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目的 应用生物信息学方法分析轻度认知障碍(MCI)患者血浆中差异表达microRNA。方法 从美国国立生物LY294002体内技术信息中心(NCBI)公共数据平台的GEO数据库检索并筛选MCI相关基因芯片数据集，使用GEO2R在线分析工具筛选差异表达的microRNA;利用TargetScan7.2在线预测工具预测差异表达microRNA的靶基因，并通过String数据库构建编码蛋白相互作用(PPI)网络及利用Cytoscape的CytoHubba插件筛选关键基因(Hube gene);利用Cytoscape3.7.2软件构建差异表达microRNA的microRNA-靶基因相互作用网络，筛选关键microRNA;运用R语言分析包对差异表达microRNA的靶基因进行基因本体论(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果 筛选出14个显著下调的microRNAs,通过在线工具预测14个microRNA的靶基因并构建PPI和microRNA-靶基因的相互作用网络，结果显示hsa-miR-27b、hsa-miR-146a、hsa-miR-23a和has-miR-93*是核心网络中的关键microRNA。GO富集分析结果显示，关键microRNA主要参与轴突生成、化学突触传递的调控、跨突触信号的调节、信号释放及糖蛋白代谢等生物学过程。而KEGG通路富immune regulation集分析结果显示，它们主要参与调控MAPK信号通路、Ras信号通路、Hippo信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTO获悉更多R)信号通路、轴突导向及糖胺聚糖的生物合成等信号通路。结论 hsa-miR-27b、hsa-miR-146a、hsa-miR-23a和has-miR-93*是MCI患者血浆中关键的microRNAs,可能成为诊断MCI进展至阿尔茨海默病(AD)的候选生物标志物。

【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFZD1839V)p30蛋白的单克隆抗体,为非洲猪瘟快速诊断检测方法的建立和疫苗研究提供材料。【方法】构建p30原核表达质粒pET-30a(+)-p30,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,通过镍柱亲和层析获得目的蛋白。p30复性后,每2周对BALB/cWnt-C59化学结构小鼠免疫3次,将免疫小鼠的脾脏与骨髓瘤细胞融合制备单克隆抗体,通过ELISA方法和亚克隆筛选分泌抗体的杂交瘤细胞。将筛选出的单克隆细胞注射进小鼠腹腔制备腹水,通过Western blotting检测、免疫荧光测定(IFA)和抗体亚型分析来鉴定单克隆抗Bioelectronic medicine体。【结果】试验成功构建了p30蛋白的原核表达质粒,并使用IPTG诱导、纯化获得了原核系统表达的重组p30蛋白;成功制备出4株能稳定分泌针对ASFV p30蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为:1H3B4、3F2F5、6E3A1和9D6B9。经ELISA测定抗体腹水效价在1∶100 000～1∶1 000 000之间。经Western blotting和IFA鉴定筛选得到的单克隆抗体与p30蛋白能发生特异性反应。经亚型鉴定,3F2F5和9D6B9 2株单克隆抗体的重链均为IgG2b,轻链均为Kappa;6E3A1株单克隆抗体的重链为IgM,轻链为Kappa;1H3B4株单克隆抗体的重链为IgG2b,轻链为Lambda。【结论】试验成功制备了4株针对ASFV p30蛋白的单克隆抗体,并分析了单克隆抗体的免疫学特性,为p30蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供依据。

目的：提供一种雄烯二酮衍生物的合成方法，并对该化寻找更多合物的应用进行研究。方法：以依西美坦和Laduviglusib分子量多聚甲醛为原料，二甲胺盐酸盐为催化剂，一步反应制备得到目标化合物——6,16-二亚甲基雄甾-1, 4-二烯-3, 17-二酮，优化反应条件，并通过气相色谱-质谱、核磁共振等表征确认结构。同时Arsenic biotransformation genes，对该化合物的体外抗肿瘤活性进行实验，选用细胞株为胃癌细胞株（MKN45）、肺癌细胞（HCC-78）、人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）、肝癌细胞（HepG2）、卵巢癌细胞（3AO）。结果：通过表征确认了目标化合物的结构，且该化合物对肿瘤细胞有抑制活性，其中对人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）和卵巢癌细胞（3AO）抑制效果较好。结论：提供了一条操作简单、成本低、收率高的6, 16-二亚甲基雄甾-1, 4-二烯-3, 17-二酮合成路线，该化合物对肿瘤细胞有明显的抑制作用。

真空冷冻干燥作为最常用的菌种保藏方法,已被广泛应用于乳酸菌发酵剂的工业化生产中,但干燥过程中菌体仍不可避免的受到低温、酸、脱水和氧化等多种不利因素的影响,造成菌体损伤甚至死亡。目前,对真空冷冻干燥过程中氧化应激导致细胞损伤和活力降低的研究鲜有报道。本研究以乳双歧杆菌Probio-M8作为研究对象,从乳清蛋白水解物中分离得到的抗氧化肽HP3-2作为冻干保护剂,探究真空冷冻干燥过程中氧化应激对细胞膜结构和生物学特性的影响,以及在不同冻干保护剂作用下乳双歧杆菌Probio-M8的差异蛋白表达,从细胞分子水平和生理变化上共同揭示抗氧化肽HP3-2在真空冷冻干燥过程中对乳双歧杆菌Probio-M8细胞的保护机制。具体研究结果如下:(1)相较于中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,碱性蛋白酶对乳清蛋白的水解度较高(31.74%),且水解产物具有较强的抗氧化活性。将水解产物作为冻干保护剂可使乳双歧杆菌Probio-M8在真空冷冻干燥及贮藏过程中具有较高的菌种存活率(>72%),能够降低细胞内活性氧的积累和氧化产物丙二醛的含量,减少贮藏过程中温度和时间的变化对菌体失活速率的影响,提高菌种的贮藏稳定性。(2)使用超滤、离子交换层析、反向高效液相色谱以及液相色谱质谱联用技术对乳清蛋白水解物中的抗氧化肽进行分离、纯化和鉴定。结果发现,分子量<2k Da并且由丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)等多种疏水性氨基酸组成的抗氧化肽HP3-2,具有较高的DPPH清除率(88.11±0.38%)、氧自由基吸收能力(2.73±0.10μmol TE/g)和超氧阴离子吸收能力(62.54±3.16U/L),相较于乳清蛋白水解物,分离纯化后所获得的抗氧化肽HP3-2在真空冷冻干燥过程中对乳双歧杆菌Probio-M8具有更强的保护作用。(3)通过平板计数、气相色谱human respiratory microbiome质谱联用和流式细胞术等技术,对乳双歧杆菌Probio-M8的细胞膜结构、细胞膜内外离子浓度以及细胞活力进行测定。结果发现,抗氧化肽HP3-2能够降低真空冷冻干燥过程中细胞的内活性氧及丙二醛含量(2.14±0.06nmol/m L),使细胞膜中的不饱和脂肪酸维持较高的相对含量(51.49±1.26%),维持细胞膜流动性、细胞膜电位以及跨膜离子浓度(Na~+、H~+),保护F6PPK(50.41±1.68IU/g)和K~+Na~+-ATPase(5.26±0.08U/g)酶的活性,维持细胞内环境的稳态,使乳双歧杆菌PI3K抑制剂Probio-M8在真空冷冻干燥过程中具有较高的菌种存活selleckchem PLX5622率(80.40%±3.34)以及细胞活力。(4)使用TMT定量蛋白质组学技术对乳双歧杆菌Probio-M8在真空冷冻干燥过程中的蛋白质表达进行分析,结果发现,添加冻干保护剂能够保护细胞内核糖体蛋白,刺激蛋白质的翻译合成,其中,抗氧化肽HP3-2还能够提高细胞内烟酰胺核苷酸氨基水解酶家族蛋白、磷酸核酮糖3-差向异构酶和Ppx/Gpp A家族磷酸酶的表达,促进核苷酸代谢和碳水化合物代谢,提高乳双歧杆菌Probio-M8的抗逆性以及抗氧化能力,降低氧化应激对细胞的损伤。本研究的开展为真空冷冻干燥过程中氧化应激反应对乳双歧杆菌Probio-M8的细胞损伤机制提供理论依据,为新型冻干保护剂的开发以及发酵剂和乳酸菌制品的工业化生产提供新的方法与思路。

目的：观察黄芪汤对~(12)C~(6+)辐射脑损伤大鼠下丘脑组织中miRNA的基因表达及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响，初步探讨黄芪汤对重离子辐射损伤的防护机制。方法：SPF级Wistar大鼠50只随机分为正常对照组，辐射模型组，黄芪汤高、中、低剂量组（18、9、4.5 g·kg~(-1)·d~(-1)），灌胃2周。干预7 d后除正常对照组外，其余各组脑组织给予4 Gy ~(12)C~(6+)离子束单次照射，辐射后7 d处死各组大鼠。HE染色观察垂体组织的病理形态学改变；ELISA检测下丘脑组织IL-1β、IL-6的分泌情点击此处况；RT-PCR法检测下丘脑中miRNA与TLR4的基因表达；Western blot法检测下丘脑中TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达。结果：与辐射模型组比较，黄芪汤高剂量组IL-1β水平显著降低（P<0.01），中、高剂量组IL-6水平及miR-93、TLR4的基因表达显著降低（P<0.01),miR-140-5p的基因表达显著增加（P<0.01），黄芪汤各剂量组中TLR4、MyD88、NF-κB p65以及p-NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.01），黄芪汤高剂量组核固缩、深染现象明显减轻，偶见凋亡小体。Pearson分析表明，下丘脑中miR-93与TLR4蛋白、mRNA表达水平具有显著正线性相关性（P<0.01），而miR-140-5pEntinostat与TLR4蛋白和mRNA表达水平呈现负线性相关性（P<0.01）。结论：黄芪汤可能是通过抑制miRHepatic stem cells-93的过度表达和促进miR-140-5p的表达抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活，从而抑制其下游的炎症级联反应，减轻重离子辐射后造成的下丘脑损伤，发挥抗辐射的作用。

目的 系统评价口服Janus激酶(JAK)抑制剂治疗斑秃的有效性和安全性，为临床用药提供循证参考。方法 计算机检索PubMed、Embase、Web of Science、the Cochrane Library、中国知网、万方数据库和中国生物医学文献服务系统，收集口服JAK抑制剂(试验组)对比安慰剂(对照组)治疗斑秃的随机对照试验(RCT)，检索时限均为建库至2022年3月29日。由2位评价者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的质量后，采用RevMan 5.4软件进行Meta分析和发表偏倚分析。结果 共纳入5项RCT，合计2 170例患者，试验组1 619例、对照组551例。Meta分析结果显示，与对照组比较，试验组患者第24周[RR=6.10,95%CI(3.86,9.63),P<0.000 01]和第36周[RR=6.59,95%CI(4.16,10.43),P<0.000 01]脱发严重程度评分工具(SALT)评分≤20分的患者比例均更高；第24周医院焦虑抑郁量表-焦虑(HADS-A)评分[RR=0.35,95%CI(0.07,0.64),P=0.02]和医院焦虑抑郁量表-抑郁(HADS-D)评分[RR=0.50,95%CI(0.22,0.77),P=0点击此处.000 4]的降低值更大，第36周HADS-A评分[RR=0.55,95%CI(0.21,0.89),P=0.001]和HADS-D评分[RR=0.50,95%CI(0.16,0.84),P=0.004]的降低值亦更大。试验组患者痤疮[RR=4.07,95%CI(1.83,9.08),P=0.000 6]和低密度脂蛋白升高[RR=1.66,95%CI(1.21,2.28),P=0.median episiotomy002]的发生率均更高(P<0.05)，而两组患者尿道感染、上呼吸道感染、头疼、鼻咽炎、磷酸肌酶升高的发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。发表偏倚分析结果显示，本研究存在发表偏倚的可能性VP-16体外较小。结论 口服JAK抑制剂可显著促进斑秃患者的毛发再生长并改善其焦虑抑郁情况，痤疮和低密度脂蛋白升高为其主要不良事件。

目的：探讨舒芬太尼（Sufen）对肾缺血再灌注（RIRI）大鼠肾组织细胞自噬的影响及其作用机制。方法：将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、Sufen组、LY294002组、Sufen+LY294002组，每组12只，除对照组外，其他组MK-1775供应商均需构建RIRI模型。检测大鼠CB-839价格血清中肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）活性；Western blotting检测大鼠肾脏组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、PI3K、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达。结果：与模型组比较，Sufen组大鼠血清中Cr、BUMedical laboratoryN水平降低，肾脏组织中的肾小管损伤减轻，肾脏组织中MDA含量、自噬小体的数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低，SOD活性、p62蛋白、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平升高，而LY294002组上述对应指标与Sufen组呈相反趋势（均P<0.05）；与Sufen组比较，Sufen+LY294002组大鼠血清中Cr、BUN水平升高，肾脏组织中的肾小管损伤严重，肾脏组织中MDA含量、自噬小体的数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高，SOD活性、p62蛋白、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低（均P<0.05）。结论：舒芬太尼可能通过激活PI3K/AKT通路来抑制过度自噬，进而发挥对RIRI大鼠肾脏的保护作用。

目的:本研究通过动物实验,证实药食同源物质马齿苋的降脂作用效果;并利用网络药理学进一步探讨马齿苋的降脂机制,为临床护士应用马齿苋对高脂血症患者进行饮食护理提供科学理论依据,也为深入开展护理科研工作奠定研究基础。方法:1.取50只SPF级ICR雄性小鼠,按体重随机分成5组,每组10小alternate Mediterranean Diet score鼠,即空白组、模型组、西药非诺贝特组、马齿苋水煎液低剂量组、马齿苋水煎液高剂量组;除空白组外,其余四组小鼠均采用脂乳剂灌胃方式造模,造模成功后开始灌胃给药,连续给药21d。末次给药1h后小鼠双侧眼球取血,经全自动生化分析仪检测各项血脂指标;测量小鼠肝脏重量并计算器官指数。整个实验期间要保证各组小鼠的正常饮水并记录普通饲料的进食量。2.基于上述动物实验结果进一步开展网络药理学的分析,首先通过TCMSP数据库筛选马齿苋的有效成分;在通过Swiss Target Prediction数据库对马齿苋有效化学成分进行靶点预测。另一侧通过Gene Gards、OMIM、Drug Bank和TTD疾病数据库筛选出HLP相关靶点;运用Venny平台将疾病靶点与成分靶点取交集,在将交集靶点数据导入STRING数据库进行蛋白互作网络分析,并利用Cytoscape3.8.2软件构建靶点蛋白互作网络,最后利用Metascape在线数据库对靶标基因进行GO分析和KEGG分析。结果:1.马齿苋对小鼠血脂水平的影响:与模型组相比,马齿苋高剂量组小鼠的CHO(胆固醇)、TG(甘油三脂)、LDL(低密度脂蛋白)和葡萄糖指标均降低(P<0.05);而HDL(高密度脂蛋白)水平升高(P<0.05),差异有统计学意义。马齿苋高剂量组小鼠的TP(总蛋白)、ALT(丙氨酸氨基转移酶)和AST(天门冬氨酸氨基转移酶)水平与模型组相比均有下降(P<0.05);而ALB(白蛋白)水平升高(P<0.05)。2.马齿苋对小鼠肝脏的影响:与模型组相比,马齿苋低剂量组和马齿苋高剂量组小鼠的肝脏重量和肝脏器官指数均有一定程度的下降(P<0.05)。3.马齿苋对小鼠体质量的影响:与模型组相比,给药后小鼠的体重均有一定程度的下降,且马齿苋高剂量组第5周小鼠体质量下降程度有统计学意义(P<0.05)。4.马齿苋对小鼠食欲的影响:与空白组相比,模型组小鼠的进食量有一定程度下降,经统计学分析(P>0.05)。但第5周数据显示,马齿苋(低)和马齿苋(高)组小鼠的进食量与模型组相比有增加的趋势,初步考虑马齿苋具有一定的促进食欲效果。5.马齿苋治疗高脂血症的网络药理学研究:共筛选出10种有效成分,217个药物靶点;检索Gene Gards、O寻找更多MIM、Drug Bank和TTD 4个疾病数确认细节据库,共获得HLP相关的疾病靶点435个;药物靶点映射到疾病中共获得55个交集靶点;构建药物与疾病靶点PPI网络图,筛选出治疗HLP的核心靶点有TNF、IL6、AKT1、IL1B、VEGFA、TP53等20个;通过GO功能及KEGG通路分析得出富集通路共30条。结论:1.药食同源物质马齿苋能有效降低高脂血症模型小鼠的体重、肝重和肝脏指数,并对小鼠的肝脏起保护作用。2.马齿苋能有效降低模型小鼠的血脂指标,并增加进食量、促进食欲。3.本研究从网络药理学层面初步揭示了马齿苋防治HLP的作用机制,预测马齿苋可能通过脂质与动脉硬化、流体剪切应力与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、癌症的途径、TNF信号传导途径等信号通路发挥降血脂作用,为下一步深入实验性研究提供了依据。

目的 ：观察慈菇平岩方联合内分泌治疗对LuminalA型乳腺癌患者CD39、程序性死亡受体-1(PD-1)表达的影响，并分析临床预后与CD39、PD-1表达的相关性。方法：采用巢式对照研究法，以确诊为晚期LuminalA型乳腺癌为研究起点，将接受内分泌治疗（枸橼酸他莫昔芬片或来曲唑片）的病例作为内分对照组（35例），将与内分对照组基线资料相匹配的接受内分泌治疗+慈菇平岩方治疗的病例作为慈菇内分组（35例）。观察内分对照组和慈菇内分组临床预后情况（总生存月数）、药物不良反应及血清指标（CD39、PD-1）表达情况，并采用生存时间Kaplan-Meier曲线分析CD39、PD-1表达对临床预后的影响。结果：慈菇内分组平均总生存时间为（21.71±1.10）个月，长于内分对照组（15.06±0.48）个月（Chi-Square=3.419,P=0.044）。慈菇内分组的骨不良事件率（5.71%）、妇科不良事件率（2.86%）、心血管事件率（5.71%）、胃肠道structured biomaterials不良事件率（2.86%）、实验室指标异常率（5.71%）低于内分对照组（22.86%、17.14%、25.71%、20.00%、22.86%）(P<0.05)。内分对照组和慈菇内分组治疗后的CD39、PD-1Q-VD-Oph研究购买表达水平相较于治疗前均下降，但慈菇内分组的下降幅度优于内分对照组（P<0.05）。CD39阴性表达病例的平均总生存时间为（21.60±1.19）个月，长于CD39阳性表达病例（18.79±1.00）个月（Chi-SquarBMS-907351生产商e=5.681,P=0.017）。PD-1阴性表达病例的平均总生存时间为（20.09±0.92）个月，长于PD-1阳性表达病例（18.49±1.15）个月（Chi-Square=5.828,P=0.016）。结论：与内分泌治疗方案比较，慈菇平岩方+内分泌治疗方案能够使LuminalA型乳腺癌患者生存时间延长，不良反应降低，其机制可能与慈菇平岩方联合内分泌治疗改善患者免疫相关因子CD39、PD-1表达，恢复机体抗肿瘤免疫力有关。

基于网络药理学和细胞实验探讨和厚朴酚对PC12细胞HIF-1α-VEGF通路的调节作用。通过TCMSP数据库和Swiss Target Prediction数据库筛选出127个药物靶点；采用DisGeNET数据库收集到287个疾病靶点；通过String数据库构建PPI网络；采用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析。GO富集分析得到173个条目。KEGG通路筛选出前20条信号通路，包括HIF-1通路、VEGGefitinib-based PROTAC 3作用F通路、PI3K-Akt通路等。分子对接结果表明和厚朴酚与HIF-1α降解酶PHDs、VHL有较好的结合力。CCK-8法发现和厚朴酚能有效增加PC12细胞的存活率。正常环境下，和厚朴酚给药后HIF-1α、VEGF、PCP-690550化学结构SD 95、SYN 1蛋白表达升高（P < 0.05，P < 0.01）。缺氧环境下，和厚朴酚给药后HIF-1α和VEGF蛋白表达显著降低（P < 0.05，P < 0.01），而PSD 95和SYN 1蛋白表达显著升高（P < 0.01，P < 0.001）。综上，正常和缺氧环境下和厚朴酚对PC12细胞HIF-1α-VEGF通路有相反的调节作用，为和厚朴酚抗脑缺血、抗抑郁和抗肿瘤机制研gingival microbiome究提供可靠的理论和实验支持。