IF2α、ATF6、CHOP、XBP1s、GRP78/Bip的蛋白表达均增强(均P<0.01),而雨蛙肽处理24和48 h后IRE1α、ATF6、CHOP、XBP1s、GRP78/Bip的蛋白的表达均较12 h组降低(均P<0.05)。(2)与Cer组比较,#1+Cer组ERS相关蛋白IRE1α、p-e IF2α、ATF6、CHOP、XBP1s、GRP78/Bip的蛋白表达明显增强(均P<0.001),而over+Cer组这些ERS相关蛋白的表达降低(均P<0.05)。(3)与vehicle组比较,4-PBA不仅可减轻雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤及抑制ERS通路的活化,而且可部分逆转CDK5RAP3 si RNA导致的AR42J细胞损伤以及ERS通路的活化。结论:1.雨蛙肽在体内外均可诱导PACs损伤,并下调CDKRAP3蛋白表达水平。2.CDK5RAP3在雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤中具有保护作用。3.CDK5RAP3负向调控ERS通路影响雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤。

放电等离子体去除水中铜绿微囊藻的机制及潜在环境风险研究

铜绿微囊藻作为蓝藻水华中的最常见,分布最广泛的藻类,其藻细胞的过度繁殖与胞内有机物的大量释放,会给水体环境与人的供水安全带来严重的环境风险,因而寻求一种能够快速、高效去除藻细胞,有效降解藻类有机物,避免处理过程中产生新的环境风险的除藻技术至关重要。放电等离子体技术作为一种绿色的新型高级氧化技术,因其可高效快速去除藻类而受到广泛关注,但放电等离子体去除铜绿微囊藻的效果与机制仍需进一步探索。此外,放电等离Ceralasertib体外子体很容易造成藻细胞的破裂,从而使胞内溶解性有机物(Dissolved organic matter,DOM)大量释放,带来藻毒素、消毒副产物前体物增加等一系列新的潜在环境风险。因此,为了推进放电等离子体技术在蓝藻水华处理中的实际应用,有必要研究其去除水中铜绿微囊藻的机制及DOM释放带来的潜在环境风险。本研究以铜绿微囊藻为研究对象,构建了介质阻挡放电等离子体除藻系统,探究了放电等离子体去除水中铜绿微囊藻的效果与机制,分析了放电等离子体对胞内DOM的影响,并评估了这些DOM释放可能带来的潜在环境风险,主要取得如下研究结果:(1)提高放电电压,使用氧气作为放电气体,能够产生更多的O_3和·OH。提高溶液p H值,能够促进O_3向·OH转化,从而提高去除效果。在最佳放电条件下(放电电压为11.2 k V,p H=11,放电气体为氧气时),经放电处理40 min,细胞密度为10~7cells·m L~(-1)的铜绿微囊藻溶液(400 m L)的去除率能够达到96.2%。放电等离子体处理过程中,相较于O_3,·OH在去除过程中发挥着更为关键的作用。放电等离子体能够严重损害藻细胞结构形态,在2 min内完全破坏藻细胞膜,5 min内降解95%以上叶绿素a与藻胆蛋白,裂解细胞核,并使胞内物质溶出。同时短时间处理后(5 min)的藻细胞溶液失去了光合、繁殖与营养盐吸收能力,再培养8 d内,也无法恢复生长,从而达到快速有效、不可逆的去除铜绿微囊藻的目的。(2)在0-40 min内,溶液中溶解性有机碳与有机氮含量分别增加了5.3和4.7倍,表明了放电等离子体处理使得藻细胞破裂,使得胞内DOM大量释放,而处理过程中无机氮与无机磷的增加,表明胞内释放的DOM同时也在降解,矿化。紫外-可见光光谱分析表明DOM的相对分子质量与腐殖化程度随处理时间下降,红外光谱也发现等离子体处理后醇类、脂肪族化合物等有机物的官能团峰强下降。在放电处理40 min后,总蛋白质与多糖浓度分别下降了63.9%和84.7%。芳香族氨基酸、类腐殖酸等成分的荧光强度先增加后快速下降,进一步表明释放的DOM被有效降解。(3)DOM的释放使Adezmapimod核磁微囊藻毒素-LR浓度显著增加。经过3 min的等离子体处理,微囊藻毒素-LR的浓度达到了61.0μg·L~(-1),随后开始下降,在20 min时被完全去除。释放的DOM也可以作为后续消毒过程的前体物,进而促进消毒副产物(Disinfection by-products,DBPs)的生成。随着处理时间的增加,DBPs前体物也被有效降解。放电处理40 min后,总DBPs的生成潜力及其计算毒性分别下降了19.1%、19.3%。其中,含碳消毒副产物(C-DBPs)中的卤乙醛类、卤乙酸类和三卤甲烷类是主要生成的DBPs种类,其次是属于含氮消毒副产物(N-DBPs)的卤乙腈类,并因N-DBPs毒性更强,而对DBPs总毒性贡献最大。DOM的细胞毒性测定表明在整个处理过程中DOM毒性变化并不明显,且其毒性对培养于DOM溶液中的斑马鱼无法产生致死作用。氯化DOM对CHO细胞相对活性的抑制率在放电处理20 min时,达到48.4%,进一步表明了DOM释放带来的潜在消毒副产物毒性风险,随后通过延长处理时间,40 min时抑制率下降到了3.9%。这些结果表明了放电等离子体能够有效降低处理过程中的潜在环境风险。综上所述,本研究通过HBV hepatitis B virus构建介质阻挡放电等离子体体系,提供了一种能够快速有效去除水中铜绿微囊藻的方法,阐明了放电等离子体去除水中铜绿微囊藻的效果与机制,分析并评估了放电等离子体处理铜绿微囊藻过程中的潜在环境风险,该研究为放电等离子体技术治理蓝藻水华具有一定的理论价值和实践指导意义。

脓毒症患者血清MIF和D-D及PCT水平与病情进展的关系及预测价值

目的 分析脓毒症患者血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、D-二聚体(D-D)、降钙素原(PCT)水平与病情进展的关系及对预后的预测价值。方法 选取2020年1月-2021年12月郑州大学第一附属医院急诊医学部收获悉更多治的125例脓毒症患者作为观察组,选取同期进行体检的35名健康体检者作为对照组,比较两组血清MIF、D-D、PCT水平;根据脓毒症患者不同病情严重程度和治疗结局分别将其分为脓毒症组(n=68)、脓毒性休克组(n=57)和生存组(n=64)、死亡组(n=61)medical student,比较不同病情严重程度和不同治疗结局脓毒症患者血清MIF、D-D、PCT水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析上述指标单独与联合检测的诊断效能。结果 观察组血清MIF、D-D、PCT水平分别为(53.41±3.19)ng/mL、(2.03±0.75)mg/L、(6.01±1.89)ng/mL,均高于对照组(30.27±3.02)ng/mL、(0.42±0.02)mg/L、(1.44±0.03)ng/mL,差异均有统计学意义(t=38.40、12.59、14.31,P均<0.05)。脓毒性休克组的血清MIF、D-D、PCT水平均高于脓毒症组,差异均有统计学意义(t=5.53、3.24、3.65,P均<0.05)。所有患者中,生存64例(51.20%),病死61例(48.80%),脓毒性休克组的病死率较高(χ~2=4.94,P<0.05)。死亡组血清MIF、D-D、PCT水平均高于生存组,差异均有统计学意义(t=4.13、3.90、6.09,P均<0.05)。ROC曲线分析显示,上述各血清指标联合检测诊断脓毒症患者死亡的AUC为0.903,高于各指标单一BIBW2992价格检测。结论 随着脓毒症患者病情的持续进展,血清MIF、D-D、PCT水平逐渐升高,且其水平变化对脓毒症患者预后有一定的预测价值,联合检测有利于提升整体诊断效能。

咬肌区注射肉毒杆菌毒素改善青年夜磨牙症的初步研究

目的:探究咬肌区注射A型肉毒杆菌毒素(Botulinum Toxin-A,BTX-A)改善青年夜磨牙症的效果。方法:1.通过纳排标准招募并筛选夜间磨牙症患者共42例,简单随机分配成实验组21例,对照组21例;2.所有受试者在咬肌区注射前填写90项症状清单(Symptom Checklist-90,SCL-90)、匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI)、视觉模拟评分(Visual Analogue Scale,VAS)量表进行评估,并进行一晚睡眠多导监测收集数据;3.实验组咬肌区五点注射法注射BTX-A,每人每侧咬肌共注射20U,对照组在相同部位注射相同剂量的生理盐水;4.所有受试者在咬肌区注射4周后再次填写90项症状清单、匹兹堡睡眠质量指数、疼痛视觉模拟评分量表进行评估,并再次进行一晚睡眠多导监测收集数据;5.采用SPSS 26.00软件对数据进行整理及统计学分析。结果:1.注射前实验组与对照组睡眠多导监测(Polysomnography,PSG)中睡眠参数比较,总睡眠时间、睡眠效率、睡眠潜伏期、睡眠觉醒指数、睡眠觉醒频率、Ⅰ期睡眠时间占比、Ⅱ期睡眠时间占比、Ⅲ/Ⅳ期睡眠时间占比、快速动眼期睡眠时间占比共9项因子比较,差异无统计学意义(P>0.05);注射后实验组与对照组PSG睡眠参数比较,总睡眠时间、睡眠效率、睡眠潜伏期、睡眠觉醒指数、睡眠觉醒频率、Ⅰ期睡眠时间占比、Ⅱ期睡眠时间占比、Ⅲ/Ⅳ期睡眠时间占比、快速动眼期睡眠时间占比各因子比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.注射前实验组与对照组PSG中咀嚼肌节律性运动(Rhythmic Masticatory Muscle Activity,RMMA)事件发作参数比较,RMMA指数、每时发作次数、每集发作次数、平均持续发作时间、咬肌最大自主收缩时咬肌肌电爆发的峰值幅度、RMMA发作期间咬肌肌电爆发的峰值幅度共6项因子比较,差异无统计学意义(P>0.05);注射后实验组与对照组RMMA事件发作参数比较,RMMA指数、每时发作次数、每集发作次数、平均持续发作时间以上4项因子,差异无统计学意义(P>0.05),而咬肌最大自主收缩时的肌电爆发峰值幅度(P<0.001)、RMMA发作期间咬肌肌电爆发的峰值幅度(P<0.001)差异有统计学意义。3.注射前实biostable polyurethane验组与对照组SCL-90心理因子参数比较,躯体化、强迫症状、人际关系敏感、抑郁、焦虑、敌对、恐怖、偏执、精神病性、其他、总分共11项因子比较,差异无统计学意义(P>0.05);注射后实验组与对照组SCL-90心理因子参数比较,躯体化、强迫症状、人际关系敏感、抑郁、焦虑、敌对、恐怖、偏执、精神病性、其他、总分共1 1项因子比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.注射前实验组与对照组PSQI睡眠因子参数比较,主观睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍、催眠药物、日间功能障碍、总分共8项因子比较,差异无统计学意义(P>0.05);注射后实验组与对照组PSQI睡眠因子参数比较,主观睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍diABZI STING agonist说明书、催眠药物、日间功能障碍、总分共8项因子比Ipatasertib molecular weight较,差异无统计学意义(P>0.05)。5.注射前实验组与对照组疼痛VAS评分值比较,差异无统计学意义(P>0.05);注射后实验组与对照组疼痛VAS评分值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。6.42例受试者均无头晕、局部血肿、表情僵硬、颜面局部凹陷、咀嚼无力等并发症出现。结论:1.对夜磨牙症患者进行咬肌区BTX-A注射改善治疗,可以降低夜磨牙时的咀嚼肌肌力。2.对夜磨牙症患者进行咬肌区BTX-A注射改善治疗,可以减轻面部咀嚼肌的晨起疼痛。3.咬肌区注射BTX-A改善夜磨牙症是较为安全的方法。