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β-咔啉类生物碱是一类吡啶骈[3,4-b]吲哚环类化合物。自1841年从Peganum harmala中提取出第一个β-咔啉生物碱化合物以来,越来越多的天然β-咔啉类生物碱及其衍生物被人们发现。β-咔啉生物碱因其来源广泛,结构多样具有广谱且出色的生物活性而备受关注。大量研究表明,β-咔啉类生物碱能与癌症靶标如与DNA,酶(GPX4,topoisomerases,kinase),蛋白(tubulin,ABCG2,BRCP1)进行相互作用从而发挥抗癌活性。本文设计思路是基于前期课题组关于β-咔啉二聚体的合成及其活性研究工作的基础上,预计合成一系列未见报道的N~9-N~(9′)位烷基链接的β-咔啉二聚体。测试其对人乳腺癌细胞(MCF-7)的体外活性selleck合成,初步总结这一系列化合物的构效关系。筛选出高活性的β-咔啉化合物,并通过网络药理学和分子对接等手段初步探究高活性β-咔啉二聚体化合物抗乳腺癌的作用机制和关键靶标。相关结果如下:1.以L-色氨酸,L-色氨酸甲酯盐酸盐,5-甲氧基色胺三种原料经过Pictet-Spengler反应,氧化脱氢,溴取代等步骤合成了34个β-咔啉类衍生物,其中β-咔啉单体14个,β-咔啉二聚体20个。β-咔啉化合物单体结构特征是基于β-咔啉母核分别在C-3位引入酯基,C-6位引入甲氧基,以及在C-1位进行不同的烷基取代和芳香基取代。β-咔啉化合物二聚体是将2分子经过结构修饰的单体用二溴烷烃在N~9-N~(9′)位链接合成,并经过~1H NMR,~(13)C NMR来进行结构确证。2.采用CCK-8法测试了34个化合物在10μM浓度下对人乳腺癌细胞MCGenetic abnormalityF-7的体外抑制率,并分别设置空白对照和阴性对照。测试结果表明此系列化合物对受试细胞均具有不同程https://www.selleck.cn/products/Staurosporine.html度的抑制活性。其中化合物M12,M13,D10,D15,D19对受试细胞的抑制率在80%以上,化合物M8,M10,D9,D14对受试细胞的抑制率接近80%。初步构效关系分析表明:在单体化合物中,β-咔啉母核结构的C-1位引入取代基有利于增加化合物的活性,其中芳香类取代基比烷基类更好;C-3位的酯基和C-6位的甲氧基能增加化合物对人乳腺癌细胞的抑制活性;而在二聚体与单体的比较上,发现二聚后的化合物的活性大部分高于对应的单体。3.以活性最好的化合物D10为样本,利用网络药理学和分子对接技术从Swisstarget,Targetnet,Genecards,Omim等数据库中筛选出化合物D10抗乳腺癌的潜在作用靶点四个,分别为m TOR,AKT1,CCND1,ERBB2。GO富集分析实验中BP富集分析结果显示化合物D10抗乳腺癌的生物学进程主要是生殖结构发育和生殖系统发育。MF分析表明化合物抗乳腺癌的分子功能主要是在蛋白的丝氨酸,苏氨酸,酪氨酸激酶活性以及丝氨酸,苏氨酸激酶活性。CC分析表明化合物抗乳腺癌的细胞组分主要是膜伐和膜微区。KEGG富集分析结果表明化合物D10主要是通过调控癌症通路来发挥抗乳腺癌活性。利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析核心靶基因表达与乳腺癌患者生存期的关系。结果表明m TOR,ERBB2,CCND1这三种基因高表达的患者的生存期显著高于这三种基因的低表达者。而AKT1基因的表达量与患者生存期基本无关。综上所述,本实验合成的一系列具有抗乳腺癌活性的β-咔啉化合物,丰富了β-咔啉的结构多样性。并利用网络药理学和分子对接初步探究了高活性β-咔啉化合物抗乳腺癌的作用机制研究,为β-咔啉类化合物抗乳腺癌的进一步机制研究打下基础。

目的：Ⅳ型胶原蛋白α1(COL4A1)已被报道可促进不同癌型进展，本研究探讨其在胃腺癌（STAD）中的表达、生物学作用及预后意义。方法：运用生物信息学方法，使用GEPIA、The HumanProtein Atlas、intensity bioassayTCGA、LinkedOmics等数据库预测COL4A1在STAD中的表达、生物学作用及预后意义。基于TCGA数据库构建预测STAD患者预后的Nomogram模型。通过体外实验研究COL4A1对AGS增殖、迁移及对PI3K-AKT信号通路的影响。结果：(1)COL4A1在STAD组织中高表达；在结直肠癌、淋巴瘤、头颈部癌、胃癌、肝癌等组织中显著上调。COL4A1高表达患者的预后低于低表达患者（P<0.05）；(2)COL4A表达水平与B细胞水平呈负相关（P<0.05）；与CD4 T细胞、CD8 T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及树突状细胞水平呈正相关（P<0.05）。COL4A1表达水平与较多药物敏感相关，如生物靶向治疗肿瘤药物（乐伐替尼、埃罗替尼、依鲁替尼）或治疗STAD患者常见化疗药物紫杉醇及奥沙利铂；(3)多因素Cox风险比例回归模型分析结果显示，COL4A1、年龄、TNM分期（Ⅲ期及Ⅳ期）、放射治疗（否）是STAD患者病死的危险因素（P<0.05）。内部数据集验证S63845溶解度结果显示C-index为0.727(95%CI:0.651～1.000)。一年、三年及五年决策曲线分析结果显示，该Nomogram模型的临床净收益明显高于单个指标；(4)在AGS细胞中抑制COL4A1可抑制细胞活力、集落形成能力及迁移和侵袭能力。蛋白质印迹分析显示，抑制COL4A1可显著降低p-AKT和p-PI3K表达水平（P<0.05），但不影响AKT和PI3K的总表达水平（P>0.05）。结论：COL4A1表达水平是STAD患者预后不良的独立预测因素，可作为评估预后的肿瘤标志www.selleck.cn/products/PLX-4032物，而靶向COL4A1的药物开发可能为STAD的治疗开辟新的治疗策略。

目的 探索高血压患者社区精细化管理对其自我健康管理依从性和血压控制效果的影响。方法 选取2019年3—9月北京市东城区永定门外社区卫生服务中心140例原发性高血压患者作为研究对象，采用随机数字表法分为对照组和观察组，每组各70例。两组患者均单独或联合应用降压药物规范治疗，并按照《国家基本公共卫生服务管理规范》进行管理。在此基础上，观察组制订精细化管理方案ATM/ATR抑制剂，包括体重控制计划、饮食计划、控烟控酒计划、运动计划、心理调节计划等，并逐一组织实施。观察对比两组在规律服药、控制食盐摄入，合理膳食、CHIR-99021试剂适量运动方面的依从性及血压控制情况。结果 管理前，两组患者收缩压和舒张压的差异无显著性（P>0.05）。管理后，两组患者在规律服药的依从性方面，差异无显著性（P>0.05）；观察组患者在控制食盐摄入、合Infectious keratitis理膳食、适量运动方面的依从性均高于对照组，差异有显著性（P<0.05）；观察组收缩压和舒张压指标均明显低于对照组，差异有显著性（P<0.01）。结论 通过对高血压患者进行精细化管理，能够显著提升其健康管理的依从性，对血压控制发挥更加积极的作用，临床效果明显。

目的 研究酚妥拉明联合拉贝洛尔治疗妊娠高血压综合征（简称：妊高症）的疗效及对妊娠结局的影响。方法 选取2015年2月—2018年8月天津市蓟州区人民医院就诊的妊高症患者100例，采用随机数字表法分为对照组和治疗组各50例。对照组给予拉贝洛尔，50 mg/次，1次/d；治疗组在此基础上联合甲磺酸酚妥拉明注射液，10 mg/次，1次/d，两组均接受治疗10 d。观察两组治GSK126核磁疗后临床疗效、妊娠结局、SBP和DBP平均值、24 h Upro和MAP水平及不良反应发生情况。结果 治疗后，治疗组患者自然分娩率明显高于对照组，差异woodchip bioreactor有统计学意义（P<0.05）；剖宫产、死亡、早产、宫内窘迫、窒息率明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组患者SBP、DBP水平比较差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组患者SBP、DBP水平均明显降低，且治疗组降低程度GSK2118436大于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组患者24 h UproT和MAP水平比较差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组患者24 h Upro和MAP水平明显降低，且治疗组降低程度大于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 采用酚妥拉明联合拉贝洛尔治疗妊高症具有较好的临床疗效，能够改善母婴结局和分娩情况，安全性较高，值得在临床上推广应用。

目的 探讨单功能烷化剂N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)对Eca 109细胞生物学功能的影响及调控机制，为食管癌的控制提供依据。方法 采用0、3和5μg/ml MNNG染毒高分化食管鳞癌Eca 109细胞48 h, CCK8法检测细胞增殖，细胞凋亡、周期检测试剂盒检测细胞凋亡及周期变化情况。划痕实验评估MNNG对Eca 109细胞迁移能力的影响，Western blot测定MNNG染毒后Wnt信号通路相关蛋白的表达水平。结果 与对照组相比，48 h后3获悉更多和5μg/ml MNNG染毒组Eca 109细胞增殖明显上Puromycin半抑制浓度升，差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞周期结果显示，3和5μg/ml MNNG染毒组G0/G1期明显降低(P<0.05),G2/M期明显升高(P<0.05)。细胞划痕结果显示，MNNG染毒组Eca 109细胞的迁移能力与对照组相比在24和48 h明显上升(P<0.05)。Western blot结果显示，与对照组相比，染毒组Eca 109细胞TCF7、CK1、β-catenin和p-gsk-3β蛋白的表达水平升高(P<0.05);Axin1蛋白Core functional microbiotas的表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MNNG可促进Eca 109细胞的增殖和迁移，使细胞周期阻滞在G2/M期，从而影响食管癌发展进程，且其机制可能与MNNG激活Wnt信号通路相关。

目的：探讨沙库巴曲缬沙坦联合硝苯地平缓释片治Rapamycin配制疗高血压合并心力衰竭患者的效果。方法：选取2021年4月—2022年4月本院诊治的高血压合并心力衰竭患者90例作为研究对象，根据1∶1简单分配原则把患者分为联合组与对照组，各45例。对照组给予硝苯地平缓释片治疗，联合组在对CSF biomarkers照组治疗基础上给予沙库巴曲缬沙坦治疗，比www.selleck.cn/products/pf-07321332较两组临床疗效、心功能指标、血液流变学指标及生活质量。结果：联合组治疗后优良率高于对照组（P<0.05）。两组治疗后左心射血分数、左室短轴缩短率高于治疗前，且联合组高于对照组（P<0.05）。两组治疗后全血黏度、血浆黏度低于治疗前，且联合组低于对照组（P<0.05）。研究组认知功能、角色功能、情绪功能、躯体功能、社会功能评分高于对照组（P<0.05）。结论：沙库巴曲缬沙坦联合硝苯地平缓释片治疗高血压合并心力衰竭的效果确切，可改善血液流变学状况及心功能，提升生活质量。

目的 探讨微小核糖核酸17-5p(miR-17-5p)与高血压左室肥厚的相关性及预测价值。方法 选择2019年11月至2020年11月青海大学附属医院高血压患者55例，根据是否合并左室肥厚（LVH）分为高血压LVH组（n=25）与高血压非左室肥厚（NLVH）组（n=30），另选取同期体检健康者30名作为对照组。分析三组miR-17-5p的相对表达水平，通过Pearson相关分析了miR-17-5p与心脏室壁厚度的相关性。采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价miR-17-5p对高血压LVH的诊断预测价值。结果 三组舒张末期室间隔厚度（IVSd）、收缩末期室间隔厚度（IVSs）、舒张期左室后壁厚度（LVPWd）、收缩期左室后壁厚度（LVPWs）、左室心肌质量（LVM）、左心室重量指数（LVM）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。miR-17-5p相对表达丰度：对照组（1.29±0.83）>高血压NLVH组（0.97±0.62）>高血压LVH组（0.54±0.33），差异具有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示，高血压LVH组中miR-selleck激酶抑制剂17-5p与IVSd、IVSs、LVPWd、LVX-765半抑制浓度VPWs呈负相关（r=-0.709、-0.416、-0.544、-0.552,P<0.05）。miR-17-5p对高血压LVH的Rserum biochemical changesOC曲线下面积（AUC）为0.763，敏感度为92.0%，特异度为51.7%。结论miR-17-5p水平与高血压LVH显著相关，检测miR-17-5p对高血压LVH具有一定的预测价值。

研究背景:创面愈合是人体中最复杂过程之一。当皮肤受到深度损伤后,表皮、真皮及皮下脂肪内多种类型细胞需要进行精确协调,以实现愈合。创面的止血、炎症、血管生成、生长、重新上皮化和重塑是按时间顺序发生的,但也是重叠的。巨噬细胞和成纤维细胞贯穿创面愈合始终,起举足轻重的作用。深II度烧伤创面在愈合过程中,由于持续性的炎症和异常的纤维化,极易导致瘢痕产生,无论对患者功能还是外观都产生深远影响。如何能在不影响深II度创面愈合情况下,早期应用药物减少瘢痕形成,目前研究尚少,缺少相关药物的治疗。二甲双胍(Metformin)一直是作为糖尿病治疗的首选药物。作为经典的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活剂,近年来越来越多学者发现二甲双胍不仅能降低血糖,而且在抗肿瘤、抗炎、延缓衰老、抗纤维化等方面具有一定功效。由于二甲双胍已被证实具有抗炎、抑制纤维化作用,将其应用于深II度烧伤创面,能否调节创面微环境炎症及纤维化水平,进而改善创面愈合质量,减少瘢痕形成,目前尚未有类似研究。本课题旨在研究二甲双胍干预对深II度烧伤创面愈合的影响,初步阐明二甲双胍调控巨噬细胞和成纤维细胞在炎症和纤维化的分子机制,具有向临床应用快速转化的重大意义。因此,我们首先体内实验观察二甲双胍干预对大鼠深II度烧伤创面细胞外基质(ECM)主要成分:I型胶原(Collagen I)、III型胶原(Collagen III)、纤连蛋白(Fibronectin)及炎症因子与趋化因子表达量的影响,然后通过体外实验观察二甲双胍对巨噬细胞和成纤维细胞生物学行为的影响,进一步拟以NF-κB和AMPK/m TOR、TGF-β1/Smad3信号通路为主要线索探究其分子机制,最后将巨噬细胞、成纤维细胞共培养,体外模拟炎症微环境,探究二甲双胍在炎症微环境中的调控作用。通过本研究,从动物和细胞水平初步探究二甲双胍在改善深II度烧伤创面愈合质量的调节机制,并为其改善深II度烧伤创面愈合质量提供一种新的途径和思路。第一部分二甲双胍对大鼠深II度烧伤创面愈合的影响目的:探讨二甲双胍对大鼠深II度烧伤创面的I型胶原沉积、炎性因子与趋化因子的影响。方法:1、构建SD大鼠深II度烧伤模型6只。取自身做对照,烧伤后即刻在烧伤创面皮下注射不同浓度(1m M,10m M,100m M)二甲双胍1ml。实验分五组(阴性对照组(正常皮肤)、阳性对照组(Met0m M)、低剂量组(Met1m M)、中剂量组(Met10m M)、高剂量组(Met100m M))。造模成功后,立即注射二甲双胍,隔天注射持续一周,随后一周不继续干预,14d后提取烧伤创面组织。HE染色测量烧伤后创面真皮厚度,Masson染色观察创面Collagen I沉积。Western blot检测创面Collagen I表达情况。天狼星红染色及免疫组化检测Collagen III表达情况。免疫组化染色检测Fibronectin表达情况。2、根据方法1结果,取6只SD大鼠,实验分三组(阴性对照组(正常皮肤)、烧伤阳性对照组(PBS10m M)、实验组(Met100m M))。造模成功后,立即注射二甲双胍,隔天注射至第4天后取烧伤创面周缘0.5CM皮肤组织提取RNA,q RT-PCR检测相关炎性因子(IL1β)与趋化因子(CCL2)m RNA表达水平。结果:烧伤造模后大鼠全部存活,未出现烧伤创面坏死、溃疡、感染、延迟愈合等情况。HE结果显示:Met100m M组的真皮厚度较Met0m M组有明显降低,差异具有统计学意义(p<0.05),Met1m M组与Met10m M组真皮厚度与Met0m M组相比无统计学差异。Masson染色结果显示:Met100m M组I型胶原胶原容积分数(CVF)较Met0m M组有明显降低,差异具有统计学意义(p<0.05),Met1m M组与Met10m M组I型胶原胶原容积分数(CVF)与Met0m M组相比无统计学差异。Western blot检测结果提示:Met100m M组Collagen I表达量较Met0m M组明显下调,差异具有统计学意义(p<0.001)。天狼星红染色结果提示:Met100m M组、Met10m M组、Met1m M组Collagen III面积百分比均与Met0m M组相比无统计学差异(p>0.05)。免疫组化结果显示:Met100m M组、Met10m M组、Met1m M组Collagen III和Fibronectin相对吸光度均与Met0m M组相比无统计学差异(p>0.05)。q RT-PCR结果显示:Met100m M组的IL1β和CCL2 m RNA表达水平较PBS10m M组(烧伤阳性对照组)有明显下调(p<0.05)。结论:本实验成功构建大鼠皮肤深II度烧伤动物模型,通过隔日皮下注射100m M二甲双胍可抑制大鼠深II度烧伤创面的Collagen I沉积、炎性因子(IL1β)与趋化因子(CCL2)的表达。第二部分二甲双胍对RAW 264.7细胞生物学行为的影响目的:探讨二甲双胍对小鼠巨噬白血病细胞(RAW 264.7)增殖的影响;探讨二甲双胍是否抑制炎症因子和趋化因子的表达;探讨二甲双胍对LPS诱导的RAW264.7细胞凋亡的影响。方法:1、体外培养RAW 264.7细胞,利用CCK8细胞增殖实验验证二甲双胍对RAW264.7细胞增殖的影响;2、用不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预RAW 264.7细胞24h,第18h加入1μg/L LPS,Western blot检测p NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平,q RT-PCR检测IL1β和CCL2的m RNA表达水平,ELISA检测细胞培养上清CCL2表达水平;进一步采用10n M QNZ(NF-κB抑制剂)和不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍同时干预RAW 264.7细胞24h,第18h加入1μg/L LPS,Western blot检测p NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平,q RT-PCR检测IL1β和CCL2 m RNA表达水平;3、用不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预RAW 264.7细胞24h,流式细胞术检测RAW 264.7凋亡细胞比例;用不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预RAW 264.7细胞24h,第16h加入10μg/L LPS刺激,流式细胞术检测RAW 264.7凋亡细胞比例。结果:CCK8细胞增殖实验结果显示:不同浓度(0.5m M,1m M,5m M,10m M,20m M)二甲双胍干预RAW 264.7细胞24h,其增殖能力明显下调,并呈现剂量依赖性,差异具有统计学意义(p<0.05);Western blot结果显示:与对照组相比,Met2.5m M组、Met5m M组、Met10m M组p NF-κB p65蛋白表达水平明显下调(p<0.001),并呈现剂量依赖性,NF-κB蛋白表达水平无显著差异,而且q RT-PCR结果显示:Met2.5m M组、Met5m M组、Met10m M组IL1β、CCL2m RNA表达水平较对照组也出现明显下调,差异具有统计学意义(p<0.05);ELISA结果提示:Met2.5m M组、Met5m M组、Met10m M组细胞培养上清中CCL2蛋白表达量较对照组有明显下调(p<0.05),并呈现剂量依赖性;在加入NF-κB抑制剂(10n M QNZ)与二甲双胍同时干预RAW 264.7细胞后,Western blot结果显示QNZ干预后各组p NF-κB蛋白表达水平较阴性对照组明显下调(p<0.001)且QNZ干预后各组较阳性对照组p NF-κB、NF-κB蛋白表达水平无显著差异,各组NF-κB蛋白表达水平无明显差异,而且q RT-PCR结果显示:QNZ干预后各组IL1β、CCL2 m RNA表达水平与阳性对照组相比无显著差异(p>0.05);流式细胞术检测结果显示:不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预RAW 264.7细胞24h,各组凋亡细胞比例无明显差异(p>0.05);不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预RAW 264.7细胞24h,第16h加入10μg/L LPS刺激,Met2.5m M组、Met5m M组、Met10m M组凋亡细胞比例较对照组明显下调,差异具有统计学意义(p<0.001)。结论:二Infectious keratitis甲双胍可以抑制RAW 264.7细胞增殖,可能通过NF-κB途径抑制LPS诱导的炎性因子(IL1β)与趋化因子(CCL2)表达,并且能抑制高浓度LPS诱导下的RAW 264.7细胞凋亡。第三部分二甲双胍对NIH 3T3细胞生物学行为影响及其机制研究目的:观察二甲双胍通过激活AMPK对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH 3T3)增殖、迁移和Collagen I表达的影响,以及探究其机制。方法:1、体外培养NIH 3T3细胞,利用CCK8细胞增殖实验验证二甲双胍对NIH3T3细胞增殖的影响;在NIH 3T3细胞株中转入AMPK-si RNA后,通过Western blot验证AMPK在NIH 3T3细胞中的干扰效率;行Ed U细胞增殖检测实验研究AMPK下调后对NIH 3T3细胞增殖的影响;2、用不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预正常NIH 3T3细胞24h,行Transwell迁移实验,观察细胞迁移情况,Western blot检测pm TOR、m TOR、p AKT、AKT、MMP2、MMP9的表达;进一步在NIH 3T3细胞株中转入AMPK-si RNA后,行Transwell迁移实验,观察细胞迁移情况,Western blot检测pm TOR、m TOR、p AKT、AKT、MMP2、MMP9的表达;构建携带AMPK干扰序列的慢病毒,采用1/2小体积感染法转染和嘌呤霉素筛选AMPK下调稳转细胞株,通过Western blot验证AMPK在NIH 3T3细胞中的干扰效率;选择效率最高者,Western blot检测pm TOR、m TOR、p AKT、AKT、MMP2、MMP9的表达;3、用不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预NIH 3T3细胞24h,Western blot检测TGF-β1、p Smad3、Smad3和Collagen I表达;在NIH 3T3细胞株中,转入AMPK-si RNA后,Western blot检测TGF-β1、p Smad3、Smad3和Collagen I表达;慢病毒构建稳定下调表达AMPK的NIH 3T3细胞株,Western blot检测TGF-β1、p Smad3、Smad3和Collagen I表达。结果:CCK8细胞增殖实验检测不同浓度二甲双胍对RAW26.7细胞增殖活性的影响,实验结果显示:不同浓度(0.1m M,0.5m M,1m M,5m M,10m M,20m M)二甲双胍干预NIH 3T3细胞24h,其增殖能力明显下调,并呈现剂量依赖性,差异具有统计学意义(p<0.05)。Ed U细胞增殖检测实验结果显示:NIH 3T3细胞株中转入AMPK-si RNA后,si AMPK组Ed U阳性细胞比例较si NC组明显上调,差异具有统计学意义(p<0.05);不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)的二甲双胍干预NIH 3T3细胞24h后,与对照组相比,迁移细胞数量明显减少,并呈现剂量依赖性,差异具有统计学意义(p<0.001);不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)的二甲双胍干预NIH 3T3细胞24h后,Western blot结果显示:与对照组相比,Met2.5m M组、Met5m M组、Met10m M组的pm TOR、p AKT、MMP2、MMP9蛋白表达水平明显下调(p<0.001),并呈现剂量依赖性,而m TOR、AKT蛋白表达水平无显著差异;在NIH 3T3细胞株中转入AMPK-si RNA后,Transwell迁移实验结果显示AMPK下调后NIH 3T3细胞迁移细胞数量较si NC组明显增多,差异具有统计学意义(p<0.001);在NIH 3T3细胞株中转入AMPK-si RNA后,Western blot结果显示与si NC组相比,pm TOR、p AKT、MMP2、MMP9蛋白表达水平明显上调(p<0.05),而m TOR、AKT蛋白表达水平无显著差异;慢病毒构建稳定下调表达AMPK的NIH 3T3细胞株,Western blot结果显示与sh NC组相比,pm TOR、p AKT、MMP2、MMP9蛋白表达水平明显上调(p<0.05),而m TOR、AKT蛋白表达水平无显著差异;不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)的二甲双胍干预NIH 3T3细胞24h后,与对照组相比,Met2.5m M组、Met5m M组、Met10m M组的TGF-β1、p Smad3、Collagen I蛋白表达水平明显下调(p<0.05),并呈现剂量依赖性,而Smad3蛋白表达水平无显著差异;在NIH 3T3细胞株中转入AMPK-si RNA后,Western blot结果显示与si NC组相比,TGF-β1、p Smad3、Collagen I蛋白表达水平明显上调(p<0.01),而Smad3蛋白表达水平无显著差异;慢病毒构建稳定下调表达AMPK的NIH 3T3细胞株,Western blot结果显示与sh NC组相比,TGF-β1、p Smad3、Collagen I蛋白表达水平明显上调(p<0.01),而Smad3蛋白表达水平无显著差异。结论:二甲双胍可能通过激活AMPK抑制NIH 3T3细胞增殖、迁移及Collagen I合成,其中抑制NIH 3T3细胞迁移及Collagen I合成作用可能分别与二甲双胍激活AMPK从而下调m TOR及TGF-β1/Smad3通路有关。第四部分二甲双胍对炎症微环境中NIH 3T3和RAW 264.7细胞TGF-β1分泌的影响目的:构建体外细胞炎症微环境,研究二甲双胍对RAW 264.7/NIH 3T3细胞共培养体系中RAW 264.7和NIH 3T3细胞TGF-β1分泌的影响。方法:ELISA检测不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)二甲双胍干预下RAW 264.7细胞培养上清液TGF-β1表达量;将NIH 3T3接种于Transwell下室,RAW 264.7细胞接种于Transwell上室,作为实验组,上下室同时加入或不加入1μg/ml LPS和MeS63845说明书t(10m M),两种细胞共培养48h(NIH 3T3和NIH 3T3共培养作为对照组)。每组按LPS(1μg/ml)和Met(10m M)的干预措施不同分为3个亚组(LPS-Met-,LPS+Met-,LPS+Met+),总共6组。Western blot检测各组下室NIH 3T3细胞的Collagen I表达水平,ELISA检测各组Transwell小室内细胞培养上清中TGF-β1表达水平。结果:不同浓度(2.5m M,5m M,10m M)的二甲双胍干预RAW 264.7细胞后,加入1μg/L LPS刺激6h,ELISA结果显示:Met0m M组与对照组相比,TGF-β1表达量明显上调(p<0.05);与Met0m M组相比,Met2.5m M组、Met5m M组、Met10m M组的TGF-β1表达水平明显下调(p<0.001),并呈现剂量依赖性,差异具有统计学意义;提取共培养体系中的各组细胞培养上清,行ELISA检测TGF-β1水平,ELISA结果显示:在NIH 3T3/NIH 3T3组中,经过1μg/m L LPS刺激48h后,“LPS+Met-”组细胞培养上清中的TGF-β1表达量与“LPS-Met-”组相比明显下调(p<0.001),“LPS+Met+”组细胞培养上清中的TGF-β1表达量与“LPS+Met-”组相比也有明显下调(p<0.05);在RAW 264.7/NIH 3T3组中,“LPS+Met-”组细胞培养上清中的TGF-β1表达量较“LPS-Met-”组明显上调(p<0.001),“LPS+Met+”组细胞培养上清中的TGF-β1表达量与“LPS+Met-”组相比明显下调(p<0.001);在NIH 3T3/NIH 3T3组中,经过1μg/m L LPS刺激48h后,“LPS+Met-”组下室NIH 3T3细胞的Collagen I表达量与“LPS-Met-”组相比明显下调(p<0.001),“LPS+Met+”组下室NIH 3T3细胞的Collagen I的表达与“LPS+Met-”组相比明显下调(p<0.05);在RAW 264.7/NIH 3T3组中,经过1μg/m L LPS刺激48h后,“LPS+Met-”组下室NIH 3T3细胞Collagen I表达量较“LPS-Met-”组Panobinostat明显上调(p<0.001),“LPS+Met+”组下室NIH 3T3细胞Collagen I表达量与“LPS+Met-”组相比明显下调(p<0.001),差异具有统计学意义。结论:二甲双胍在体外细胞炎症微环境中可能通过下调Transwell上室的RAW264.7细胞TGF-β1分泌,进而下调Transwell下室的NIH 3T3细胞Collagen I的表达。

目的：探讨老年原发性高血压（essential hypertension,EH）患者三酰甘油葡萄糖（triglyceride-glucose,TyG指数与高尿酸血症（hyperuricemia,HUA）的关系。方法：回顾Flow Cytometers性分析2021年3月—2022年8月江苏省人民医院溧阳分院收治的90例老年EH患者的临床资料。根据老年EH患者是否伴有HUA将其分为HUA组和非HUA组，收集所有患者的一般资料，并根据老年EH患者TyG指数的四分位购买FUT-175数将其分为Q1～Q4组。分析HUA分组情况，比较HUA组和非HUA组一般资料，分LXH254体内实验剂量析老年EH患者发生HUA的影响因素。比较Q1组、Q2组、Q3组、Q4组SUA水平及HUA发生率，分析老年EH患者中TyG指数与血尿酸（serum uric acid,SUA）水平的关系。结果：HUA组吸烟占比、三酰甘油（triglyceride,TG）、血肌酐（serum creatinine,Scr）、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）水平、TyG指数均高于非HUA组，差异有统计学意义（P<0.05）。吸烟、TG、Scr、FBG、TyG指数均为老年EH患者发生HUA的危险因素（P<0.05）。Q1～Q4组SUA水平和HUA发生率依次升高，差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson分析结果显示，老年EH患者中TyG指数与SUA水平呈正相关（r=0.594,P<0.05）。结论：在老年EH患者中，TyG指数与SUA呈正相关，其为HUA的危险因素。

目的:研究敲低CC基序趋化因子配体5(CCL5)在非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中的表达及对A549细胞增殖、迁移、凋亡等生物selleck激酶抑制剂学活性的影响，探讨CCL5促进A549细胞上皮间质软化(EMT)的可能分子机制。方法:体外培养肺腺癌A549细胞，应用shRNA敲低A549细胞中CCL5基因，分为阴性对照组(siRNA-NC)及实验组(siRNA-CCL5)。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中CCL5mRNA表达；CCK-8、Transwell实验观察下调CCL5表达后细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化；流式细胞术检测细胞凋亡的变化；蛋prognosis biomarker白印迹法(Western blot)检测E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及TGF-β信号通路TGF-β蛋白表达量的变化。结果:与对照组相比，敲低CCL5表达后实验组A549细胞CCL5mRNA表达下调(P<0.05);CCK-8实验结果显示A549细胞的增殖受到抑制(P<0.05);Transwell实验显示A549细胞的迁移、侵袭明显RAD001溶解度抑制(均P<0.05);A549细胞凋亡增加；Western blot结果提示E-cadherin蛋白水平上调，Vimentin蛋白下调，TGF-β蛋白水平下降。结论:下调CCL5抑制肺腺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭功能，促进细胞凋亡。CCL5可能是通过激活TGF-β通道促进A549细胞EMT。