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目的 基于网络药理学和动物实验研究血府逐瘀汤治疗特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法 于TCMSP数据库筛选血府逐瘀汤的潜在活性成分和作用靶点，并通过相关数据库分析IPF相关靶点，两者取交集后获得血府逐瘀汤治疗IPF的关键靶点；通过STRING平台和Cytoscape软件构建血府逐瘀汤潜在活性成分-靶点调控网络和蛋白互作网络，并对网络进行拓扑分析PF-03084014使用方法，获取血府逐瘀汤治疗IPF的核心靶点；对核心靶点进行功能富集分析，预测血府逐瘀汤治疗IPF的作用机制。通过动物实验对网络药理学研究结果进行验证Dolutegravir生产商，构建IPF大鼠模型，进行HE和Masson染色，采用ELISA法检测肺组织羟脯氨酸水平，并对富集分析筛选出的相关信号通路中关键蛋白的表达进行分析。结果 共获取血府逐瘀汤治疗IPF的158个关键靶点，拓扑分析后，得到核心靶点20个，主要富集于病毒感染相关通路。动物实验表明，血府逐瘀汤能改善IPF大鼠肺泡炎症反应和纤维化程度，并降低Kaposi’s肉瘤相关疱Hepatitis B chronic疹病毒感染通路中关键蛋白STAT3、ERK和TLR3的表达。结论 血府逐瘀汤可能通过多成分、多靶点、多途径影响病毒感染相关信号通路，发挥抗肺纤维化作用。

目的 探讨肉碱棕榈酰转移酶1A(palmitoyl-transferase 1A, CPT1A)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)肾间质纤维化中的作用。方法 16只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为(n=8):对照组(Ctrl组SB203580 IC50，给予普通饲料喂养)和chemiluminescence enzyme immunoassayDKD组[通过高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)制备DKDPR-171采购模型]。每4周收集小鼠24 h尿液，检测空腹血糖和体质量。建模16周(小鼠20周龄)后取材并检测2组小鼠血肌酐水平、尿蛋白/尿肌酐比值，PAS和Masson染色观察肾小球病理改变和肾间质纤维化程度，免疫组化染色、Western blot观察CPT1A及纤维化标志物的表达。体外培养人近端肾小管上皮细胞(proximal tubular cell line, HK-2)后分3组：正常对照(Ctrl)组、30 mmol/L高糖(high glucose, HG)组、30 mmol/L甘露醇(mannitol, M)组，孵育48 h后观察CPT1A、纤维化标志物的表达。CPT1A过表达质粒转染HK-2细胞后再予以30 mmol/L高糖处理，观察各组细胞形态和纤维化标志物的表达。结果 与Ctrl组小鼠相比，DKD组小鼠肾小球体积增大、系膜基质增多和出现肾间质纤维化，同时血肌酐、尿蛋白/尿肌酐比值显著升高(P<0.05),肾组织CPT1A表达明显降低，而纤维化标志物表达显著升高。体外实验中：高糖导致HK-2细胞失去原有形态、呈长梭形改变，CPT1A表达降低和纤维化标志物表达升高，并与渗透压改变无关。而CPT1A过表达能抑制高糖诱导的HK-2细胞形态改变和纤维化标志物高表达。结论 上调CPT1A表达可能对糖尿病肾病肾间质纤维化具有潜在的抑制作用。

目的 观察益气祛腐生肌疗法促进2型糖尿病(T2DM)老年患者肛瘘术后创面愈合的疗效及具体的作用机制。方法 选取96例肛瘘伴T2DM的老年患者随机数表法分为两组。对照组48例术后采用甲硝唑纱条填塞；实验组48例术后利用自制益气祛腐生肌纱条填塞。观察两组术后1、2、4 w水肿及肉芽组织生长变化情况，记录并统计两组腐肉脱落和创面愈合时间。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肉芽组织中白细胞介素(IL)-6、IL-8、血管内皮生长因子(VEGF更多)及血浆血管性血友病因子(vWF)的表达。光学倒置显微镜下观察毛细血管数。Western印迹检测创面组织中转化生长因子(TGF)-β/p-Smad3/基质金属蛋白酶(MMP)-1信号通路相关蛋白的表达。结果 两组术后水肿评分、IL-6、IL-8、MMP-1水平逐渐降低，差异有统计学意义(均P<0.05Cell Biology Services);两组术后1 w水肿评分、IL-6、IL-8、MMP-1水平差异无统计学意义(P>0.05),术后2、4 w实验组水肿评分、IL-6、IL-8、MMP-1水平均明显低于对照组(均P<0.05)。两组术后肉芽组织生长评分、VEGF、vWF、Twww.selleck.cn/products/mk-4827GF-β1、p-Smad3、胶原(collagen)Ⅰ、Ⅱ水平逐渐升高，差异有统计学意义(均P<0.05);两组术后1 w肉芽组织生长评分、VEGF、vWF、TGF-β1、p-Smad3、collagenⅠ、Ⅱ水平差异无统计学意义(P>0.05),术后2、4 w实验组肉芽组织生长评分、VEGF、vWF、TGF-β1、p-Smad3、collagenⅠ、Ⅱ水平均明显高于对照组(均P<0.05)。实验组术后腐肉脱落时间和创面愈合时间均明显短于对照组(均P<0.05)。创面肉芽组织毛细血管数量比较：术后4 w>术后2w>术后1 w,且术后1、2、4 w,实验组创面肉芽组织毛细血管数量均明显高于对照组(均P<0.05)。结论 益气祛腐生肌疗法有助于加快T2DM老年患者肛瘘术后创面的愈合，减轻水肿程度，促进肉芽组织良好生长，降低疼痛，其机制可能与减轻局部炎症反应，促进创面新生毛细血管的生成，改善局部微循环，调控TGF-β/p-Smad3/MMP-1信号通路，加快细胞外基质在创面的沉积有关。

目的 探讨钩藤降压解郁方（钩藤、天麻、地龙、葛根等）调控TLR4/NBAY 73-4506溶解度F-кB信号通路对高血压并发抑郁症（HD）大鼠海马小胶质细胞极化的影响。方法 将40只原发性高血压大鼠随机分为5组：模型组、阳性药组及中药（钩藤降压解郁方）高、中、低剂量组，每组8只；另取8只SD大鼠作为对照组。采用连续42 d慢性应激（CUMS）结合孤养的方式复制HD模型。造模同时给药干预，中药高、中、低剂量组分别给予钩藤降压解郁方29.61、14.81、7.40 g·kg-1灌胃给药；阳性药组给予左旋氨氯地平0.45 mg·kg-1+氟西汀1.8 mg·kg-1灌胃给药；灌胃体积10 mL·kg-1，每天1次，连续42 d。采用无创血压计于给药前及每周最末日上午测量大鼠尾动脉收缩压；造模开始后的第2周和最后1周各进行1次糖水偏好行为学检测；造模结束后进行水迷宫实验；ELISA法测定血清炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10水平；HE染色法及尼氏染色法观察大鼠海马组织神经元病理变化；免疫荧光双染法检测海马区小胶质细胞M1(CD16)、M2(CD206)型表达情况；Western Blot法检测海马组织中TLR4、NF-κB p65蛋白的表达情况。结果 与对照组比较，模型组大鼠第1～6周的尾动脉收缩压均显著升高（P<0.01）；糖水偏好率显著下降（P<0.01）；逃避潜伏期明显延长（P<0.05,P<0.01），穿越平台次数及目标象限停留时间占比显著降低（P<0.01）；血清TNselleck HPLCF-ɑ、IL-1β含量显著上升（P<0.01）,IL-10含量显著下降（P<0.01）；胞核深染，胞质固缩，细胞凋亡明显；海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显降低（P<0.05）；海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著上调（P<0.01）。与模型组比较，给药组大鼠第1～6周的尾动脉收缩压均显著降低（P<0.01）；糖水偏好率均明显上升（P<0.05）；血清TNF-ɑ、IL-1β含量显著下降（P<0.01）,IL-10含量显著上升（P<0.01）；尼氏体丰富，细胞凋亡明显减少。阳性药组及钩藤降压解郁方高剂量组大鼠的逃避潜伏期明显缩短（P<0.05,P<0.01），穿越平台次数及目标象限停留时间占比明显增加（P<0.05）；海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显升高（P<0.05,P<0.01）；海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显下调（P<0.05,P<0.01）。结论 钩藤降压解郁方可能通过抑制TLR4/NF-кB通路medical decision调节HD大鼠海马小胶质细胞极化状态，调控炎症因子分泌，减轻海马神经元损伤。

【目的】本研究旨在探索肠道菌群及幽门螺杆菌(HP)感染对Graves病(GD)发病的影响。【方法】本研究纳入GD患者88例和健康人群33例作为研究对象,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血浆HP-Ig G水平,用16Sr DNA基因扩增,Illumina平台测序分析粪便标本肠道菌群多样性等,通过液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)对肠道代谢物含量进行检测,并进行相关通路注释。分析GD组和对照组之间、GD组内部的HP~+亚组和HP~-亚组之间肠道菌群和代谢物的差异性。【结果】1.GD组和对照组之间的Ipatasertib核磁肠道菌群测序发现菌群丰度有统计学差异,发vaccine-preventable infection现GD组拟杆菌门、乳杆菌科、巨单胞菌属、普雷沃氏菌属-9等显著增高,而红蝽菌纲等降低。2.GD组和对照组之间代谢物含量有统计学差异,GD组3-甲酰基-6-羟基吲哚、犬尿烯酸、吲哚-3-丙酸、甘油磷脂类等代谢物升高,而肉豆蔻粉B、辣椒素、苯丙素类等代谢物降低。色氨酸代谢通路、烟酸和烟酰胺代谢通路、赖氨酸生物合成和降解通路等的异常可能是GD的潜在发病机制。3.GD+HP~+https://www.selleck.cn/products/ch-223191.html亚组和GD+HP~-亚组之间肠道菌群丰度有统计学差异,发现GD+HP~+组乳杆菌属、丹毒丝菌科、梭菌科、瘤胃球菌属等显著增高。4.GD+HP~+亚组和GD+HP~-亚组之间代谢物有统计学差异,发现GD+HP~+组N-甲基酪胺、N-异戊酰氨基乙酸、咖啡油醇等代谢物降低。GD+HP~+组较GD+HP~-组有精氨酸和脯氨酸代谢、酪氨酸代谢、卟啉和叶绿素、初级胆汁酸生物合成、烟酸和烟酰胺代谢、D-精氨酸和D-鸟氨酸代谢、核黄素代谢等通路的参与。【结论】1.GD组拟杆菌门、普雷沃氏菌属、乳杆菌科等的明显增高引起的吲哚-3-丙酸等的增高可能参与了GD的发病。2.GD+HP~+亚组和GD+HP~-亚组之间存在明显的肠道菌群和代谢物差异,GD+HP~+亚组乳杆菌属等的增高。3.肠道菌群失调和肠道代谢物紊乱与GD发病密切相关。

【目的】1研究骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对阿霉素肾病的治疗作用。2探讨BMSCs是否通过改善阿霉素肾病大鼠的氧化应激实现对肾脏损伤的修复。3探索BMSCs抗氧化应激的可能CL13900说明书机制。【方法】1模型构建:(1)24只雄性SD大鼠随机分为3组(每组8只),阿霉素肾病组(ADR组)的造模方式为尾静脉注射阿霉素(4 mg/kg),间隔两周后再次注射同等剂量阿霉素;BMSCs治疗组(BMSCs组)的造模方式同ADR组,并于末次阿霉素注射9周时经肾动脉注射1 m L BMSCs悬液(细胞数量约为2×10~6个);在同样的时间节点,对照组(Control组)经尾静脉注射生理盐水,经肾动脉注射1 m L L-DMEM培养基。(2)模型检测:在末次注射阿霉素8周时收集24 h尿液,成功的标准为24 h尿蛋白>100 mg。2肾脏结构和功能检测:24 h尿蛋白、血肌酐(Serum Creatinine,Scr)和血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)评估肾功能。课题组通过光镜观察肾脏病理结构,透射电镜观察基底膜、足细胞及线粒体,明确BMSCs对阿霉素肾病的治疗作用。3氧化应激指标检测:通过免疫荧光染色检测活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的表达,ELISA检测氧化应激相关因子(T-AOC、T-SOD及MDA)的水平,探讨BMSCs对阿霉素肾病大鼠氧化应激的改善。4分子机制研究:Western Blot和免疫荧光染色检测AMPK/SIRT1/PGC-1α轴相关因子的表达,探索BMSCs是否通过AMPK/SIRT1/PGC-1α轴改善阿霉素肾病大鼠的氧化应激。Western Blot检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax以及足突裂孔隔膜相关蛋白nephrin的表达情况,研究BMSCs是否可以改善氧化应激导致的细胞凋亡和足细胞损伤。【结果】1课题组成功建立了阿霉素肾病大鼠模型。2 BMSCs可改善阿霉素肾病大鼠肾功能及肾脏结构。与ADR组相比,BMSCs组的Scr、24h尿蛋白明显改善(P<0.05),但BUN改善不明显;BMSCs组肾小球硬化、肾小管扩张以及肾间质纤维化减轻。透射电镜观察到ADR组肾基底膜结构模糊,厚度不均,足突融合,线粒体明显肿胀,而BMSCs组的状况好转。3 BMSCs通过抗氧化应激实现对阿霉素肾病大鼠的治疗。与ADR组相比,BMSCs组的氧化应激指标ROS和MDA明显降低(P<0.05),而抗氧化应激指标T购买MK-1775-AOC和T-SOD明显升高(P<0.05)。4 BMSCs可能通过AMPK/SIRT1/PGC-1α轴改善氧化应激,抑制了细胞凋亡并修复滤过屏障损伤。具体表现如下:与ADR组相比,BMSCs组p-AMPK、SIRT1、PGC-1α表达上调,nephrin和Bcl-2表prescription medication达上调,以及Bax表达下调。【结论】1 BMSCs可减轻阿霉素肾病大鼠的蛋白尿,改善肾功能,延缓疾病的进展。2 BMSCs通过抗氧化应激发挥治疗作用,抑制了细胞凋亡并减轻足细胞损伤。3 BMSCs可能通过AMPK/SIRT1/PGC-1α轴发挥抗氧化应激作用。

具有阳离子和两亲特点的季铵盐类表面活性剂作为抗菌剂已广泛应用于日化、医药、生物等领域。最近研究表明,相比于单体,阳离子两亲分子聚集体在抗菌性能方面具有更大的优势。但目前聚集体与细菌膜的相互作用方式仍然不清楚。因此,发展具有强自组装能力并含有荧光基团的阳离子表面活性剂有利于高效抗菌剂的开发和对其抗菌机理的探究。本论文中,我们引入具有聚集诱导发光(AIE)性质的四苯乙烯(TPE)基团来构建阳离子两亲荧光分子抗菌剂,对其光物理和自组装性质以及抗菌性能进行了具体表征,并基于TPE基团的荧光性质可视化了其聚集体与细菌的相互作用,揭示其抗菌机理。取得的主要研究进展如下:1.发展了含TPE的单头双尾型季铵盐表面活性剂,通过改变季铵盐头基的位置来调节其聚集行为,从而调控其抗菌活性;并基于TPE基团的荧光性质来监测其聚集体与细菌的相互作用。研究表明,三个分子在PBS中的临界聚集浓度(CAC)分别为3.3μM、1.6 μM和3.0 μM。在CAC以上,分别组装形成表面带正电荷粒径为250nm、450 nm和300 nm的立方体形聚集体。这些聚集体对金黄色葡萄球菌的抗菌效率遵循:T6N4C>T2N8C>T10NC,其杀菌效率达100%的浓度分别为10 μM、20 μM和50μM。荧光成像、SEM以及电位结果表明:三个分子形成的聚集体是通过破坏金黄色葡萄球菌的细菌膜来杀死细菌,但三个分子破膜速率不同,具有最低CAC值即最强自组装能力的T6N4C,抗菌活性达到100%所用时间最短。同时,T6N4C也具有良好的生物相容性,浓度增大至100 μM,细胞的存活率仍接近100%。因此,具有强自组装能力的阳离子两亲分子表现强的杀菌活性。2.设计合成了含TPE的Gemini型表面活性剂,通过改变疏水链长来调节其聚集行为,从而调控其抗菌活性;并基于TPE基团的荧光性质监测其聚集体与细菌的相互作用。研究表明,四个分子在PBS中的CAC分别为0.60、0.58、0.56和0.36 μM。在CAC以上,分别组装形成表面带正电荷粒径为105 nm、250 nm、100 nm和280 nm的球形聚集体。这些聚集体对金黄色葡萄球菌的抗菌效率遵循:C8-TPE-C8>C10-TPE-C10>C12-TPE-C12>C14-TPE-C14,对于 C8-TPE-C8、C10-TPE-C10和 C12-TPE-C1selleck激酶抑制剂2 杀菌效率达到100%所需浓度分别为5 μM、20 μM和100 μM;而C14-TPE-C14浓度达到100 μM时抗菌效率仅为74%。通过荧光成像、SEM以及电位结果表明:四个分子形成的聚集体是通过破坏金黄色葡萄球菌的细胞膜来杀死细菌,疏水链短的分子形成排列较为疏松的聚集体,与细菌作用时容易解离成单体插入细菌膜或进入细菌内部,从而表现高效的杀菌活性。因而,疏水链短的C8-TPE-C8对金黄色葡萄球菌具有最高的抗菌活性。同时研究发现,疏水链短的C8-TPE-C8也具有低的细胞毒副作用和良好生物相容性。3.设计了含TPE的Bola型表面活性剂,将TPE基团引入Bola型表面活性剂的疏水骨架,通过改变连接基团的疏水性来调节其聚集行为,从而调控其抗菌活性Infiltrative hepatocellular carcinoma;进一步基于其在聚集态和单体态发射波长的不同监测其聚集体与细菌的相互作用。研究表明,三个分子在PBS溶液中的CAC分别是33.9 μM、3.70μM和1.81 μM,在CAC以上,组装形成表面带正电荷粒径为200 nm、150 nm和400 nm的立方体形3-Methyladenine研究购买聚集体。这些聚集体对金黄色葡萄球菌的抗菌效率遵循:TO6C>T2OE>TO2C,其杀菌效率达100%的浓度分别为10μM、100 μM和100 μM。然后通过荧光成像和荧光光谱研究了三个分子形成的聚集体与金黄色葡萄球菌相互作用的过程,对于在聚集态(456 nm)和单体态(480 nm)发射波长明显不同的TO2C分子,可以观察到其聚集体加入到金黄色葡萄球菌中,发射波长从聚集态的456 nm明显红移到了单体态的470nm,明确证实其聚集体的抗菌过程:先通过静电作用结合到金黄色葡萄球菌表面,然后解离成单体插入细菌膜展现抗菌活性。因此,形成的聚集体越容易解离成单体,插入细菌膜速率越快,但同时破坏细菌膜的速率也取决于两亲分子单体的亲疏水性,两方面因素共同决定阳离子两亲分子聚集体的抗菌活性。

依托咪酯(etomidate, ET)在临床上常被用clathrin-mediated endocytosis作麻醉剂。ET长期高剂量地使用会导致人类意识下降和认知障碍等负面效应。但ET对鱼类的神经毒性机制尚不清楚。在本文中，2 hpf (hours post-fertilization)的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度ET (0.010、0.091、0.501、9.400、84.31和664.4μg·L~(-1))至168 hpf。通过分析ET对斑马鱼胚胎生理发育、早期行为、细胞凋亡以及多巴胺(dopamine, DA)和γ氨基丁酸(gamma aminobutyric acid, GABA)通路相关基因转录表达水平的影响，评估其对斑马鱼幼鱼神经发育毒性。结果表明，664.4μg·L~(-1) ET显著增大48 hpf和60 hpf斑马鱼胚胎孵化率。0.091μg·L~(-1)和0.501μg·L~(-1) ET诱selleckchem LY-188011导168 hpf幼鱼体长减少。0.010、0.091、0.501、9.400、84.31和664.VX-661细胞培养4μg·L~(-1) ET增大48 hpf胚胎畸形评分。0.501、9.400、84.31和664.4μg·L~(-1) ET暴露显著增大96 hpf胚胎畸形评分。0.501、9.400和664.4μg·L~(-1) ET显著增大168 hpf胚胎畸形评分。0.010μg·L~(-1) ET促进了大脑细胞凋亡，而664.4μg·L~(-1) ET抑制了大脑细胞凋亡。行为分析显示，ET所有浓度均抑制触碰行为。0.091μg·L~(-1) ET增强幼鱼游泳行为，而664.4μg·L~(-1) ET减弱游泳行为。并且ET以浓度依赖的方式导致焦虑行为增加。qPCR分析结果表明，低浓度ET显著上调了DA和GABA通路相关基因的转录表达水平，而高浓度ET显著抑制了这些基因的转录表达水平。这些结果表明，ET对发育早期斑马鱼具有明显的神经发育毒性。

【背景】幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染十分常见,在我国约有44.2%的人群感染了Hp。Hp感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病密切相关,根除Hp可预防以上疾病的发生。近年来Hp抗生素耐药率逐渐上升,根除效果不断降低,目前根除Hp的一线方案存在着抗生素剂量高、副反应多等问题,因此,探索一种新的更简便有效的根除Hp方案具有重要意义。【目的】通过对比伏诺拉生联合呋喃唑酮阿莫西林三联7天疗法与铋剂四联14天疗法治疗Hp感染的疗效及安全性,为根除Hp寻找新的简便有效的治疗方法。【方法】本研究为前瞻性、随机对照、单盲、非劣效性研究,纳入2022年11月至2023年3月间~(13)C-尿素呼气试验阳性患者336例,随机平均分为三联疗法组及四联疗法组。三联疗法组:接受伏诺拉生联合呋喃唑酮阿莫西林三联7天疗法(伏诺拉生片20mg bid+阿莫西林胶囊750mg bid+呋喃唑酮片100mg bid疗程7天),四联疗法组:接受铋剂四联14天疗法(奥美拉唑肠溶胶囊20mg bid+胶体果胶铋胶囊200mg bid+阿莫西林胶囊1000mg bid+克拉霉素片500mg bid疗程14天)。治疗结束至少4周后复查~(13)C-尿素呼气试验,比较两组患者的Hp根除率、不良反应发生率。【结果】意向性(Intention to treat,ITT)分析中,三联疗法组Hp根除率为82.74%(139/168,95%CI:76.31%-8获悉更多7.71%),四联疗法组Hp根除率为77.98%(131/168,95%CI:71.31%-83.58%),率差为4.76%(95%CI:-3.77%-13.22%),三联疗法组Hp根除率的95%置信区间下限(76.31%)高于非劣效边界(95%CI 77.98%-6.3%=71.68%)。符合方案集(Per protocol,PP)分析中,三联疗法组Hp根除率为91.45%(139/152,95%CI:85.92%-94.94%),四联疗AM-2282浓度法组Hp根除率为85.62%(131/153,95%CI:79.19%-90.31%),率差为5.83%(95%CI:-1.42%-13.14%),三联疗法组Hp根除率的95%置信区间下限(85.92%)高于非劣效边界(95%CI85.62%-6.3%=79.32%)。三联疗法组总体不良反应发生率Community-associated infection为27.98%,四联疗法组总体不良反应发生率为34.52%,两组间差异无统计学意义(P=0.195)。【结论】伏诺拉生联合呋喃唑酮阿莫西林三联7天疗法根除Hp疗效及安全性良好,可作为根除Hp的新的选择。

背景抗生素耐药性正在成为一个“全球公共卫生问题”。抗生素耐药性出现的主要原因除了抗生素的误用和滥用问题,更重要的是新抗生素的发现和开发明显滞后于细菌耐药性产生的速度。因此,大多数国际组织为鼓励学术界和制药行业对抗生素的研发都制定了适当的政策,开发新型抗菌剂以对抗多药耐药Protein biosynthesis细菌已成为亟待解决的优先事项。“膜破坏”被认为是大多数抗菌肽发挥抗菌作用的主要机制,这些抗菌肽具有独特的克服或减少细菌耐药性发生的能力。近年来,阳离子抗菌肽(cationic antimicrobial peptides,CAMPs)因其快速的杀伤动力学、广谱的抗菌活性、低耐药率和独特的作用模式而被广泛认为是抗生素最有前途的替代品之一。与天然抗菌肽相比,小分子模拟肽除具有上述特性外还具有许多显著的优势,包括灵活的化学修饰框架、降低的毒性、增强的抗菌活性、更高的体外和体内稳定性,以及更好的药代动力学特性等。利用模拟抗菌肽结构和功能的策略开发新型抗耐药菌的膜靶向小分子拟肽已经引起了研究者的广泛关注,并将成为一个重要的研究前沿。方法本研究通过模拟CAMPs的结构与功能特性,以合成辣椒素和辣椒碱为原料,引入碱性氨基酸、烷基胺和胍基等在生理条件下被质子化后带正电的亲水组分,并通过调节疏水链长平衡其两亲性,设计并合成一系列两亲性小分子抗菌拟肽。通过比较抗菌活性和溶血活性,进行构效关系分析,最终筛选得到具有优异广谱抗菌活性的候选抗菌剂CP51。接着,通过对候选化合物CP51进行细胞毒性、杀菌动力学、盐离子稳定性和耐药性研究等体外生物学评价,并通过小鼠细菌性角膜炎模型评价其局部应用的体内抗菌疗效,通过荧光素钠染色检查其角膜毒性。最后,对其进行初步的抗菌机制研究,包括SYTOX Green、N-苯基-1-萘胺摄取、Di SC_3(5)、BODIPY?-TR尸胺置换、LTA/LPS竞争性结合和抗生物膜活性等实验。结果1.本论文总共合成了26个全新结构的合成辣椒素和天然辣椒碱的衍生物用于构效关系的研究。其中,在合成辣椒素的苯环邻位的两侧上修饰己烷胍基的CP51被确定为候选化合物。2.Etoposide供应商在体外抗菌活性研究中发现其具有广谱抗菌活性。对革兰氏阳性细菌的MICs为0.39～0.78μg/m L,包括金黄色葡萄球菌ATCC 29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌NCTC 10442和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌N315,对革兰氏阴性菌的MICs为1.56～6.25μg/m L,包括铜绿假单胞菌ATCC 9027、鲍曼不动杆菌ATCC17978、鲍曼不动杆EPZ-6438使用方法菌R2899、肺炎克雷伯杆菌ATCC 10031、肺炎克雷伯杆菌ATCC 14581和大肠杆菌ATCC 25922。3.通过进一步的体外生物学评价,发现其具有很弱的溶血活性(HC_(50)=134.8±4.6μg/m L)、较低的细胞毒性(CC_(50)>25μg/m L)、快速杀菌、体外耐盐性高和不易产生耐药性等特性。4.在体内抗菌疗效研究中,发现它在金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌感染的小鼠细菌性角膜炎模型中显示出与万古霉素和妥布霉素相当的治疗效果,表明其在治疗细菌性角膜炎上具有较大的潜在应用价值。5.通过初步的抗菌机制研究,发现化合物CP51具有较强的膜亲和力和膜通透性,能够以膜破坏的方式杀死细菌,并具有较强的抗生物膜活性。结论本研究以合成辣椒素和辣椒碱为原料,通过模拟CAMPs,调节电荷/疏水平衡和系统结构优化,筛选得到候选化合物CP51。其具有高效低毒、快速杀菌和较强的抗生物膜活性等特性,通过膜破坏机制杀灭细菌,可有效避免耐药性的产生。更重要的是,它在金黄色葡萄球菌或者铜绿假单胞菌诱导的细菌性角膜炎小鼠模型中体现出较大的临床应用潜力。因此,本研究为克服抗生素耐药提供了一种极具希望的设计策略,并且为小分子抗菌拟肽研发提供了新思路和化合物基础。