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目的 探讨鬼臼苦素(picropodophyllin, PPP)对费城染色体阳性(Ph+)慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞系K562和Ku812细胞焦亡的作用及其分子机制，为将PPP开发成为治疗Ph+CML药物提供理论依据。方法 流式细胞术检测PPP对K562和Ku812细胞死亡的影响以及Caspase泛抑制剂QVO对PPP诱导细胞死亡的影响；Western blot检测PPP对凋亡、焦亡和坏死性凋亡相关蛋白以及对Bcl-2家族蛋白表达的影响。结果 PPP呈剂量依赖性关系诱导CML细胞发生死亡，且相同剂量下PPP对Ku812细胞的作用明显强于K562细胞；QVO预处理Ku812细胞后，明显抑制PPP诱导细胞发生的死亡；PPP能够上调Image- guided biopsyKu812细胞中Bak蛋白的表达，诱导Caspase-3、7和9的活化以及非综合征性耳聋蛋白5(DFNA5/GSMDE)和PARP的切割；在K562细胞中，PPP能够抑制Mcl-1和Bcl-2蛋白的表达。结论 PPP能显著地诱PLX-4720半抑制浓度导Ku812细胞发生焦亡，其机制可能是通过上调促凋亡蛋白Bak表达，进而活化Cashttps://www.selleck.cn/products/dibutyryl-camp-bucladesine.htmlpase-3并诱导焦亡相关蛋白DFNA5/GSMDE的切割。

磁性纳米材料由于其多功能性和高适应性已经被广泛应用于各个领域,尤其是生物医学领域。其中,磁珠法检测试剂盒已成为日常检验必不可少的试剂盒之一。但目前国内对此类磁珠材料在合成和设计方面仍然存在性能不稳定的问题,因此提供性质稳定、性能优异、方法简便、用于吸附生物大分子的磁珠成为国内外研究人员的目标。本文制备了三GSKJ4研究购买种以Fe_3O_4为内核,以不同高分子材料为功能外壳的磁性复合材料。采用FTIR、TEM、VSM等测试对磁珠样品的性质进行表征,并且将牛血清蛋白(BSA)作为模型蛋白进行吸附性能的研究。以溶剂热法Fe_3O_4为磁性内核,以溶胶-凝胶法制备的SiO_2为次外层,通过丙烯酰胺和甲基丙烯酸交联形成含有羧基的功能外层。表征分析结果显示该方法制备的材料具有明显的壳核结构以及良好的分散性和超顺磁性。通过对材料进行不同吸附影响因素的探究,发现该材料对BSA吸附效果明显(7.1 mg/g),分别在pHMLN8237作用=5和t=90 min时吸附Research Animals & Accessories效果达到最佳。同时该磁珠在循环稳定性方面表现优良,循环吸附4次后仍能保持原吸附量的95%以上。采用共沉淀法Fe_3O_4为磁芯材料,正硅酸乙酯(TEOS)在碱性环境下水解并附着在磁芯表面形成均匀的SiO_2外壳,再通过将特殊处理过的硅烷偶联剂与SiO_2发生硅烷化反应,从而完成对硅基外壳的修饰。该方法制备的材料拥有不规则形貌的内核和清晰的壳核结构。粗糙的外轮廓为蛋白质提供更多的吸附位点,材料对BSA的吸附量达到16.5 mg/g。探究pH值、时间等因素对吸附性能的影响,经吸附动力学拟合,结果显示吸附过程以化学吸附为主。采用共沉淀法制备的Fe_3O_4微粒为内核,对其进行油酸修饰改善表面疏水性,以苯乙烯和丙烯酸为单体共同聚合形成聚合物功能外壳。通过TEM、VSM等表征,该材料具有较快的磁响应和球形壳核式结构。再结合其吸附BSA的表征结果,展现出了16.7 mg/g的高吸附量。在时间和溶液pH值的条件探究实验中,结果分别在pH=5和110 min是达到最大吸附量。作为基础性吸附材料,在循环稳定性方面具有一定竞争力。

目的 探索巨噬细胞在肝癌炎症微环境中通过炎症趋化因子(C-X-C基序)配体1 (CXCL1)调控肝癌细胞系Huh7进展。方法 筛选肿瘤临床数据库TISIDB,分析CXCL1与肝癌患者预后的关系。免疫组化、免疫荧光染色验证肿瘤巨噬细胞与CXCL1的关系。通过佛波酯(PMA)诱导人单核细胞(THP-1)获得未分化的巨噬tick borne infections in pregnancy细胞(M0),建CH-223191临床试验立与肝癌细胞共培养模型,实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞表型的改变;细胞克隆形成实验、台盼蓝细胞MK-2206 NMR活率检测肝癌细胞的增殖能力;肝癌细胞的迁移及侵袭能力使用Transwell实验检测;肝癌细胞Huh7 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达水平使用蛋白印迹法检测;酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测细胞培养液中目标蛋白的表达。结果CXCL1高表达与肝癌患者不良预后有关,并且高表达CXCL1的肝癌组织具有更多的巨噬细胞富集。在巨噬细胞-肝癌细胞共培养模型中,两种细胞CXCL1的表达水平及共培养液中CXCL1浓度均增加。巨噬细胞M2型标记物CD163、CD206mRNA表达水平升高。肝癌细胞Huh7的增殖、迁移及侵袭能力增强。结论 巨噬细胞-肝癌细胞共培养增加肿瘤相关巨噬细胞CXCL1表达,促进肝癌细胞系Huh7进展。

目的：研究养心氏片联合氯吡格雷治疗冠心病心绞痛的效果。方法：选择2019年1月—2022年1月我院收治的84例冠心病心绞痛患者，按照随机数字表法分为对照组和观察组，每组42例。两组均根据实际病情采用β受体阻滞剂、他汀类降脂药和硝酸酯类扩血管剂等治疗，对照组在此基础上口服氯吡格雷治疗，观察组在氯吡格雷基础上联合口服养心氏片治疗。比较两组临床疗效、血清指标[核因子抑制蛋白-κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)、脂购买Staurosporine蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)、白细胞介素-18(IL-18)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)和髓过氧化物酶（MPO）]及心功能指标[左室舒张末径（LVEDD）、心输出量（CO）和左室射血分数（LVEF）]。结果：观察组总有效率高于对照组（P<0.05）；两组治疗后NF-κB、IL-6、LpAppropriate antibiotic usePLPEG300溶解度A2、IL-18、s ICAM-1和MPO水平低于治疗前，且观察组低于对照组（P<0.05）；两组治疗后LVEDD低于治疗前，CO和LVEF高于治疗前，且观察组LVEDD低于对照组，CO和LVEF高于对照组（P<0.05）。结论：养心氏片联合氯吡格雷治疗冠心病心绞痛患者的疗效确切，可降低炎症因子水平，改善心功能，值得临床借鉴。

目的 探讨乳腺癌患者凝血Biomass pyrolysis四项指标与乳腺良性肿瘤、病理类型及远处淋巴结转FUT-175移的关系。方法 以2019年7月～2021年7月我院收治的23例乳腺癌患者为对象，以同期87例乳腺良性肿瘤患者为对照组。检测两组凝血四项指标，记录乳腺癌组病理类型及远处淋巴结转移情况。结果 乳腺癌组凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（aPTT）低于对照组，凝血酶时间（TT）水平高于对照组，血清纤维蛋白原（Fbg）水平高于对照组（P<0.05）。乳腺癌患者aPTT、PT、TT和Fbg水平变化与病理类型无关（P>0.05）；合并淋巴结转移乳腺癌患者aPTT、PT、TT水平与无淋巴结转移组无差异（P>0.05），而血清Fbg高于无淋巴结转移组（P<0.05）。Berzosertib体内实验剂量结论 乳腺癌患者较乳腺良性肿瘤表现出更明显的高凝状态，临床可根据其凝血功能评估远处淋巴结转移情况。

目的 基于网络药理学和动物实验探究PLX4032九转黄精丸治疗代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)作用机制。方法 通过TCMSP、Pharm Mapper和SwissTargetPredicition数Erdafitinib小鼠据库收集九转黄精丸化学成分及其靶点；利用GeneCards和OMIM数据库检索MAFLD相关的疾病靶点；运用DrawVennDiagram软件构建九转黄精丸和疾病的共同靶点；利用STRING 11.0数据库构建共同靶点蛋白相互作用网络；运用Cytoscape 3.8.2构建药物-成分-靶点-疾病网络；利用Metascape数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析，并构建活性成分-靶点-通路网络。高脂饮食喂养12周建立MAFLD大鼠模型，造模同时给予九转黄GMO biosafety精丸干预，取各组大鼠肝脏及血清，油红O染色观察肝组织形态变化，ELISA法检测肝组织脂质以及炎症因子水平，Western blot法检测肝组织炎症通路相关蛋白表达。结果 九转黄精丸与MAFLD共同靶点有60个；GO富集分析涉及生物过程1 223个条目、细胞组分66个条目和分子功能94个条目；KEGG分析筛选出癌症通路、TNF-α通路、NAFLD、PI3K-Akt等15条信号通路。给予MAFLD大鼠九转黄精丸后，肝组织病理形态得到改善，肝组织TC、TG、LDL-C水平，肝组织及血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平和肝组织p-NF-κB/NF-κB、p-IκBα/IκBα比值降低(P<0.05,P<0.01),PI3K、Akt蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论 九转黄精丸对MAFLD具有一定的保护作用，其机制可能与调控PI3K-Akt、NF-κB、TNF等炎症通路有关。

目的:前列腺癌(PCa)严重威胁我国男性人群身心健康,是成为我国重要公共卫生问题之一~([1Tofacitinib核磁])。中国的PCa患者约70%在初诊时已是中晚期,5年生存率只有53.8%,这为我国前列腺恶性肿瘤的治疗带来了巨大的挑战~([2])。在关于PCa的基础研究中,除了传统的编码蛋白基因的突变或异常表达,近来越来越多的研究表明非编码RNA(nc RNA)特别是长链非编码RNA(lnc RNA)的突变和异常表达,在癌症的发生发展中也扮演了重要角色~([3])。本研究通过生物信息学方法在数据库中挖掘和筛选,筛选鉴定出基因表达与前列腺癌(PCa)的恶性程度和患者生存预后密切相关并同时具有相关性的lnc RNA、miRNA以及m RNA基因,并通过基础实验验证能对前列腺癌的生物学行为有影响的ceRNA网络,为临床PCa的诊断和治疗提供新的思路和方向。方法:1.在数据库中分析与前列腺癌生长和预后密切相关的lnc RNA/miRNA/m RNA,预测待验证的ceRNA网络:从TCGA(https://cancergenome.nih.gov/)数据库中筛选出前列腺腺癌数据集(PRAD)~([4])。该数据集共纳入440名组织学类型为PCa的患者资料,一共440例PCa组织,48例正常前列腺组织。由于本数据集中关于患者的总生存时间的数据较少,因此选择无进展生存期(PFS)作为预后分析参数。采用R软件的“limma”软件包进行差异分析。PCa肿瘤与正常前列腺组织中,设定如果FC>1.5或FC<2/3相当于|log~2FC|>0.584963且p值调整值<0.01,则认为存在显著差异表达基因。生存分析采用Cox回归分析,p<0.01为生存差异显著。利用在线数据库Lnc Base,miRwalk和Targetscan预测lnc RNA、miRNA和m RNA的靶点。预测出表达量与前列腺癌恶性程度及预后强相关的ceRNA网络,即lnc AC004447.2/miR-133b/SDCCAG,根据HGNC相关命名规则将lnc AC004447.2命名为lncHUPC1~([5])。通过相关数据库明确lncHUPC1的染色体位置和碱基结构。2.收集临床样本进行数据分析,验证预测的ceRNA网络,即lncHUPC1/miR-133b/SDCCAG3在组织标本的表达以及与PCa的临床特征关系:本研究中使用的组织样本来自2018年11月至2021年11月期间就诊于重庆医科大学附属第一医院泌尿外科的70例PCa患者。患者的组织样品经过采集后,保存在-80℃的液氮罐中。本回顾性研究分析了患者的基线情况、PSA、Gleason评分以及TNM分期情况。本课题的研究内容已经过重庆医科大学伦理委员会批准,严格按照《赫尔辛基宣言》的准则进行。首先使用q-PCR来检测前列腺癌组织中lncHUPC1、miR-133b、SDCCAG3的RNA水平表达的情况,并结合临床病理资料分lncHUPC1/miR-133b/SDCCAG3的表达与临床病理特征和总体预后的关系。3.体外实验研究验证lncHUPC1通过miR-133b/SDCCAG3影响PCa细胞的凋亡和生长的现象并探讨机制:用q-PCR检测lncHUPC1/miR-133b/SDCCAG3在4种常见的前列腺癌细胞系(LNCa P、22RV1、DU145、PC3)及前列腺正常上皮细胞(RWPE-1)中的表达情况,从中挑选出表达量差异最明显的LNCa P和22RV1两种PCa细胞以及RWPE-1细胞株用于direct tissue blot immunoassay后续实验。FISH探针和q-PCR结合共同验证lncHUPC1的表达的细胞亚定位,3’-RACE和5’-RACE实验验证lncHUPC1的全长序列是否与数据库中相符合。Western blot检测各个细胞株中的SDCCAG3和Fas凋亡通路的下游因子cleaved cas8、cleaved cas3表达情况。在前列腺癌细胞中通过带绿荧光的慢病毒转染构建敲低lncHUPC1的稳转细胞株(sh lncHUPC1)及其空载慢病毒对照组(sh control),用倒置荧光显微镜观察转染情况;在转染了慢病毒的PCa细胞中,再使用miR-133b inhibitor和miR-133b mimic进行转染以降低或者增强miR-133b的表达,构建出以下4个试验组(1)双对照组:sh control+miR NC,(2)敲低lncHUPC1加miR NC组:sh lncHUPC1+miR NC,(3)敲低lncHUPC1加抑制miR-133b组:sh lncHUPC1+miR-133b inhibitor,(4)敲低lncHUPC1加增强miR-133b组:sh lncHUPC1+miR-133b mimic。分别使用q-PCR验证其转染效率。平板克隆形成实验和CCK-8实验用来检测不同处理组中细胞的生长情况。凋亡相关试剂(Hoechst/PI原位染色)染色和流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。4、通过荧光素酶实验及Ch IRP-q PCR验证lncHUPC1与miR-133b,miR-133b与SDCCAG3之间互相能靶向结合:构建lncHUPC1和SDCCAG3的相关预测结合位点的荧光素酶质粒,通过和miR-133b mimic共培养,通过双荧光素酶实验验证lncHUPC1Dolutegravir分子式与miR-133b、miR-133b与SDCCAG3的3’UTR能靶向结合。构建lncHUPC1多节段的探针,Ch IRP-q PCR实验定量验证lncHUPC1与miR-133b的富集丰度再次验证它们之间是否能靶向结合。5、体内实验验证采用裸鼠皮下成瘤和骨转移瘤模型研究敲低lncHUPC1对PCa细胞生长及凋亡的影响:使用裸鼠构建PCa细胞株的皮下移植瘤模型和骨转移瘤模型,使用慢病毒稳转的sh lncHUPC1(敲低实验组)和sh control(空白对照组)的22RV1细胞进行成瘤。通过测量皮下成瘤的大小绘制生长曲线以及称量瘤体的重量以及瘤体的ki67、SDCCAG3、cleaved cas8的IHC分析验证敲低lncHUPC1后PCa生长减缓,凋亡增加。另有部分的裸鼠通过胫骨注射PCa细胞形成骨转移瘤模型(分组同前),X射线成像验证骨转移灶形成,测量并计算瘤体的重量以及占后腿的比例,同样对瘤体进行HE染色观察对骨质的破坏程度和IHC测cleaved cas8分析凋亡程度。6、数据库分析lncHUPC1的上游转录因子,采用Ch IP-q PCR和双荧光素酶报告实验在PCa细胞中进行验证:通过TRlnc和JASPAR数据库预测启动lncHUPC1转录的上游相关转录因子,初步推测FOXA1可能性较大,通过质粒敲低FOXA1分析lncHUPC1及SDCCAG3的表达变化;构建lncHUPC1的预测启动子区域的荧光素酶质粒,通过与FOXA1敲低质粒的共培养,双荧光素酶验证lncHUPC1启动子区域与FOXA1是否能靶向结合,Ch IP-q PCR实验通过分析FOXA1蛋白抗体富集的lncHUPC1的DNA丰度再次验证FOXA1能与lncHUPC1的启动子区域靶向结合,促进其转录。结果:1、通过生物信息学方法在数据库中的分析得出:在PCa中,lncHUPC1、SDCCAG3在前列腺癌组织中高表达,miR-133b在正常前列腺癌组织中高表达,而且lncHUPC1、SDCCAG3高表达的患者PFS时间短,miR-133b高表达的患者PFS生存时间长;lncHUPC1、miR-133b、SDCCAG3在PCa中的表达均具有相关性。2、PCa组织样本收集及回顾性分析显示,lncHUPC1、SDCCAG3在PCa的癌组织中较癌旁组织表达升高,miR-133b则反之在PCa癌组织中表达较低,而且GS评分高(>7)的患者lncHUCP1和SDCCAG3的表达较高,miR-133b的表达较低,lncHUPC1与miR-133b、miR-133b与SDCCAG3呈负相关表达,lncHUPC1与SDCCAG3的表达呈正相关。3、体外细胞实验中,敲低lncHUPC1后,PCa细胞的生长减缓,凋亡增加,miR-133b、cleaved cas8、cleaved cas3的表达增加,SDCCAG3表达降低;而再敲低miR-133b后PCa细胞的生长又能回复一部分,凋亡减少,引起SDCCAG3增加和cleaved cas8、cleaved cas3的表达降低;而过表达miR-133b后细胞的凋亡最多生长更加减缓,SDCCAG3的表达更低,cleaved cas8、cleaved cas3的表达增多。4、在Ch IRP中,相比较于Lac Z组,Ch IRP-q-PCR结果miR-133b或lncHUPC1的表达在奇偶探针组中都较Lac Z对照组的高。双荧光素酶检测结果显示,miR-133b mimic转染后降低了含有野生型lncHUPC1(WT)载体的荧光素酶活性,但未能降低lncHUPC1突变型载体(mut)的荧光素酶活性,提示miR-133b可能直接与lncHUPC1靶向结合。双荧光素酶检测结果显示,转染miR-133b mimic后,含有SDCCAG3m RNA野生型载体(wt)组的荧光素酶活性明显降低,但不能降低突变型载体(mut)突变组的荧光素酶活性,说明miR-133b可以直接与SDCCAG3 m RNA靶向结合。5、PCa细胞在裸鼠体内形成皮下或骨移植瘤后,敲低lncHUPC1能减缓瘤体生长,SDCCAG3表达减少,凋亡相关的下游因子cleaved cas8表达增多;6、数据库预测FOXA1可能是促进lncHUCP1转录的上游转录因子,敲低FOXA1后lncHUCP1和SDCCAG3的表达均降低。lncHUPC1的启动子区域有FOXA1结合的靶点,FOXA1的蛋白抗体能明显富集lncHUPC1的DNA。结论:基于上述研究结果,我们检索出了一个能促进前列腺癌生长的还未被研究过的lnc RNA:lncHUPC1,同时研究了lncHUPC1如何在体外和体内环境中通过与miR-133b/SDCCAG3形成ceRNA网络对前列腺癌细胞的凋亡产生抑制作用从而促进肿瘤生长,而且该ceRNA网络可能是通过FOXA1作为转录因子启动的。总之,lncHUPC1以及FOXA1/lncHUPC1/miR-133b/SDCCAG3调控轴可能成为前列腺癌诊断的标志物,将来成为治疗研究的新靶点和方向。

目的 研究Mus81基因沉默对MCF-7人乳腺癌细胞系增殖、Adezmapimod细胞培养凋亡和化疗敏感性的影响并初步探讨其调控机制。方法 首先构建Mus81沉默的MCF-7乳腺癌细胞系，使用噻唑蓝(MTT)法和平板克隆实验检测细胞生长和增殖，碘化丙锭(PI)染色法和膜联蛋白V(Annexin V)-APC染色法检测细胞周期及点击此处凋亡的变化。qRT-PCR检测Mus81沉默后下游基因的表达，systems medicineMTT法检测化疗药物的50%抑制浓度(IC50)及逆转指数(RI)。结果 (1)MTT生长曲线和平板克隆实验显示Mus81基因沉默后MCF-7细胞系增殖显著减缓(P <0.001)，细胞克隆数明显下降(P <0.001)。(2)Annexin V-APC和PI染色检测显示MCF-7细胞凋亡率升高(P <0.001)，并出现明显的G2/M期阻滞。(3)MTT检测结果显示，Mus81沉默后MCF-7细胞对顺铂、阿霉素、表阿霉素和5-氟尿嘧啶的IC50值明显降低，RI依次为5.118、3.070、3.027及8.997。(4)qRT-PCR及Western blot检测下游信号通路表达的结果显示，Mus81沉默后MCF-7细胞中的APAF1、APC和PTEN基因表达升高，MAPK3和MAPK1基因表达降低。结论 Mus81基因沉默可明显抑制MCF-7人乳腺癌细胞系的生长增殖并诱导G2/M期阻滞及细胞凋亡，还可提高MCF-7细胞对顺铂、阿霉素、表阿霉素和5-氟尿嘧啶的敏感性，其机制可能与调控APAF1、APC、PTEN、MAPK1及MAPK3等下游基因的表达有关，提示Mus81可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点。

2019年新冠肺炎(COVⅠD-19)席卷全球,肺部被新冠肺炎病毒感染后有可能会导致肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)。肺纤维化是一种十分严重的肺部病症,引起病变的主要原因是人体的修复机能对损伤的肺泡组织进行过度或者异常修复,临床表现为干咳、气短。目前肺纤维化疾病主要分为以下三大类:继发性肺纤维化(secondary pulmonary fibrosis)、特发性肺纤维化或原发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,ⅠPF)和间质性肺炎(interstitial lung disease,ⅠLD)。其中危害最大的是ⅠPF。近些年来,肺纤维化的发病率和死亡率逐年攀升,然而目前临床上却没有能够治愈或逆转肺纤维化的特效药。越来越多的研究发现,转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)通过作用于TGF-βⅠ型受体在肺纤维化疾病中发挥不可替代的作用。TGF-βⅠ型受体受到ATP的调节,即当其与ATP结合时才能显现出激酶活性,磷酸化下游的SMAD蛋白,介导下游的TGF-β/SMAD信号通路,进而在肺纤维化进程中发挥重要作用,但是目前临床上并没有用于治疗肺纤维化的TGF-βⅠ型受体抑制剂类药物。本研究以此为背景,使用虚拟筛选的方法,在中国天然产物数据库中筛选具有竞争性抑制ATP与TGF-βⅠ型受体结合潜力的天然产物活性成分,经过类药性分析它们的成药性后,选择筛选结果较优的部分候选天然产物小分子,通过分子动力学模拟的研究方法评估其在模拟的自然状态下与TGF-βⅠ型受体的结合情况,并筛选出表现良好的候选成分。而后在细胞水平初步探究候选天然产物活性小分子对TGF-β诱导的人胚肾细胞(HEK293细胞)增殖的抑制效果,在酶活性水平再次验证其对TGF-βⅠ型受体活性的抑制能力。最后检测候选小分子对人肺癌肺泡基底上皮细胞(A549细胞)中p-Smad蛋白的抑制效果以及对肺纤维化小鼠的治疗效果。首先,我们以TGF-βⅠ型受体为靶点,在中国天然产物数据库中通过虚拟筛选得到与TGF-βⅠ型受体结合时,结合能比ATP低(结合能绝对值比ATP大)且按照结合能排序靠前的543个天然产物小分子。然后根据Lipinski类药性原则,筛选得到具有成药可能性的475个天然成分,进而对其进行精确对接,经过综合评估后得到5种候选天然产物小分子。接着通过分子动力学模拟的方法,评估这5种小分子在模拟的自然状态下与TGF-βⅠ型受体的结合情况。均方根偏差(RMSD)分析的结果表明,5种候选天然产物成分的动力学模拟体系在50ns模拟进程中最后都趋于平衡。使用MM-GBSA算法计算配体-受体的结合自由能,结果显示,CNPD 3与TGF-βⅠ型受体的结合能力较强,甚至优于阳性对照组SB431542;CNPD 4与CNPD 5与TGF-βⅠ型受体的结合能力一般,与SB431542相似;而CNPD 1和CNPD 2的结合能力则较弱,其结合自由能的绝对值甚至低于TGFβR1-ATP。最后通过模拟分析这5种活性成分与TGF更多-βⅠ型受体的结合位置来判断结合情况,结果表明大部分小分子都结合在TGF-βⅠ型受体的ATP结合区域中,只有CNPD 2在体系中结合时发生偏离。以上结果表明,CNPD 1和CNPD 2的结Z-IETD-FMK价格合不够稳定,而其他3种候选天然产物活性成分与TGF-βⅠ型受体均有较强的亲和力,与预期相符。接下来,我们选取3种天然产物活性小分子CNPD3、4、5及阳性对照组SB431542,通过CCK-8试剂盒检测其在不同浓度下对TGF-β诱导HEK293细胞增殖的抑制作用,并进行比较,以初步判断候选小分子抑制TGF-β信号通路的效果。结果表明与SB431542相比,CNPD 3、CNPD 5对细胞增殖有较好的抑制效果且抑制能力与加入浓度呈正相关。而CNPD 4的抑制效果则不佳。在酶活水平上使用双荧光素酶报告基因实验进一步研究了3种候选天然产物活性成分对TGF-β诱导的HEK293细胞中TGF-βⅠ型受体活性的抑制效果。结果表明3种候选天然产物成分均能有效抑制TGF-βⅠ型受体的活性,其中,与阳性对照组SB431542相比,CNPD 3、CNPD 5的抑制能力更强,表现出显著的剂量依赖性,CNPD 4的效果则不如前两者。最后,我们对活性成分CNPD 5进行了细胞和动物水平方面抑制TGF-β/SMAD信号通路和抗肺纤维化效果的初步研究。首先向TGF-β诱导的A549细胞中加入不同浓度的CNPD 5,用Western Blot的方法检测体系中p-Smad蛋白的表达量,结果显示随着CNPD 5浓度的升高,p-Smad蛋白的表达量显著降低,证明CNPD 5在细胞水平能够显著抑制TGF-β/SMAD信号通路。在此基础上,我们使用气管滴注博来霉素(BLM)的方法构建肺纤维化模型,以研究CNPD 5的抗肺纤维化效果。我们使用现有抗肺纤维化药物吡非尼酮(Pirfenidone,PFD)作为阳性对照药,将PFD和CNPD 5以灌胃方式进行给药。之后处死小鼠并对肺部进行HE、Immunocompromised conditionMasson染色观察不同组别间的肺纤维化程度。结果显示使用CNPD 5进行灌胃的小鼠,肺纤维化程度明显降低,且优于阳性对照的PFD处理组。综上所述,本次研究以探究TGF-βⅠ型受体抑制剂开发新型抗肺纤维化药物为方向,首先对中国天然产物数据库进行了筛选,并分别在细胞水平、酶活性水平及动物水平上对候选小分子的抑制TGF-βⅠ型受体进而抑制TGF-β/SMAD信号通路进行验证,得出天然产物活性小分子CNPD 5具有成为新型抗肺纤维化药物潜力的重要结论。我们的研究为以TGF-βⅠ型受体为靶点进行新型抗肺纤维化药物的研发提供了重要参考,并且为开发具有我国自主知识产权的新型抗肺纤维化药物奠定了坚实基础。

目的 探讨乳腺癌新辅助化疗(NAC)后残余瘤灶MRI表现与病理反应性的关系。方法 回顾性分析经病理确诊的70例乳腺癌患者，所有患者均行NAC,分别于化疗前、化疗结束后术前1～2周内进行乳腺动态增强MRI检查。根据NAC后手术病理结果，分为组织学显著反应(MHR)组和Angiogenesis抑制剂组织学非显著反应(NMHR)组。记录乳腺癌患者的临床病理资料及化疗前后MRI资料，探讨其与病理反应性的关系。结果 NAC后经手术病理证实，MHR组24例，NMHR组46例。MHR与NMHR组间，年龄、T分期、N分期、HER2、Ki-67状态和MRI上肿瘤强化方式间差异均无统计学意义(P>0.05);月经状态、雌激素受体、孕激素受体、分子亚型和肿瘤退缩模式组间差异有统计学意义(P<0.05)。不同分子亚型间肿瘤的强化方式差异无统计学意义(P>0.05),肿瘤的退缩模式差异有统计学意义(P<0.05)。NAC前MHR组与NMHR组间STM2457最大径LD1、ADC1差异均无统计学意义(P>0.05);NAC后两组间最大径LD2、ADC2、ΔLD%、ΔADC%差异均有统计学意义(P<0.05)。LD2、ADC2、ΔLD%、ΔADC%对MHR的曲线下面积分别为0.881、0.772、0.875、0.657。结论 乳腺癌患者NAC后瘤灶在MRI上的形态学表现和功能学改变对病理反应性具有较好的Automated Liquid Handling Systems评估价值。