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目的 探讨心脏彩超在冠心病节段性室壁运动异常患者中的应用价值。方法 选取2018年1月至2020年2月本院收治的54例冠心病节段性室壁运动异常患者作为研究对象，分别进行心脏彩超、shelter medicine冠状动脉造影检查，以冠状动脉造影诊断结果为金标准，分析心脏彩超的诊断符合率及灵敏度、特异度、准确性。结果 冠状动脉造影检查结果显示，54例患者均确诊为冠心病节段性室壁运动异常；心脏彩超共检出52例冠心病节段ERK抑制剂性室壁运动异常，诊断符合率为96.30%(52/54)，另外2例为节段性室壁运动正常；心脏彩超诊断确诊率为96.30%、灵敏度为98.04%、特异度为66.67%。结论 心脏超声诊断冠心病节段性室壁运动异常Barasertib可获得与冠状动脉造影相近的诊断价值，能为临床诊治方案的制订提供依据，且操作方便、费用低，更易被患者接受，值得临床推广应用。

目的：探讨保乳术（Breast conserving surgery,BCS）联合乳房整形术对乳腺癌患者术后乳房美观度及并发症的影响。方法：选取医院2019年3月-2020年5月收治的乳腺癌患者119例，根据选取手术方法不同分为对照组（n=57）和研究组（n=62），对照Mirdametinib MW组行BCS治疗，观察组在对照组基础上联合乳房整形术。观察两组围术期并发症发生情况；随访1年，统计分析两组术后乳房美观度及生活质量变化，并记录两组术后并发症发生情况。结果：住院期间，研究组切口裂开、血肿及切口感染发生率均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。术后6个月，两组情绪角色Lorlatinib半抑制浓度、躯体功能、肢体疼痛、社会功及总体健康评分均高于术前，且研究组术后乳房美观度、简明健康量表36(Shortform-36,SF-36)各指标评分均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。随访1年，两组术后皮瓣坏死、脂肪坏死、皮肤皱缩Bioreactor simulation及肿瘤复发发生率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：BCS联合乳房整形术能有效改善乳腺癌患者术后美观度，安全性较好。

炎症是机体对感染、伤害或化学刺激引起的防御反应。然而,不受控制的过度炎症反应对身体有害,并与许多疾病的发展有关。目前,常用的抗炎药物因其具有多种副作用而在实际应用中逐渐受到限制。Dolutegravir配制食源性生物活性肽具有来源广泛、易吸收、安全性高等优点,在炎症的防治中具有广阔的应用前景。蚕蛹资源丰富,营养价值高,但由于深加工技术缺乏,应用局限,资源利用率低。另外,蚕蛹及其相关产物被报道具有多种活性,但对其抗炎活性鲜有报道,作用机制尚不清楚。微生物发酵法已从天然资源中分离纯化出多种生物活性肽,但对抗炎肽的研究尚属空白,大部分的抗炎肽主要通过酶解法制备得到。因此,本论文通过纳豆菌液态发酵制备蚕蛹肽,基于细胞炎症模型评价其抗炎活性并探究其作用机制,以期为蚕蛹高值化利用和食源性抗炎活性肽的研究与开发提供了理论依据。本论文主要研究内容与结果如下:采用纳豆菌对三种不同蚕蛹原料(蚕蛹、脱脂蚕蛹、蚕蛹蛋白)进行液态发酵,通过LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,以一氧化氮(nitric oxide,NO)释放量为指标,评价其发酵产物的抗炎活性。结果表明:三种不同蚕蛹原料发酵产物中,蚕蛹蛋白发酵产物的多肽得率最高。三种经纳豆菌发酵的产物对RAW264.7巨噬细胞均无毒性,并且对细胞生长起到一定的促进作用。其中蚕蛹蛋白发酵产物的抗炎效果最好,以剂量依赖性的方式显著降低NO的释放量。通过单因素实验和响应面试验对蚕蛹肽的制备工艺进行研究,确定最佳发酵工艺条件。结果表明:在每100 m L的发酵底物中,添加2.6 g蚕蛹蛋白,接种量纳豆菌5.0 m L(种子液浓度为10~7～10~8CFU/m L),在初始p H 7.0、发酵温度37℃时发酵35.4 h,此条件下的多肽得率最高为14.58%,同时获得的蚕蛹蛋白发酵产物在LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型中表现出较好的抗炎活性。采用超滤和半制备液相技术对蚕蛹肽进行分离纯化,结果表明:SPP-I-F4分离组分具有较强抗炎活性。采用质谱技术对其结构进行鉴定,并通过生物信息学筛选最有前途的抗炎肽。结果显示:SPP-I-F4分离组分经质谱鉴定得到7条多肽,其中最具抗炎潜力的肽序列为GYALPHAILR和YALPHAILR,均为首次报道。考察GYALPHAILR和YALPHAILR这两条蚕蛹抗炎肽对炎症介质(如NO、细胞因子)的抑制作用,以及利用蛋白质免疫印迹(Western-blot)技术分析蚕蛹抗炎活性肽对炎症信号通路表达的影响selleckchem。结果表明:两种蚕蛹抗炎肽对细胞均无毒性,可有效抑制细胞炎症模型中NO、IL-1β和IL-6的分泌(p<0.05),并且通过调控丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路发挥抗炎作用。综上研究表明,通过纳豆菌发酵方式可从蚕蛹蛋白中获得抗炎活性明确的发酵产物,经分离得到结构新颖的2条抗炎活性肽,其通过抑制NOimmune T cell responses、炎症因子及调控MAPK和NF-κB信号通路发挥抗炎作用。论文研究结论为蚕蛹蛋白促健康产品的开发提供了理论与技术支撑。

研究背景与研究目的:肝脏是人体内脏里最大最重要的器官,以代谢功能为主。在人体内不仅能去氧化、储存肝糖原、合成分泌型蛋白质,在药物和毒素的代谢、解毒等方面也起着关键作用。急性肝衰竭(Acute liver failure,ALF)是一种以肝功能突然下降继发的黄疸、凝血障碍、肝性脑病等为特征的临床综合征,影响多脏器功能,死亡率高达90%。原位肝移植是治疗ALF的有效方法之一,但由于肝脏供体有限、移植费用高昂,genetic breeding严重制约了ALF患者接受肝移植治疗的覆盖率,使其不能成为临床普及的治疗方法。因此,寻找新的治疗ALF的方法势在必行。人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)是一种具有自我更新能力和多向分化的基质细胞。有学者发现间充质干细胞能通过旁分泌的方式产生一些具有修复作用的细胞因子,可作用于肝脏和肾脏,以促进其相应的损伤修复。外泌体属于细胞外囊泡的一种,干细胞来源的外泌体在各类疾病尤其是肝脏疾病治疗方面具有良好的潜能,在再生医学、疾病模型、药物筛选以及精准医疗等领域均具有广阔的应用前景。人脐带间充质干细胞来源的外泌体(Human umbilical cord mesenchymal stem cells exosomes,h UCMSC-Exo)对ALF是否具有治疗作用?h UCMSC-Exo治疗ALF的作用机制和分子机制具体是什么?到目前为止,均鲜有相关报道。本文旨在探讨h UCMSC-Exo对治疗对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)诱导的ALF的作用机制及其生物学原理,从而为治疗ALF的新靶点和新方法的探究提供实验依据。实验方法:1.h UCMSCs及h UCMSC-Exo的分离、培养及鉴定:1)采用胶原酶II消化法从脐带上分离、培养h UCMSCs;2)利用流式细胞术检测h UCMSCs表面分子标志;3)成骨成脂分化检测h UCMSCs体外多向分化潜能;4)超速离心法提取h UCMSC-Exo,并利用透射电镜分析h UCMSC-Exo形态及粒径;5)使用Western blot法检测h UCMSC-Exo标志蛋白。2.h UCMSC-Exo抑制APAP诱导的急性肝衰竭小鼠肝细胞的坏死和凋亡的潜能及作用机制研究:1)以380 mg/kg剂量注射APAP后,评估经过尾静脉注射PBS或者h UCMSC-Exo的APAP损伤的小鼠的生存率,再利用尾静脉注射PKH26标记的h UCMSC-Exo经过活体成像确定作用部位;2)利用HE染色及TUNEL凋亡染色检测不同组别小鼠肝脏中肝细胞凋亡;通过肝功能分析检测不同组别小鼠肝功能情况;3)利用免疫荧光和酶标仪等检测测定急性肝衰竭小鼠体内与氧化压力相关的一系列指标,如GSH、SOD、MDA、4-HNE、CYP2E1等;4)利用q RT-PCR检测ALF小鼠体内炎症因子的表达。3.h UCMSC-Exo抑制肝细胞坏死并促进损伤修复的分子机制研究:1)体外利用APAP建立人正常肝细胞系LO2的肝衰竭模型,并利用PKH26标记的h UCMSC-Exo与LO2细胞共培养观察细胞摄取情况;2)检测正常培养组、损伤组、损伤后h UCMSC-Exo共培养组ROS和MDA等氧化指标的变化;3)利用Annexin V/PI流式细胞凋亡实验、CCK8实验、Western blot实验检测正常培养组、损伤组、损伤后h UCMSC-Exo共培养组细胞的凋亡和增殖情况;4)Western blot检测正常培养组、损伤组及h UCMSC-Exo组细胞中IGF-1R-PI3K-AKT及ERK1/2信号通路相关蛋白表达;5)损伤后h UCMSC-Exo共培养组细胞中加入LY294002(AKT抑制剂)及PD98059(ERK1/2抑制剂),利用Annexin V/PI流式、CCK8及Western blot检测上述信号通路在h UCMSC-Exo抑制肝细胞坏死并促进损伤修复中发挥的作用。实验结果:1.h UCMSCs及h UCMSC-Exo的特性:1)利用胶原酶II消化法可从脐带上分离培养得到具有长梭形形态的h UCMSCs,且h UCMSCs细胞形态有呈漩涡状生长或平行排列的趋势;2)流式细胞技术表明h UCMSCs表达间充质干细胞标志基因CD105、CD73、CD90、CD29,不能表达造血干细胞相关标志基因CD34及CD45;3)h UCMSCs体外在适当条件下可分化为脂肪细胞和骨细胞;4)透射电镜表明h UCMSC-Exo为直径在30-150 nm的囊泡;5)h UCMSC-Exo表达外泌体标志蛋白CD9、CD63、CD81和Rab5。2.h UCMSC-Exo体内移植可通过抑制肝细胞的凋亡、缓解氧化应激压力促进APAP所诱导的急性肝衰竭损伤修复:1)h UCMSC-Exo体内移植能明显改善ALF小鼠的生存率,活体成像显示大部分h UCMSC-Exo在肝脏富集;2)TUNEL凋亡检测点击此处表明h UCMSC-Exo可以抑制肝细胞凋亡,HE染色显示h UCMselleck抑制剂SC-Exo能明显减少APAP所导致的肝小叶中心坏死,肝功能指标检测表明h UCMSC-Exo能明显改善ALF小鼠的肝功能;3)h UCMSC-Exo能显著恢复ALF小鼠体内GSH、SOD活性,抑制MDA含量的升高。免疫荧光染色法显示h UCMSC-Exo能明显逆转ALF小鼠肝组织中4-HNE和CYP2E1的过表达;4)q RT-PCR检测表明h UCMSC-Exo可使APAP损伤的肝组织中促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低。3.h UCMSC-Exo通过活化IGF-1R/PI3K/AKT和ERK1/2信号通路抑制APAP损伤LO2细胞氧化压力及凋亡:1)h UCMSC-Exo容易被LO2细胞所摄取;2)h UCMSC-Exo能降低APAP损伤的LO2细胞内的ROS和MDA的含量;3)h UCMSC-Exo通过激活IGF-1R/PI3K/AKT和ERK1/2信号通路抑制APAP损伤LO2细胞氧化压力及凋亡。结论:1.h UCMSCs增殖能力强、表达间充质干细胞标志基因、不表达造血干细胞标志基因,具有多向分化潜能,可定向分化为脂肪细胞及骨细胞。其衍生的外泌体粒径大小在在30-150 nm之间,且表达外泌体标志蛋白;2.h UCMSC-Exo体内移植能促进APAP诱导的急性肝衰竭小鼠肝功能的恢复,其机制与h UCMSC-Exo抑制损伤的肝细胞的坏死、凋亡以及减缓氧化应激有关;3.h UCMSC-Exo能够被LO2细胞所摄取,然后通过激活APAP损伤LO2细胞中的IGF-1R/PI3K/AKT和ERK1/2信号通路,进而抑制APAP损伤LO2细胞氧化压力及凋亡。

目的 探讨肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes, TILs)联合残余肿瘤负荷(rVX-445配制esidual cancer burden, RCB)在乳腺癌新辅助化疗中的预后价值及临床意义。方法 采用HE染色评Roxadustat使用方法估106例新辅助化疗前间质TILs水平并计算新辅助化疗后乳腺癌患者的RCB,分析RCB-TILs与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果 RCB-TILs阳性患者肿瘤直径<2 cm可能性更大，更不易发生淋巴结转移及脉管侵犯，且RCB-TILs阳性患者更易获得病理完全缓解(P<0.05);Kaplan-Meier分析显示，RCB-TILs阳性患者的无瘤生存期(disease free survival, DFS)长于RCB-TILs阴性患者，差异有统计学意义(P=0.049 9);Cox多因素分析显示，RCB-TILs阳性是新辅助化疗后乳腺癌患者的有利因素，表明与RCB-TILs阴性相比RCB-TILs阳性更有助于延长所有患者的DFS(HR=0.068,P=0.003)。Biogas yield结论 RCB-TILs与新辅助化疗后乳腺癌肿瘤直径、淋巴结转移、脉管侵犯等具有相关性，与新辅助化疗后乳腺癌预后关系密切，有望成为乳腺癌患者DFS的潜在生物学标志物。

目的 制备四种血清型交叉反应性的登革病毒包膜蛋白结构域Ⅲ(DENV-EDⅢ)特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性及体外中和活性。方法 Clinical forensic medicine通过毕赤酵母表达具有良好抗原性的1～4型DENV-EDⅢ蛋白，并以四种DENV血清型EDⅢ蛋白混合免疫BALB/c小鼠，采用聚乙二醇融合技术制备杂交瘤细胞，通过间接ELISA筛选出稳定分泌抗DENV-EDⅢ抗体的杂交瘤www.selleck.cn/products/PD-0325901细胞，进一步通过间接免疫荧光法对所获得mAb的特异性进行鉴定，并通过改良的酶联免疫斑点微中和实验对所获得的mAb进行体外中和活性测定。结果 获得6株特异性针对1～4型DENV-EDⅢ蛋白的mAb和11株特异性针对某一血清型DENV的EDⅢmAb,其中有1株mAb同时对四种血清型DENV有均衡的体外强中和活性，其对四种血清型DENV的半数抑制剂量(IC_(50))分别为(0.05、 1.89、 0.02、 3.91)μg/mL。结论 成功筛选获得了一株可同时中和四种血清型DENselleckchem AG-221V的EDⅢ特异性mAb。

目的：探讨膜结合黏蛋白2 (MUC2)和前列腺特异性抗原（PSA）的联合检测在诊断早期乳腺癌诊断中的临床价值。方法：收集2017年6月—2019年6月于连云港市第二人民医院确诊为乳腺癌的96例患者作为试验组，同时选取92例乳腺良性疾病患者作为对照组，同时段选取93例体检健康女性作为正常组。检测三组血清PSA和MUC2的表达水平，制作ROC曲线确定两者的曲线下面积和诊断selleck抑制剂临界值。结果：乳腺癌组血清PSA和MUC2水平均高于乳房良性疾病组和正常女性，乳腺良Isolated hepatocytes性疾病组和正常组中两项指标表达水平差异无统计学意义。PSA对乳腺癌诊断的ROC曲线下面积为0.80，诊断临界值为selleckchem Tamoxifen1.79，敏感度64.3%，特异度68.2%;MUC2对乳腺癌的ROC曲线下面积约为0.90，诊断临界值为1.95，敏感度83.3%，特异度70.2%。结论：血清MUC2和PSA浓度检测可以作为乳腺癌诊断的有效辅助诊断指标。

目的 探讨LB-100在小鼠念珠菌病模型中的作用。方法 尾静脉注射构建小鼠念珠菌病模型，LB-100腹腔给药，监测并记录小鼠生存率。感染48 h后摘Empagliflozin价格取肾脏和肝脏统计荷菌量。分别用灭活的白念珠菌酵母态和菌丝态以及白念珠菌来源的α-mannan和β-glucan刺激小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow derived macrophages, BMDMs),ELISA检测上清液中TNF-α和IL-6水平，qPCR检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达及稳定性，Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平和三四脯氨酸(TTP)的表达。结果 体内试验表明，与未治疗组相比，LB-100治疗白念珠菌感染小鼠的存活时间显著延长(P<0.05),同时各脏器荷菌量显著降低(P<Taurine价格0.05)。体外结果显示，LB-100处理后，BMDMs中TNF-α和IL-6的表达显著上升，其mRNA的表达及稳定性显著增强(P<0.05)。结论 LB-100能够改善白念珠菌引起的ankle biomechanics念珠菌病，为临床抗念珠菌病治疗提供新的思路。

目的 ：探讨长链非编码RNA FER1L4(lncRNA FER1L4)调节miR-106a-5p的表达影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭overt hepatic encephalopathy能力的可能机制及其临床意义。方法：收集2017～2019年阜阳市第五人民医院及大连大学附属中山医院36例肝细胞癌患者手术标本，采用荧光定量PCR技术（RT-qPCR）分析肝癌细胞和癌旁正常肝细胞中lncRNA FER1L4和miR-106a-5p的表达情况。同时采用RT-qPCR分析肝癌细胞系Huh-7、HepG2和正常肝细胞系L-02中lncRNA FER1L4和miR-106aselleck NMR-5p的表达情况。采用CCK-8法、细胞划痕及集落形成实验等方法测定细胞的增殖、转移和成瘤能力。结果：与正常组织相比，lncRNA FER1L4在肝癌组织中表达较低（P<0.05），而miR-106a-5p表达较高（P<0.05），且两者呈负相关(P<0.0001,R~2=0.376)；与对照组相比，下调FER1L4肝癌细胞的增殖能力增加（P<0.05），敲除FER1L4肝癌细胞的迁移和侵袭能力增加（P<0.05）；与对照组相比，转染FER1L4 siRNA的肿瘤细胞中miR-106a-5p的表达增高（P<0.05），敲除miR-106a-5p的肿瘤细胞中FER1L4的表达增高（P<0.05），两者之间存在相互抑制的关系。结论：lncRNA FER1L4通过抑制miR-106a-5p的表达对肝细胞癌产生抑制作用，单独或联合检测lncRNA FER1L4和miR-10selleck产品6a-5p可能预测肝癌的临床预后。

JQ1目的 制备新型冠状病毒（SARS-Co V-2）的刺突蛋白（S）和核衣壳蛋白（N）重组抗原。方法 利用Blast程序检索目标序列SARS-CoV-2的S蛋白和N蛋白的同源序列，用SWISS-MODEL软件对目标序列进行结构建模，运用DISCO TOPE对S蛋白和N蛋白的B细胞抗原表位进行分析，选取抗原表位较多的序列进行合成；重组抗原分离纯化后制备兔抗新冠病毒蛋白多抗，用Western blot检测抗原SARS-CoV-2的S蛋白以及N蛋白免疫学活性；用ELISA法检测自制抗原与市售抗体的结合能力。结果 重组质粒pET-22b-SA、p ET-22b-SB、p ET-22b-SC、p ET-22b-NA、pET-22b-NB测序鉴定结果显示正确；Western blot结果显示，重组抗原与山羊抗兔IgG-HRP有特异性结合反应，表明具有良好的免疫学反应；ELISA法结果显示，重组抗原结合能力明General medicine显强于市售抗N蛋白抗原。结论 制备BYL719体内实验剂量的抗原与不同靶IgG和IgM结合能力强，特异性高，具有开发成检测血清SARS-CoV-2特异性IgG和Ig M抗体的试剂盒的潜力。