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目的:观察地西他滨对TP53突变弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)细胞株DBPLX4032研究购买增殖、凋亡及周期的影响，并评估地西他滨联合治疗TP53突变DLBCL患者的疗效及安全性。方法:体外培养细胞，不同浓度(5～80μmoCaptisol生产商l/L)地西他滨和阿霉素作用于DB细胞后采用CCK-8法计算增殖抑制率；地gastrointestinal infection西他滨(20μmol/L)和阿霉素(12μmol/L)作用于DB细胞24/48 h,采用Annexin V-FITC/PI及流式细胞术检测凋亡率及细胞周期；比较不同组间细胞增殖、凋亡及周期的差异。另收集5例地西他滨联合治疗TP53突变DLBCL患者的临床资料进行回顾性总结。结果:对DB细胞的增殖抑制作用随着地西他滨浓度的增加(5、10、20、40、80μmol/L)而增强，联合阿霉素(12μmol/L)后抑制率较单药明显增大[(78.51±1.19)%vs (40.80±1.62)%,(87.48±0.29)%vs (46.83±1.47)%,(92.59±0.15)%vs (47.07±1.50)%,(94.57±0.58)%vs (52.68±0.84)%,(95.56±0.53)%vs (54.95±1.07)%,P<0.01];采用IC_(50)浓度(20μmol/L地西他滨、12μmol/L阿霉素)药物处理细胞，抑制率随时间增加(12、24、48 h)而增大[(50.40±0.19)%、(61.65±0.16)%、(85.08±0.78)%,P<0.01]。与空白对照组比较，地西他滨作用于DB细胞24 h显示S期细胞比例增加[(10.54±0.40)%vs (2.03±0.01)%,P<0.01],48 h显示G2/M期细胞比例增加[(17.45±0.19)%vs (3.69±0.09)%,P<0.01]。5例复发/难治TP53突变DLBCL患者使用含有地西他滨方案治疗后，总有效率为40%(2/5),主要不良反应为骨髓抑制，未出现治疗相关死亡。结论:地西他滨可增强阿霉素对TP53突变DLBCL细胞株的增殖抑制作用，阻滞细胞周期。含地西他滨方案治疗TP53突变DLBCL显示出一定疗效，安全性良好，值得进一步探索。

[目的]探讨氢气疗法减轻放射性肺损伤的作用及其具体作用机制。[方法]将40只C57BL/6小鼠，随机分为正常对照组、模型组、氢气治疗一组和氢气治疗二组。构建放射性肺损伤小鼠模型。HE染色观察小鼠肺组织病理变化；免疫荧光染色技术分别检测M1、M2亚型巨噬细胞表面分子标志物的表达情况，观察巨噬细胞极化情况；免疫组织化学检测肺组织中细adoptive cancer immunotherapy胞因子IL-6、TNF-α和IL-10的表达变化；Western blot检测NF-κB p65和P-NF-κB p65的表达情况。[结果] HE染色显示，与对照组相比，模型组肺组织肺泡间隔水肿增厚、血管扩张充血，炎细胞浸润，而氢气治疗组病变比模型组明显减轻，炎症反应减弱，且治疗二Emricasan IC50组较治疗一组明显。免疫组化结果显示，与对照组相比，模型组细胞因子IL-6和TNF-α表达明显升高，而治疗组较模型组表达明显降低，治疗组抗炎因子IL-10较模型组表达升高。且治疗二组比治疗一组明显。免疫荧光显示，与对照组相比，模型组M1亚型巨噬细胞表面分子标志物表达上调，治疗组表达明显下调，同时M2亚型巨噬细胞表面分子标志物表达上调，且治疗二组较治疗一组上调明显。蛋白免疫印迹结果显示，与对照组相比，模型组P-NF-κB p65/NF-κB p65明显增加，与模型组相比，氢气治疗组明显降低，且治疗二组较治疗一组降低更加明显。[结论]吸入氢气疗法可能通过抑制NF-κB信号通路促进巨噬细胞M1亚型向M2亚型极化减轻放射性肺损伤的Barasertib NMR炎症反应。

利拉鲁肽是一类多肽药物,现临床上主要用于治疗2型糖尿病和减肥。其上市制剂为皮下注射制剂,为提高患者用药顺应性,本课题将其制备为鼻用原位凝胶。目的:制备鼻腔给药的利拉鲁肽原位凝胶,减少药物在制备中的损失,同时规避注射给药GSK1120212采购方式,提高顺应性;采用不同的凝胶递送,增加药物生物利用度,提高药效。对制备得到的凝胶进行质量评价、稳定性试验、溶蚀考察以及药效学评价。方法:(1)通过对流动相中的缓冲盐离子强度和比例以及梯度洗脱条件的筛选,建立了高效液相色谱法用于测定利拉鲁肽的含量。(2)以胶凝温度为主要指标,单因素考察不同温敏凝胶基质的用量比例,采用CCD响应面法优化处方工艺,并对温敏凝胶进行质量评价、稳定性试验;采用无膜溶出法探究其体外释药规律。(3)以p H值和粘度为指标,对p H敏感凝胶进行初步筛选后,采用正交实验进行优化得到最佳处方;同上进行药剂学考察。(4)以SD雄性大鼠为实验动物,以皮下注射利拉鲁肽溶液为阳性对照,鼻腔给予生理盐水为阴性对照,研究利拉鲁肽溶液和两种原位凝胶鼻腔给药后血糖下降百分比变化,计算相对生物利用度。(5)Digital Biomarkers通过小鼠鼻腔成像观察鼻腔滞留及荧光强度。结果:(1)利拉鲁肽原位凝胶含量测定方法的方法学验证结果表明,本文所建立的含量测定方法准确灵敏可靠,可用于利拉鲁肽原位凝胶含量的测定。(2)温敏凝胶的制备:取P407 2.54 g,P188 0.49 g,PVP 0.1 g后加入PBS溶液至10m L,4℃冷藏溶胀,再加入质量浓度5%苯扎溴铵20μL和8.00 mg利拉鲁肽,分散均匀即得。p H敏感凝胶的制备如下:分别配制5 m L 0.5%的卡波姆溶液和0.4%的HPMC溶液,室温下溶胀24小时后,混合均匀。随后分散入8.00 mg利拉鲁肽搅拌均匀,最后加入质量浓度5%的苯扎溴铵20μL。采用无膜溶出法研究了利拉鲁肽原位凝胶的体外溶蚀和释药特性。发现凝胶的溶蚀与释放均符合零级动力学方程(Zero-level kinetic model)(3)大鼠药效学显示,利拉鲁肽温敏凝胶(Lrg-TS-ISG,Liraglutide Temperature Sensitive In Situ Gel)生物利用度更高,F_(12)为(4.19±1.0)%,F_(24)为(8.98±2.75)%,与生理盐水组相比较具有显著性差异,利拉鲁肽p H敏感凝胶(Lrg-p H-ISG,Liraglutide p H Sensitive In Situ Gel)与生理盐水组相比没有显著差异。(4)鼻腔荧光显示,经凝胶递送可增强鼻腔滞留,其中,Lrg-TS-ISG滞留效果更明显。结论:利拉鲁肽原位凝胶的制备工艺简单。Lrg-TS-ISselleckchem Smoothened AgonistG相较于Lrg-p H-ISG更加稳定,易于存放。用于鼻腔给药后,延长滞留时间,顺应性得以提高,Lrg-TS-ISG生物利用度更高。

大豆疫霉根腐病(soybean Phytophthora root rot,PRR)是一种土传性病害,由大豆疫霉购买GSKJ4(Phytophthora sojae)引起,在我国造成巨大经济损失,是我国重要的对外检疫对象。大豆疫霉遗传多样性丰富,不同地域优势生理小种存在差异。田间部分强毒力大豆疫霉已攻克所有已知的大豆抗性基因,抗性品种失效。化学防治是控制病害发生和流行的重要手段,生产中可用药剂种类少,长期及不合理使用导致抗药性问题频发,病害防控困难。亟需从大豆疫霉生长发育及致病分子机制出发,设计新型化学防控策略。本文通过抑制剂筛选、RNA-seq和CRISPR/Cas9基因敲除技术,对他汀类抑制剂活性、抑制剂胁迫下的转录变化及重要基因的生物学功能进行研究,主要成果如下:1.他汀类抑制剂对大豆疫霉活性测定MVA途径(Mevalonate pathway,MVA pathway)是他汀类抑制剂的药理靶标,使用他汀类抑制剂处理大豆疫霉,大豆疫霉菌丝生长减慢,产孢减少,致病力降低。其中洛伐他汀、氟伐他汀和辛伐他汀影响大豆疫霉的生长发育和致病,阿托伐他汀影响大豆疫霉的生长发育,说明他汀类抑制剂在不同程度上影响大豆疫霉生长发育和致病;抑菌试验测定表明洛伐他汀活性最好,其次是辛伐他汀、氟伐他汀和阿托伐他汀;在80μg/m L浓度下,显著抑制大豆疫霉、致病疫霉、辣椒疫霉和终极腐霉的菌丝生长,洛伐他汀可作为防治疫霉和腐霉病害的候选抑制剂。2.转录组分析揭示洛伐他汀影响大豆疫霉菌丝生长的关键途径洛伐他汀处理大豆疫霉菌丝后,鉴定差异表达4倍以上的基因142个,KEGG(Kyoto Encylopaedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析发现大多数差异表达基因显著富集在氨基酸等代谢途径;支链氨基酸(Branched-chain amino acids,BCAAs)途径AHAS的编码基因Ps109190受影响最大;揭示BCAAs途径在大patient-centered medical home豆疫霉的发育和侵染过程具有重要的功能,AHAS抑制剂唑嘧磺草胺具有抑制大豆疫霉菌丝生长的活selleckchem MK-2206性。3.大豆疫霉CDC43基因调控生长发育和致病洛伐他汀作为竞争性抑制剂,能与HMG-CoA还原酶结合,阻断MVA合成。洛伐他汀胁迫下大豆疫霉MVA途径的基因表达受到影响,其中PsCDC43(编码香叶基香叶基转移酶)受影响较大,推测该基因可能影响大豆疫霉生长发育与致病。生物信息学分析表明,PsCDC43与植物的香叶基香叶基转移酶基因相似性更高,具有保守的G(Q/E)基序。敲除PsCDC43基因的突变体菌落形态发生改变,孢子囊和卵孢子产量均降低,致病力减弱,揭示了该基因具有调控生长发育和致病的重要功能。

目的 探讨四神丸(SSP)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎小鼠巨噬细胞极化的调控机制。方法 将C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组、模型组、四神丸组和美沙拉嗪组，每组10只。除正常组外，其余各组小鼠采用“2.5%DSS(第1～7天)——自由饮水LEE011分子式(第8～14天)——2.5%DSS(第15～21天)”方法复制慢性结肠炎。同时造模第8天开始予以左金丸、美沙拉唑肠溶片灌胃处理，连续14天。造模第22天，观察小鼠一般情况及结肠病理学变化，采用流式细胞术测定结肠组织中CD11b~+F4/80~+细胞的MHC-II~+、iNOS~+、CD163~+、CD209~+及Ki-67~+表达水平，蛋白印迹法检测结肠组织中己糖激酶2(HK2)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)和M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白表达水平。结果 与模型组比较，SSP可有效改善DSS诱导结肠炎小鼠体重变化率、疾病活动指数、结肠长度、肠重指数和黏膜镜下评分(P<0.05,P<0.01);降低结肠炎小鼠结肠组织中CD11b~+F4/80~+Ki-67~+、CD11b~+F4/80~+MHC-II~+、CD11b~+F4/80~+iNOS~+的表达水平(P<0.05,P<0.01),提升CD11b~+F4/80~+CD163~+E7080浓度、CD11b~+F4/80~+CD20age of infection9~+的表达水平(P<0.05,P<0.01);同时伴见结肠炎小鼠结肠组织中HK2、PFK1和PKM2蛋白表达量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论 四神丸能够通过重塑巨噬细胞M1/M2的平衡而有效治疗DSS诱导的小鼠慢性结肠炎，其作用机制与HK2、PFK1和PKM2信号介导的糖酵解受到抑制有关。

为探究四川盆地北缘大气持久性有机物的垂直分布特征与该区域大气中典型多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs)对人支气管上皮细胞(Human Bronchial Epithelial Cells,16HBE)的毒性作用,本研究于2021年9月16日—2021年12月31日用大气被动采样器在观雾山(山区)6个海拔高度、窦圌山(景区)5个海拔高度与绵阳电视塔(城市)6个不同高度上开展了持久性有机物样品采集,用气相色谱质谱联用仪(GC-MS/MS)对PAHs、多氯联苯(Polychlorinated Biphenyl,PCBs)和有机氯农药(Organochlorine pesticides,OCPs)的含量与组成进行测定分析,用该区域大气PAHs中浓度占比前两位的菲(Phenanthrene,Phe)和荧蒽(Fluoranthene,Fla)以不同时间、不同浓度单独或联合对16HBE细胞进行暴露试验,以细胞存活率、细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)以及线粒体膜电位等指标判断Phe与Fla对16HBE细胞的毒性作用,并结合该区域2021年典型呼吸道疾病入院人数调查,分析大气污染对人呼吸道的不利影响,主要结论如下:(1)研究期间四川盆地北缘(山区、景区、城市)大气中16种PAHs的平均Oncologic pulmonary death质量浓度为3.38～26.59 ng/m~3,其中苯并芘(Benzopyrene,Ba P)的平均质量浓度为0.003～0.019ng/m~3,低于环境空气质量标准(GB3095—2012)所规定的二级标准1 ng/m~3。18种大气PCBs的平均质量浓度为19.52～58.15 pg/m~3;13种OCPs的平均质量浓度为43.95～128.39 pg/m~3,基本呈现山区大气持久性有机物浓度随海拔的升高而降低,景区大气持久性有机物浓度随海拔的升高而升高,城市大气持久Crizotinib NMR性有机物浓度随大气高度升高呈先降selleckchem CB-839低后升高再降低趋势。由来源解析得知,秋冬季四川盆地北缘大气PAHs的主要来源为煤炭燃烧和交通排放;大气PCBs的主要来源为变压器油源、有机颜料源、油漆源和废弃物燃烧源;大气OCPs主要来源为三氯杀螨醇和工业滴滴涕的混合,以及农业与工业六六六的历史残留。健康风险评价显示四川盆地北缘大气PAHs的总毒性当量未超出世界卫生组织(World Health Organization,WHO)规定的浓度限值(1 ng/m~3),大气PCBs与OCPs的致癌和非致癌风险未超出参考值(致癌风险参考值为1×10~(-6),非致癌风险参考值为1)。(2)通过细胞存活率和LDH活性试验表明,Phe和Fla单独或联合暴露于16HBE细胞后,均会对其产生毒性效应,即细胞存活率下降、细胞膜损伤、线粒体膜电位下降,随着Phe和Fla浓度的增加,16HBE细胞存活率不断下降,呈现一定的剂量-效应关系;Phe和Fla联合后会增强对16HBE细胞的毒性,在降低16HBE细胞存活率上,Phe和Fla表现为协同作用,在对细胞膜的破坏上,两者表现为独立或加和作用。通过氧化应激试验表明,Phe和Fla单独或联合暴露于16HBE细胞后,均会对其造成一定的氧化损伤,表现为ROS含量上升,SOD酶活性急性升高,在Phe和Fla联合诱导16HBE细胞氧化损伤方面表现为协同作用。(3)通过对2021年四川盆地北缘某地两家大型综合医院的典型呼吸道疾病患者信息的收集调查、大气颗粒物浓度和气象因素的日均值统计分析得出,大气颗粒物(PM_(2.5)、PM_(10))、湿度与典型呼吸道疾病的入院人数呈正相关,温度与入院人数呈负相关;秋冬季为呼吸道疾病的高发时段,部分呼吸道疾病的入院人数在秋冬季显著升高;慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)与肺癌的入院人数中占比较高的人群为钢铁厂退休人员和农民(23.21%～35.71%)。

目的 分析P53基因单核苷酸多态性及人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染与食管癌的关系。方法 选取2018年5月-2021年5月重庆两江新区人民医院收治的103例食管癌患者(食管癌组)和100例食管黏膜炎病变患者(对照组),采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测P53基因单核苷酸多态性，采用PCR检测HPV16/18亚型分布情况。结果 两组P53基因rs1042522位点Pro/Pro、Pro/Arg、Arg/Arg基因型及Pro、Arg等位基因分布频率比较，差异均有统计学点击此处意义(P<0.05);食管癌患者P53基因rs1042522位点多态性与分化程度、TNM分期和淋巴结转移https://www.selleck.cn/products/mrtx1133.html有关(P<0.05);食管癌组组织中HPV16、HPV18阳性率分别为52.43%、32.04%,高于对照组的16.00%、10.00%(Pmedical simulation<0.05);食管癌组HPV16阳性、HPV18阳性患者P53基因rs1042522位点Arg/Arg基因型占比均高于HPV16阴性、HPV18阴性患者(P<0.05)。结论 P53基因rs1042522位点多态性可能是食管癌遗传易感性的因素之一，Arg/Arg基因型携带者更容易发生HPV16/18相关食管癌。

目的 探究狼毒效应部位中主要萜类成分模拟醋制前后毒、效作用变化，阐释狼毒醋制解毒存效的机制，探寻狼毒醋品质量标志物。方法 将狼毒萜类成分Eupractenoid A(EA)、Jolkvery important pharmacogeneticinolide B(JNB)、Fischeria A(FA)采用模拟醋制法在160℃加6%冰醋酸加热40 min,以Western blot法分析3种萜类成分醋制前后对巨噬细胞RAW264.7中TNF-α和IL-Pevonedistat采购1β蛋白表达水平影响的差异；以Western blot法分析3种萜类成分醋制前后对肾小管上皮细胞HK-2中AQP1及肾集合管上皮细胞mIMCD3中AQP2、3、4蛋白表达水平影响的差异。结果 EA、JNB、FA可诱导巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-1β蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。EA、JNB、FA醋制后致炎毒性均显著下降。EA主要转化产物Euphebracteolatin A(EHTA)无明显促炎毒性。药效评价显示，EA及其模拟醋制产物可显著抑制AQP1、3、4蛋白表达(P<0.05),EA醋制后对AQP1、2、4蛋白表达的抑制作用显著增强(P<0.05)。EHTA对肾细胞AQP1、2、3蛋白表达的抑制作用显著强于EA(P<0.05),对AQP4蛋白表达的抑制作用与EA相比无显著性差异，表明EA醋制可增强药效。JNB可显著抑制AQP1、3蛋白表达(P<0.05)。其模拟醋制产物可显著抑制AQP1、2、3、4蛋白表达，且JNB醋制后对AQPMG1322、3、4蛋白表达的抑制作用显著增强(P<0.05),表明JNB醋制后药效增强。FA醋制后对AQPs调节作用显著降低(P<0.05),但高剂量组仍起作用。结论 狼毒主要萜类效应成分经模拟醋制后致炎毒性减弱，但醋制后药效总体呈现增强或保留。同时EA转化产物EHTA无明显促炎毒性，药效作用强于其转化前体EA,可作为狼毒醋制品质量控制指标。

目的随着组学和高通量测序技术研究成本的不断降低,它们的应用在研究界变得愈加广泛。与此同时,新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的大流行正在不断给院感防控带来新的挑战。明确医院环境物表的细菌和真菌群落结构,特别是在COVID-19大流行期间,对控制传染源、完善院感防控措施及降低院感发生率具有重要意义。为此,本研究针对医院物表的细菌和真菌,使用扩增子测序技术进行病原监测,以明确医院环境物表的细菌和真菌群落结构,并结合生信分析和统计分析的方法研究细菌和真菌病原的分布特征,评估可能存在的院感风险。方法本研究在COVID-19大流行期间,在三家医院内总计收集了 126个环境物表样本。在实验室内完成CP-690550样本的核酸提取和文库构建后,使用二代扩增子测序技术一共取得16S核糖体核糖核酸(ribosomal Ribo Nucleic Acid,rRNA)序列17,722,444条,内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)rRNA 序列 13,159,610 条。16S rRNA 序列和 ITS rRNA序列分别经过deblur和dada2过滤后分别取得了 6,093条和13,514条代表性序列。之后基于Greengenes数据库和UNITE数据库完成代表性序列的物种分类和注释。依据代表性序列的特征性分布计算样selleck HPLC本的α多样性和β多样性,使用edgeR完成差异比较,并结合线性判别分析确定优势物种。最后,使用高丰度的代表性序列初步构建系统发育关系后,再使用BugBase完成细菌群落的表型预测,最后通过重建未观察状态进行群落系统发育研究和FAPROTAX数据库完成功能预测。结果COVID-19大流行期间,三家医院环境物表的优势细菌为厚壁菌门(51.6%)和拟杆菌门(25.0%),优势真菌为子囊菌门(39.4%)和担子菌门(14.2%)。本研究通过扩增子测序的方法成功鉴定出了部分潜在的病原Genetic Imprinting体,包括12种细菌病原和29种真菌病原,并在室外环境、公共区域、住院区域和限制区域之间比较细菌和真菌的群落构成差异。最后,通过表型预测和功能分析,发现革兰氏阴性菌与革兰氏阳性菌的比例约为3:7;A、B、C三家医院中压力耐受细菌的比例分别为88.9%、93.0%、93.8%;室外环境、公共区域、住院区域和限制区域中厌氧菌的占比分别为39.6%,77.7%,87.9%和79.6%。最后,与细菌相比,真菌的群落结构存在更广泛的相似性。结论将扩增子测序技术应用于医院环境的病原监测,可在一定程度解决部分微生物难培养的问题。其监测结果结合分子流行病学分析,有助于明确传染源、发现潜在的传播途径、帮助研究者深入理解微生物群落的结构特征与物种间的内在联系。本研究明确了COVID-19大流行期间三家医疗机构细菌和真菌群落结构与分布特征,并预测了部分重要表型。我们发现,针对β-内酰胺和多粘菌素耐药细菌感染的防控值得重视。

致吐毒素是一种蜡样芽孢杆菌产生的引起呕吐的毒素,被动物或人摄入后会引起神经系统毒性。本研究从细胞水平上研究致吐毒素对整合应激反应的调控作用,及整合应激反应抑制改善致吐毒素诱导神经毒性的分子机制。结果发现,使用不同剂量的致吐毒素处理PC12细胞24 h后,细胞活力、凋亡、线粒体功能、细胞周期阻滞和自噬及其相关基因和蛋白被分析检测。致吐毒素在6.25-25 ng/mL剂量处理神经细胞可导致神经细胞毒性作用,诱发细胞凋亡,其分子机制涉及上调ROS水平,诱导线粒体功能失调,同时下调CCompound C IC50yclin D蛋白的表达诱导细胞G1期阻滞,此外上调p-mTOR、p62蛋白表达,下调L3Ⅱ蛋白,抑制细胞自噬。同时,我们研究发现致吐毒素在25 ng/mL剂量下可显著促进PC12细胞中ATF4蛋白表达,激活整合应激反应。抑制整合应激反应,或沉默ATF4基因,可immune diseases显著改善致吐毒素诱导的神经细胞毒性作用及细胞凋亡;mTOR抑制剂雷帕霉素可以显著抑制由致吐毒素引起的p-mTOR的表达上调,并且抑制整合应激相关蛋白,改善致吐毒素诱导的PC12细胞凋亡。综上,我们的结果揭示了吐毒素诱导的神经毒性涉及mTOR/ATF4Lapatinib供应商信号通路介导的整合应激反应;本研究为致吐毒素神经毒性分子机制研究提供了新的方向。