目的 探究模拟电商物流环境下纳米保鲜袋对香菇贮运品质的影响。方法 以香菇‘808’为实验材料,通过测定失重率、色度、硬度、呼吸速率、可溶性固形物、相对电导率、可溶性蛋白、还原糖、抗坏血酸、总酚、类黄酮等一系列贮运品质指标,考察不同包装(泡沫箱+普通PE保鲜袋、泡沫箱+纳米保鲜袋)对新鲜香菇的保鲜效果。结果 泡沫箱AZD1152-HQPA临床试验+纳米保鲜袋可有效延缓香菇贮运期间失重率、可溶性固形物、硬度和相对电导率的下降,防止鲜香菇色泽劣变,抑制香菇呼吸强度上升,阻滞膜脂过氧化RSL3分子量发生;同时,相比对照组,纳米组能够有效保Insect immunity持可溶性蛋白、还原糖和抗坏血酸含量,维持较高的总酚和类黄酮水平。贮运末期(第5d),泡沫箱+纳米保鲜袋处理的香菇失重率、呼吸强度、相对电导率分别为1.71%、232.20 mg/(kg·h)、28.68%,均低于对照组;而L*(64.60)、硬度(9558.32 g)、可溶性固形物(3.19%)、可溶性蛋白(1.25 mg/g)、还原糖(0.77 mg/g)、总酚(16.51 mg/100 g)、类黄酮(53.61 mg/100 g)均高于对照组。结论 泡沫箱+纳米保鲜袋能够有效抑制模拟电商物流过程中香菇的品质劣变,降低营养价值的损失,提高贮运品质,延长货架期。本研究可为模拟电商物流包装新鲜香菇的应用提供技术支持。
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双石通淋胶囊对大鼠前列腺增生的药效及机制研究
目的通过建立去势联合皮下注射丙酸睾酮(TP)构建良性前列腺增生(BPH)大鼠模型,探究双石通淋胶囊(SSTL)对BPH大鼠的药效MUC4 immunohistochemical stain作用,并探讨其作用机制,为双石通淋胶囊治疗BPH提供理论依据。方法将66只SD大鼠随机分为6组。除假手术组外,其余,通过去势联合皮下注射TP诱导BPH大鼠模型,并随机分为模型组、双石通淋胶囊低、中、高剂量组(0.625 g/kg,1.25 g/kg,2.5 g/kg)及非那雄胺组。造模同时进行药物干预,连续28天,进行指标检测。(1)探究双石通淋胶囊对BPH大鼠的药效作用。检测大鼠前列腺湿重及前列腺指数;通过HE染色和Masson染色观察各组大鼠前列腺组织的病理学变化;通过ELISA试剂selleck盒检测大鼠性激素指标;(2)探究双石通淋胶囊对BPH大鼠ROS/NLRP3信号通路的调控作用。通过ELISA试剂盒检测各组血清及前列腺组织中TNF-α、IL-1β水平;利用试剂盒检测各组大鼠血清及前列腺组织中MDA、SOD、GSH-Px、CAT水平;利用免疫荧光观察前列腺组织ROS水平;通过免疫组织化学法检测前列腺组织中NLRP3炎症小体的表达;利用Western blotting检测大鼠前列腺组织中NOX4、NOX2、NLRP3炎症小体及相关蛋白的表达;(3)探究双石通淋胶囊对BPH大鼠TGF-β1/Smad信号通路的调控作用。利用Western blotting及RT-PCR检测大鼠前列腺组织中TGF-β1/Smad通路相关蛋白和基因的表达;利用Western blotting及RT-PCR检测大鼠前列腺组织α-SMA、Collagen I蛋白及基因的表达;通过免疫组织化学法检测大鼠前列腺组织中E-cadherin、Vimentin的表达。结果(1)双石通淋胶囊改善了TP诱导的BPH大鼠前列腺指数的升高,改善前列腺组织的病理性损伤及减少胶原沉积,并降低大鼠血清及前列腺组织中T和DHT水平。(2)双石通淋胶囊能够降低BPH大鼠炎症因子TNF-α和IL-1β水平,提高SOD、CAT、GSH-Px的活性,降低MDA的活性;免疫荧光果显示,双石通淋胶囊干预后,ROS的表达降低;Western blotting结果显示双石通淋胶囊降低前列腺组织中NOX4、NOX2蛋白的表达;以上结果提示,双selleck HPLC石通淋胶囊可能通过下调NOX2、NOX4的表达,减轻机体的过氧化损伤;Western blotting结果显示双石通淋胶囊能够下调NLRP3炎症小体、ASC、Cleaved Caspase-1、IL-1β的表达,提示双石通淋胶囊能够抑制NLRP3炎症小体及相关蛋白的表达。(3)Western blotting结果显示双石通淋胶囊能够下调TGF-β1,p-Smad2/3表达。RT-PCR实验结果显示同样的趋势,提示双石通淋胶囊能够抑制TGF-β1/Smad通路;Western blotting结果显示双石通淋胶囊能够下调α-SMA、Collagen I表达。RT-PCR实验结果显示同样的趋势;免疫组化结果显示双石通淋胶囊可下调上皮-间质转化(EMT)相关蛋白Vimentin同时上调E-cadherin的表达,提示双石通淋胶囊具有抑制前列腺组织胶原沉积和阻滞EMT的进程。结论(1)双石通淋胶囊降低大鼠前列腺指数,减少胶原沉积,改善前列腺组织病理损伤,降低BPH大鼠血清及前列腺组织中T和DHT水平。(2)双石通淋胶囊能够改善BPH其作用机制可能与抑制ROS/NLRP3炎症小体通路活化,降低炎症因子及缓解氧化应激,抑制TGF-β1/Smad通路活化,下调α-SMA、Collagen I的表达及阻滞EMT的进程有关。
乳腺癌患者化疗相关认知障碍非药物干预的证据总结
目的 检索、评价并汇总乳腺癌患者化疗相关认知障碍非药物干预的相关证据。方法 计算机检索UpToDate、BMJ最佳临床实践、国际指南协作网、英国国家卫生与临床优化研究所网站、苏格兰学院间指南网、加拿大安大略注册护士协会网站、美国国家综合癌症网络、Cochrane图书馆、澳大利亚乔安娜布里格斯研究所循证卫生保健数据库、PubMedRAD001、Web of Science、CINAHL、中国生物医学文献数据库、中国知网和万方数据平台中所有相关证据，包括AMG510半抑制浓度临床决策、证据总结、指南、专家共识和系统评价，检索时限为建库至2023年5月14rhizosphere microbiome日。由2名研究者独立完成文献方法学质量评价和证据的提取与汇总。结果 纳入21篇文献，包括1篇临床决策、1篇证据总结、1篇指南和18篇系统评价。从安全有效性、自我管理教育与支持、认知康复训练、运动锻炼、正念干预和多策略干预6个领域提取了16条最佳证据。结论 该研究总结的最佳证据的质量和级别整体水平较高，对临床医护人员开展科学有效的乳腺癌患者化疗相关认知障碍的非药物管理具有指导意义，证据应用和转化时需充分考虑国内临床情境和患者的个体差异性。
牛皮胶原活性肽制备及其降血糖机制研究
近年来,慢性代谢性疾病二型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)的发病率显著增加,而长期化学药物治疗的干预方式易产生不良副作用。基于此,食品衍生的活性多肽因其低副作用、来源广泛、高活性以及易吸收等特点,逐渐成为健康降血糖功能因子开发的新思路。通常,胶原蛋白因其具有较高含量的脯氨酸(Pro),是二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制肽的潜在前体蛋白。当前,我国肉牛屠宰加工业发展迅速,牛皮副产物的产量稳步增长,牛皮胶原蛋白富含羟脯氨酸(Hyp)、脯氨酸(Pro)和甘氨酸(Gly),其水解物可能是潜在的DPP-Ⅳ抑制肽。本研究以牛皮胶原蛋白为基材,采用双酶酶解制备胶原基DPP-Ⅳ抑制肽;通过超声耦合离子液体修饰胶原蛋白,以促进胶原基DPP-Ⅳ抑制肽的释放;构建了T2DM小鼠模型,探究牛皮胶原肽干预方式对高脂/STZ诱发的小鼠血糖、血脂紊乱、胰岛素抵抗等的缓解作用并从AMPK介导的胰岛素信号通路和PI3K/Akt信号通路揭示了牛皮胶原肽改善胰岛素抵抗和糖代谢紊乱的作用机制;采集了小鼠盲肠内容物,解析牛皮胶原肽干预对高脂/STZ诱发的小鼠肠道微生态失衡及代谢紊乱的调节机制;以胶原肽为基材,辅以苦瓜提取物功能因子,制备出胶原肽-苦瓜提取物复合物以增加牛皮胶原肽的降糖靶点。因此,本文基于提取工艺优化、分离纯化及鉴定、结构表征、体外模拟消化、动物实验等手段,结合分子对接、固相合成、荧光淬灭、关键蛋白表达量测定、肠道菌群分析、代谢组学等技术,系统研究了胶原肽的降糖作用机制,为后续高效、灵敏、安全的降糖膳食补充剂的开发提供理论依据和参考,并强化牛皮的高值化利用途径。主要研究结果如下:1.探究了超声耦合离子液体辅助制备胶原基DPP-Ⅳ抑制肽的最佳工艺参数及有效肽段的氨基酸序列。在超声功率389 W,超声时间25 min,离子液体类型为[EMIM][Ac],离子液体/胶原蛋白0.7,胶原蛋白浓度0.3%,双水解酶酶解(木瓜蛋白酶与复合蛋白酶)时,牛皮胶原肽的IC_(50)值(3.04±0.18 mg/m L)明显低于传统方式制备的胶原肽,表明超声耦合离子液体提高了胶原肽的DPP-Ⅳ抑制能力。此外,超声耦合离子液体促进了牛皮胶原肽二级结构中β折叠向β转角的部分转化,并增强了胶原肽的胃肠道消化稳定性。分离纯化的GPVG,FGPGP,APGGAP,GPPGPT和GPVGPPG等肽段具有较强的DPP-Ⅳ抑制活性,抑制模式为非竞争性抑制,其中GPVGPPG的结合位点接近DPP-Ⅳ的C端,分子对接评分和常规氢键含量最高,合成肽IC_(50)值最低,表明GPVGPPG是源自牛皮胶原蛋白的有效DPP-Ⅳ抑制剂。2.系统分析了超声耦合离子液体预处理对胶原蛋白结构的修饰及其对DPP-Ⅳ抑制肽生成的影响。与未预处理的胶原肽相比,双重修饰(IL+US)明显提高了小分子量(<1 KDa)胶原肽的疏水氨基酸残基含量和DPP-Ⅳ抑制活性。同时,双重修饰降低了胶原的热稳定性,加速了胶原蛋白酪氨酸和苯丙氨酸残基的暴露,增加了相邻氨基酸残基沿螺旋结构中轴线的距离,并提高了胶原蛋白的溶解性,使得胶原蛋白表面变得粗糙,这增加了蛋白质和水解酶之间的反应位点,最终促进DPP-Ⅳ抑制肽的释放。离子液体和超声波分别倾向于促进氢键的断裂和抑制胶原蛋白之间的交联。研究结果表明超声耦合离子液体通过修饰胶原蛋白结构促进了牛皮源DPP-Ⅳ抑制肽的释放。3.解析了胶原肽干预胰岛素抵抗、糖异生及糖原合成的调控机制及其对T2DM的影响。胶原肽干预后,小鼠多饮、多食、体重减轻等症状明显减轻,较大程度缓解了胰腺、肝脏、肾脏和结肠部位的损伤,小鼠的空腹血糖和口服葡萄糖耐量明显降低、TC和LDL-C含量减少、而HDL-C含量增大(P<0.05),表明胶原肽干预通过调节血糖水平、改善血脂代谢紊乱和减弱器官损伤有效缓解了T2DM。此外,胶原肽干预后,小鼠血清胰岛素抵抗指数(HOMA-IR1)明显降低、肝糖原含量明显升高(P<0.01),小鼠肝脏中p-AMPK、IRS1和p-GSK3β蛋白表达明显上调(P<0.01),而PEPCK和Fox O1蛋白表达明显下调(P<0.05),说明胶原肽干预通过有效激活AMPK,上调胰岛素受体底物(IRS1)的表达调控胰岛素敏感性,并通过激活的IRS1激活Functional Aspects of Cell BiologyPI3K/Akt通路,上调p-GSK3β的表达以促进糖原合成,通过抑制Fox O1和PEPCK的表达抑制糖异生,降低了肝脏葡萄糖输出水平。4.探究了胶原肽干预对小鼠盲肠内容物微生物群和代谢产物的调控作用。胶原肽改善了T2DM小鼠肠道微生物群,与正常小鼠相比,高脂膳食及STZ引发小鼠肠道含有较Ras抑制剂高丰度的厚壁菌门、梭状芽孢杆菌门和乳杆菌属。胶原肽干预促使小鼠形成高丰度的变形菌门、拟杆菌门、类杆菌科和类杆菌属,同时产生与N-乙酰氨基葡萄糖、N-乙酰甘露糖和唾液酸降解途径相关的乳酸杆菌属微生物群结构。胶原肽调控了T2DM模型小鼠的肠道微生物代谢,患病(T2DM)后,小鼠肠道氨基酸代谢物(酪氨酸甲酯、N-甲酰基-L-蛋氨酸和苯基乙酰甘氨酸)、脂肪酸和脂肪酸衍生物(胍基琥珀酸、水杨酸和9(S)-HPODE)、维生素类(生育三烯酚)、酮类物质(喹诺酮)、前列腺素F2a、6-甲基腺嘌呤和AMP明显增多,而胶原肽(CP)干预方式缓解了上述代谢物水平的增加;差异代谢物主要富集在类固醇激素生物合成、醛固酮的合成与分泌、癌症通路、脂肪细胞脂解的调控、c AMP信号途径、催产素信号通路、寿命调节通路、皮质醇的合成与分泌、醛固酮调节钠重吸收和前列腺癌等途径。5.探究了苦瓜提取物(MCE)复配对牛皮胶原肽的结构和功能特性的作用及其对T2DM的影响。复配MCE后,胶原肽的热稳定性、α-淀粉酶抑制活性、抗氧化活性和胃肠道消化抵抗力明显增强(P<0.05),CP与MCE之间的最佳比例为1:0.35,两者之间的荧光猝灭方式为静态淬灭,相互作用类型为疏水相互作用,说明MCE通过疏水相互作用增强了CP的稳定性、抗氧化性能及抑制碳水化合物吸收的能力。此外,与单一的CDinaciclib化学结构P干预相比,CP-MCE复合物明显改善了T2DM小鼠的血糖调节过程,降低了T2DM小鼠的空腹血糖和口服葡糖糖耐量,增强了胰岛β细胞的功能,增加了肝糖原含量,促进了糖原在肝脏和肾脏中的均匀分布并有效缓解氧化应激,结果表明与MCE复配后,明显增强牛皮胶原肽对小鼠T2DM症状的缓解。综上所述,以牛皮胶原蛋白作为高活性的降糖肽来源,分离出一种新的高DPP-Ⅳ抑制活性肽段GPVGPPG,超声耦合离子液体促进了DPP-Ⅳ抑制肽的释放,CP干预处理可通过影响AMPK介导的胰岛素信号通路及PI3K/Akt信号通路、重塑肠道菌群,调节肠道微生物代谢,缓解T2DM引起的血糖紊乱及胰岛素抵抗,此外,CP-MCE复合物可增加牛皮胶原肽的降糖靶点并提高胃肠道消化抵抗性。本研究揭示的牛皮胶原肽的降糖作用机制研究可为后续高效、灵敏、安全的降糖膳食补充剂的开发提供理论依据和参考,并强化牛皮的高值化利用途径。
蓖麻PIP5K11基因在Lm型雌性系中的功能研究
蓖麻是世界十大油料作物之一,蓖麻花序是影响其产量的重要因素。本实验室前期研究表明PIP5K基因家族(PIP5Ks)6个基因与蓖麻Lm型雌性系花序发育相关,PIP5KMC3浓度11基因在拟南芥异源过表达中有相对较高的表达量。为了确定PIP5K11基因在蓖麻Lm型雌性系中的功能,本研究以Lm型雌性系的a Lm AB2品系为试验材料,对PIP5K11基因进行生物信息学分析及亚细胞定位,预测其功能及在细胞中的表达部位。在蓖麻中过表达和敲除PIP5K11基因,确定对蓖麻发育的影响;通过RT-q PCR技术确定PIP5K11基因过表达和敲除抗性植株中PIP5K家族其他基因的表达情况,推测该基因与同家族其他基因的Tumour immune microenvironment相互关系。对过表达与敲除突变型植株进行转录组学和靶向代谢组学研究,进一步分析该基因对其他基因和代谢物的影响。主要研究结果如下:生物信息学分析与亚细胞定位结果表明:蓖麻PIP5K11基因序列全长为1845 bp,CDS为1 188 bp;PIP5K11蛋白在洋葱表皮的细胞膜上表达,与生物信息学分析预测PIP5K11蛋白质位于细胞膜表面相吻合。基因过表达与敲除研究结果表明:在蓖麻中过表达PIP5K11基因,共获得了2株抗性植株(G11-1、G11-2),均为标雌花序类型;G11-1、G11-2与同种花序类型野生型(WT-1)相比,表达量显著上调。与WT-1相比,主茎穗开花提前,次级分枝的生长发育被抑制;花序发育后期,果实更成熟、种子更饱满、光泽度更高;成熟种子萌发率更高,胚根更长。在蓖麻中敲除PIP5K11基因,共获得了2株抗性植株(Q11-1、Q11-2),均为两性花序类型;Q11-1、Q11-2与同种花序类型野生型(WT-2)相比,表达量显著下调。与WT-2相比,主茎穗开花延迟,次级分枝的生长发育被抑制;开花后雄花花粉生物活力降低;花序发育后期,种子粒小皱缩,饱和度、光泽度较差;成熟种子萌发率降低。当PIP5K11基因过表达时,PIP5K1和PIP5K9的表达量显著下调,PIP5K2、PIP5K6和PIP5K8的表达量均显著上调;当该基因敲除时,其他5个基因的表达量均显著下调。PIP5K11基因过表达与敲除突变型植株的转录组学和靶向代谢组学联合分析结果表明:差异基因和差异代谢物主要在植物激素信号转导通路中表达。在植物激素信号转导通路(ko04075)中参与激素调控的AUX1、TIR1、ARF、DELLA、GID1及转录因子(TF)、PYR/PYL、PP2C、SnINCB018424研究购买 RK2等基因与PIP5K11基因具有相同或相反表达模式,表明这些基因可能通过调控PIP5K11等基因参与植物生长发育过程。上述表明蓖麻PIP5K11基因在蓖麻花序发育过程中具有重要的调控功能。
天冬氨酸氨基转移酶/丙氨酸氨基转移酶与儿童噬血细胞性淋巴组织细胞增生症预后的相关性研究
背景 天冬氨酸氨基转移酶（AST）/丙氨酸氨基转移酶（ALT）是近年来评估急危重症预后的新指标。目前AST/ALT仅报道可用于评估成人噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（HLH）的预后，而儿童HLH尚未见相关研究。目的探讨HLH患儿AST/ALT与临床特征的关系及预后意义，为临床早期识别并诊断儿童HLH提供理论依据。方法 选取2013年1月—2022年5月遵义医科大学附属医院确诊为HLH的128例住院患儿为研究对象，通过电子病历系统收集患儿的基线资料。将患儿按AST/ALT三分位数分为3组：T1组（AST/ALT≤1.57,n=43),T2组（1.57
中医药靶向Wnt/β-catenin信号通路防治肺癌的研究进展
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率与死亡率稳居前位，早期症状不明显，生物学结构复杂，故许多患者就诊时已错过最佳治疗时间。目前，现代医学对肺癌的治疗以含铂方案的一线化疗及手术治疗为主，其副作用较大，预后较差，且转移和AG-221复发的风险较高。随着肺癌靶向治疗与免疫治疗的逐渐兴起，尽管治疗手段更加丰富，但肺癌患者整体恢复仍然较差，生存率较低。中医药（TCM）从整体观念与辨证论治的角度出发，具有作用靶点多，范围广，genetic constructs毒副作用轻的特点，在肿瘤患者预后中发挥重要作用。现代研究表明，肺癌的发生发展与多条信号通路异常有密切联系，而Wnt/β-连环蛋白（https://www.selleck.cn/products/cx-5461.htmlβ-catenin）信号通路作为癌症中最主要的通路之一，通过调控相关信号蛋白与基因的表达而参与肺癌发展的全过程。近几年，许多研究已经证实中药单体及中药复方可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路，抑制肺癌上皮-间充质转化（EMT）进程及肺癌干细胞（LCSCs）活性，诱导肺癌细胞凋亡，抑制肺癌细胞增殖、侵袭与迁移，从而发挥抗肺癌的作用。近些年该领域的研究成果取得突破进展，但缺乏系统的整理与归纳，基于此，文章梳理国内外相关文献，分析阐释中医药干预Wnt/β-catenin信号通路抗肺癌的作用机制，总结出靶向调控该信号通路的中药单体集中在活血化瘀、清热燥湿、清热解毒、开窍醒神四类，中药复方包括补中益气汤、血府逐瘀汤等，以期为肺癌临床研究与药物研制提供新思路。
子宫内膜癌组织中GATA结合蛋白3、人附睾蛋白4的表达及临床意义
目的 探讨子宫内膜癌组织中人附睾蛋白4(HE4)、GATA结合蛋白3(GATA3)的表达及临床意义。方法 将32例子宫内膜癌患者设为子宫内膜癌组，33例不典型增生患者设为不典型增生组，27例健康体检者设为正常对照组。统计3组受试者组织中HE4、GATA3阳性表达selleck化学情况，分析GATA3、HE4阳性表达与子宫内膜癌患者临床特征的关系，计算HE4与GATA3单独及联合检测对子宫内膜癌的诊断效能。结果 子宫内膜癌组患者HE4、GATA3阳性表达率均高于不典型增生组和正常对照组，不典型增生组患者HE4、GATA3阳性表达率均高于正常对照组，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。有淋巴结转移、肿瘤直径≥2 cm、组织学分级为G_3级、有脉管浸润、手术-病理分期为Ⅲ+Ⅳ期子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中HE4、GATA3阳性表达率分别高于无淋巴结转移、肿瘤直径﹤2 cm、组织学分级为GBMS-354825浓度_1+G_2级、无脉管浸润、手术-病理分期为Ⅰ+Ⅱ期患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。有淋巴结转移、肿瘤直径≥2 cm、组织学分级为G_3级、有脉管浸润、手术-病理分期为Ⅲ+Ⅳ期均为子宫内膜癌组织中HE4、GATA3阳性表达的危险因素（water disinfectionP﹤0.05）。GATA3+HE4联合检测诊断子宫内膜癌的灵敏度高于GATA3单独检测，特异度高于HE4单独检测，阴性预测值和阳性预测值均高于GATA3和HE4单独检测。结论 HE4在子宫内膜癌中高表达，GATA3呈中低水平表达，二者综合应用对子宫内膜癌的诊断价值更高，对早期子宫内膜癌分期诊断、靶向治疗及预后评估有指导意义。
经尿道前列腺绿激光汽化术对良性前列腺增生患者性功能的影响
目的 观察经尿道前列腺绿激光汽化术(PVP)对不同前AY-22989列腺体积的良性前列腺增生(BPH)患者性功能的影响。方法 131例行PVP的BPH患者中，58例患者前列腺体积≥80 mL(A组),73例患者前列腺体积<80 mL(B组)。术后随访3、6、12个月，采用国际前列腺症状评分(IPSS)、最大尿流率(Qmax)和生活质量评分(QOL评分)评估患者下尿路梗阻改善情况；采用国际勃起功能指数biocatalytic dehydration问卷表(IIEF-5)评估患者勃起功能变化；观察患者逆行射精和精液量减少发生情况，评估患者射精功能变化。结果 与术前比较，两组患者术后3、6、12个月IPSS、Qmax和QOL评分均改善(P<0.05);两组间术后3、6、12个月IPSS和QOL评分比较均无统计学差异(P>0.05);B组术后3、6个月Qmax高于A组(P<0.05),但两组术后12个月Qmax比较无统计学差异(P>0.05)。与术前比较，A组患者术后3、6、12个月IBLZ945体外IEF-5评分降低(P<0.05);B组患者手术前后IIEF-5评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组患者术后3、6、12个月IIEF-5评分低于B组(P<0.05)。两组术后3、6、12个月逆行射精和精液量减少发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PVP对大体积BPH患者的勃起功能影响较大，而对小体积BPH患者勃起功能无显著影响。该术式对患者射精功能具有一定影响，但与前列腺体积无关。
血管损伤后血管重构的分子机制及其干预的实验研究
心血管疾病已成为全球死亡的主要原因之一。内膜增生(Intimal hyperplasia,IH)是血管增生性疾病如动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)、高血压、肺动脉高压(Pulmonary hypertension,PAH)、经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous coronary intervention,PCI)术后再狭窄、动静脉瘘等疾病的主要病理过程。它是血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)的异常增殖迁移以及血管系统中生长因子驱动的细胞外基质蛋白沉积的产物。血管损伤后,活化的内皮细胞(Endothelial cells,EC)、血小板和免疫细胞分泌的生长因子、趋化因子和细胞因子刺激细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的产生和分泌,并减少VSMCs收缩型标记物平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)和平滑肌22α(SM22α)的表达,而促进合成表型如骨桥蛋白(OPN)和增殖细胞核抗原(PCNA)等的表达。此外,“激活的”VSMCs本身也会产生细胞因子,例如TNFα和MCP-1,从而导致VSMCs增殖和迁移的正反馈级联。之前的研究显示在SMC样细胞重编程和增殖/迁移中起主要作用的信号通路是MAPK、NF-κB和JAK2等通路。目前的研究发现,多种因素和信号通路不同程度地参与了这一过程。然而,内膜增生的发病机制是复杂不明的,尚缺乏有效的干预措施。随着高通量测序以及生物信息学的发展,基因芯片技术、生物大数据分析以及数据挖掘在生命科学研究中发挥着越来越重要的作用。基因芯片技术是近年来常用的检测基因表达变化的技术,具有较高的特异性和敏感性。作为新兴的技术,生物大数据的深入挖掘与分析不但为我们提供了丰富的原始材料,一系列数据的可视化分析还促进了我们对疾病分子机制的研究与挖掘,具有重要而深远的意义。在本篇论文的第一部分,通过对IH相关数据库的挖掘和分析,我们确定了与IH密切相关的DEGs。推动对IH相关靶点的认识和分子机制的研究。核因子kappa增强子结合蛋白(NF-κB)作为一种核转录因子,可调节至少200个与细胞增殖、免疫和炎症反应有关的基因,调控许多过程,包括免疫、炎症和细胞凋亡。NF-κB通路的研究揭示了泛素化的新功能,以及众所周知的靶蛋白质降解的作用。泛素参与该途径至少有三个步骤:NF-κB抑制剂IκB的降解、NF-κB前体的加工以及通过不依赖于降解的机制激活IκB激酶(IKK)。泛素-蛋白酶体途径在NF-κB激活的经典和非经典途径中都起着至关重要的作用。泛素是一种由76个氨基酸组成的8 kDa多肽,具有普遍存在于真核生物中的保守序列。全长泛素共有八个泛素化位点,包括七个赖氨酸残基(K6、K11、K27、K29、K33、K48、K63)和一个N端蛋氨酸残基。在泛素激活酶(E1)、泛素结合酶(E2)及泛素连接酶(E3)依次相互作用下,泛素C端的甘氨酸的羧基与ε-氨基形成异肽键目标蛋白赖氨酸。然后,额外的泛素分子(称为远端泛素)的Gly 76可以共价连接到泛素本身的泛素化位点(称为近端泛素),以产生多聚泛素链。形成各种类型的蛋白质泛素化,这决定了泛素化底物的命运。通过内部泛素基团的K48连接的多聚泛素链被泛素-蛋白酶体系统用于蛋白质降解信号传导。而K63连接的多聚泛素链呈现出不同的结构,在各种细胞内事件中发挥独立于蛋白酶体的作用,例如炎症信号传导、DNA损伤修复、核糖体蛋白合成、内吞作用和囊泡运输等。研究表明,CYLD和A20两种去泛素化酶(DUB)在NF-κselleckchem BarasertibB活化方面发挥抑制作用主要是通过特异性地去除TRAF6等蛋白的K63连接的多聚泛素链来抑制IKK的激活。BRCC36(BRCA1-BRCA2-containing complex)是 JAMM/MPN+家族重要的成员,能够特异性切割K63连接的多聚泛素链。BRCC36和亚基BRCC45/BRE、MERIT40和Abrol/Abraxas2 形成 BRCC36 异肽酶复合物(BRCC36 Isopeptidase Complex,BRISC)主要在细胞质中参与如炎症、免疫反应、有丝分裂和造血等多种信号通路;与MERIT40、BRCC45/BRE、Abraxas和RAP80组成BRCA1-A复合体,主要在细胞核参与调控DNA损伤修复。在心血管领域的研究发现,BRCC36基因的部分缺失与家族性烟雾病密切相关,而且这类病患同时还伴有早发冠心病、扩张型心肌病等相关表现。敲除BRCC36后,斑马鱼的血管生成出现障碍。重要的是,在一项关于慢性肾脏病血管钙化的研究中发现,BRCC36过表达减少钙化介质存在下的钙沉积,同时伴随收缩蛋白α-SMA上调和磷酸化β-catenin下调。他们表明BRCC36可以与Wnt/β-catenin通路的主要效应蛋白β-catenin相互作用,抑制β-catenin的磷酸化,负向调节细胞信号通路,从而抑制血管钙化。我们课题组之前大量的实验研究不仅证实了 BRCC36通过特异性拮抗TGF-β1/S mad3信号通路的活化来抑制慢性压力负荷所诱导的心脏病理性重构,改善心脏功能;还探讨了血管特异性过表达BRCC36通过激活BMP-PPARγ通路和抑制TGF-β1/Smad3信号通路发挥对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的抑制作用。这些研究提示BRCC36在心血管疾病中发挥不可或缺的作用。目前,关于BRCC36能否通过调控NF-κB信号通路来调控VSMCs的增殖、迁移和表型转化,进而发挥拮抗血管损伤诱导的内膜增生及血管重构的研究,国内外尚无明确的报道。五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)是一种从中草药五味子果实中分离出来的活性二苯并辛二烯木酚素,在抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、抗焦虑、保肝等方面具有重要作用。大量实验表明,Sch B可通过抑制脂质的过氧化,减少丙二醛和乳酸脱氢酶所释放的活性氧,提高细胞内的超氧化物歧化酶(SOD)的水平,进而直接的清除自由基,发挥抗氧化作用。分子机制研究表明,SchB可以有效减少炎症信号通路的激活包括NF-κB通路和MAPK/Erk/p38/Jnk通路。此外,Sch B通过调节哮喘小鼠模型中的NF-κB信号通路来减轻气道炎症。目前关于Sch对内膜增生的影响知之甚少,相关机制的研究尚不清楚。基于上述研究,我们首先在第一部分初步利用生物信息学方法鉴定了关键的差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs),分析其潜在的分子机制,并挖掘小鼠内膜增生数据集中IH的潜在靶点。然后分析人的冠状动脉粥样硬化数据集、小鼠颈动脉结扎数据集及PDGF-BB刺激人膀胱平滑肌细胞的数据集中的BRCC36的表达;同时通过收集临床标本,结扎左颈动脉构建小鼠血管内膜增生模型及PDGF-BB诱导VSMCs增殖迁移细胞模型,检测BRCC36予以验证。其次,我们在第二部分利用血管特异性过表达BRCC36转基因小鼠及血管特异性敲除BRCC36小鼠进行颈动脉结扎诱导内膜增生模型,探讨去泛素化酶BRCC36对血管损伤后血管重构的影响;并且通过原代培养大鼠的主动脉平滑肌细胞和过表达/消减BRCC36的重组腺病毒,在细胞水平探讨BRCC36对PDGF-BB诱导的VSMCs表型转化、增殖及迁移和NF-κB信号通路的作用。最后,在第三部分,我们首先对SchB与小鼠BRCA1-A复合物进行分子对接,发现Sch B可以与BRCA1-A复合物中的多个位点发生结合,其中以催化亚基BRCC36的Lys85位点结合最为稳定。然后,我们探讨Sch B对BRCC36表达的影响及对血管损伤所致的内膜增生和血管重构的机制研究,以期寻找能够直接转化在临床上达到治疗IH所致的再狭窄等血管增生性疾病的药物。研究内容共分为三个部分:第一章内膜增生中关键差异表达基因的生物信息学鉴定与验证目的:本研究旨在通过GEO中不同物种的血管增生性疾病的数据集进行分析,明确BRCC36的表达变化,筛选出与血管内膜增生相关的潜在靶点和机制。方法:从 Gene Expression Omnibus(GEO)数据库下载 GSE56143、GSEtextual research on materiamedica100927、GSE182291和GSE52488数据集的基因表达谱。对GSE56143数据集采用功能富集分析、蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析和转录因子(TF)-靶基因调控网络来揭示DEGs的生物学功能。并对前10个关键DEGs在mRNA和蛋白质水平的表达验证。此外,对GSE100927、GSE182291和GSE52488的数据集进行统计学分析BRCC36的mRNA水平的表达。然后,采用RT-qPCR及Western blot检测方法验证人、小鼠和细胞模型中BRCC36的mRNA及蛋白水平的表达。结果:1.从数据集GSE56143筛选出373个DEGs(199个上调基因和174个下调基因)。这些DEGs在免疫炎症、增殖、迁移、细胞黏附等信号通路中明显富集,主要与细胞粘附分子和肌动蛋白细胞骨架调控相关。并且它们主要受Nfkb1、Sp1和Trp53转录因子的调节。前 10 个 DEGs(Ptprc、Fn1、Tyrobp、Emr1、Itgb2、Itgax、CD44、Ctss、Ly86和Aif1)在PPI网络中被作为关键DEGs。对这些关键DEGs在mRNA和蛋白水平上的验证与上述生物信息学分析结果一致。2.通过对三组数据集GSE100927、GSE182291和GSE52488的分析发现BRCC36在三组数据集的mRNA水平都是升高的,人AS的数据集GSE100927显示VSMCs收缩表型标志物如SM22α、SMMHC、SMOOTHELIN、CALPONIN在转录组水平上是降低的,而VSMCs合成表型标志物OPN、PCNA、CYCLIND1、KI67、MMP9是升高的。3.临床相关疾病标本及内膜增生模型验证BRCC36的mRNA及蛋白水平都是增高的。结论:本研究确定了参与IH的关键基因及分子机制,为接下来IH的研究提供了方向;并且验证了去泛素化酶BRCC36在血管增生性疾病中的高表达,提示BRCC36可能参与了血管损伤所致的内膜增生及血管重构的过程。第二章去泛素化酶BRCC36对血管损伤诱导的内膜增生及血管重构的作用及机制研究目的:探讨BRCC36对血管损伤后血管重构的影响及其作用机制。方法:1.选取SPF级8-12w的雄性血管特异性BRCC36过表达小鼠,BRCC36敲除小鼠及C57BL/6野生型小鼠,采用单侧颈总动脉结扎制备动脉损伤模型,于结扎后第28天取材测量新生内膜面积,采用Weigert进行形态学分析,采用免疫组化检测α-SMA、OPN、MMP9、PCNA等相关蛋白的表达。2.分离培养原代大鼠VSMCs,分别给予感染BRCC36腺病毒、BRCC36-shRNA腺病毒以及对照病毒48h后,饥饿处理后给予血小板衍化生长因子(PDGF-BB,20ng/ml)刺激24h,采用划痕实验、Transwell小室分析细胞迁移情况,采用流式细胞术检测细胞增殖,采用Western Blot检测VSMCs相关表型蛋白α-SMA、sm22α、smoothelin、OPN、MMP9、PCNA 及 NF-κB 通路因子的表达。结果:1.在动物水平上,与假手术组相比,颈动脉结扎后BRCC36-Ko组小鼠的颈动脉新生内膜面积及内膜/中膜的比值明显增加;IHC显示BRCC36-Ko组小鼠颈动脉组织中VSMCs收缩型蛋白α-SMA表达降低,而合成型蛋白OPN、PCNA和MMP9明显升高;在细胞水平上,Western blot显示消减内源性BRCC36的表达加重了PDGF-BB诱导的VSMCs的收缩型蛋白(α-SMA、Smoothelin、SM22α)的降低,促进了 PDGF-BB诱导的VSMCs的合成蛋白OPN、PCNA和MMP9的升高;同时,流式细胞术、Transwell及划痕结果显示消减内源性BRCC36促进了细胞增殖和迁移水平。PDGF-BB刺激VSMCs后,NF-κB信号通路激活,P65入核发生磷酸化;内源性消减BRCC36后,其信号通路活性进一步增强。2.与假手术组相比,过表达BRRC36小鼠显示出减少的内膜增生面积,高表达的收缩表型及低表达的合成表型;体外研究结果进一步证实,过表达BRCC36促进收缩型蛋白的表达,降低VSMCs合成型蛋白的表达,且显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖及迁移。同时,过表达BRCC36抑制了NF-κB通路相关因子的活化。结论:去泛素化酶BRCC36通过抑制NF-κB信号通路抑制VSMCs的增殖、迁移及表型转化,进而抑制血管损伤所致的血管重构。第三章五味子乙素(Sch B)对血管损伤诱导的血管重构的保护作用及BRCC36的影响目的:阐明Sch B对血管损伤后血管重构的作用机制及对BRCC36的影响。方法:1.选取SPF级8-12w的雄性C57BL/6野生型小鼠作为研究对象,采用颈总动脉单侧结扎制备动脉损伤模型,实验共分为三组分别为假手术组,颈动脉结扎损selleck合成伤组和Sch B干预组。Sch B干预治疗后取材,采用Weigert进行形态学分析并测定新生内膜面积,采用IHC检测α-SMA、OPN、PCNA和MMP9相关蛋白的表达。采用WB检测BRCC36的水平变化。2.分离培养原代大鼠VSMCs,予以不同剂量的Sch B预处理1h后,再给予20 ng/ml浓度的PDGF-BB刺激24h。采用流式细胞术、CCK-8、Western blot、划痕实验、RT-qPCR、Transwell、SOD、MDA 检测不同浓度的 Sch B 对 VSMCs增殖、迁移、表型、氧化应激、炎症相关因子的影响及对BRCC36表达的影响。结果:1.在体实验结果显示,与结扎组相比,Sch B治疗组的新生内膜面积被显著抑制;同时,IHC检测VSMCs收缩表型α-SMA的表达显著增高,合成表型OPN、增殖表型PCNA、迁移表型MMP9显著降低。Western blot检测到Sch B促进了 BRCC36的表达。2.细胞水平进一步证实,不同浓度的Sch B分别在不同程度上促进VSMCs中收缩蛋白α-SMA的表达,抑制VSMCs的增殖(PCNA)、迁移(MMP9)及表型转化(OPN)。Sch B通过促进SOD的产生和减缓MDA的释放,以减轻血管损伤所致的氧化应激反应。此外,SchB还通过抑制NF-κB信号通路的活性来抑制血管损伤所致的炎症反应,表现为促炎因子TNF-α、IL-6的mRNA水平及P65活性的降低。结论:在本研究中,Sch B通过促进BRCC36抑制PDGF-BB诱导的NF-κB信号通路的活化进而抑制VSMCs的增殖、迁移和表型转化,最终拮抗血管损伤所致的内膜增生及血管重构。