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酶是经过数十亿年自然选择和优化而成的高效生物催化剂,通过催化多种多样的化学反应在生物体中发挥着重要作用。酶的折叠结构对环境的变化极其敏感,导致酶的催化性能容易受到外界条件变化的影响。因此天然酶实现高效的催化往往需要温和的反应条件,这通selleck NMR常不能满足工业转化的需求。同时,天然酶还有难以分离纯化、修饰工艺复杂等不足。研究者们为了扩大酶的应用范围发展了多样的酶工程技术,比如定向进化是调控酶功能的有效手段,但该方法仅限于酶蛋白中天然氨基酸种类的更换,无Electro-kinetic remediation法利用种类丰富的氨基酸变体或衍生物,且需要反复迭代而费时费力。基于酶本身固有的超分子属性,分子自组装作为一种自下而上构建特定结构材料的方法,具有操作方法简单、制备条件温和以及可设计性强等特点,为从头设计和制备具有酶催化功能的人工催化剂提供了一条新的途径。酶的更多活性位点是酶催化功能发挥的关键区域,如何在人工体系中模拟天然酶活性位点的几何结构和化学环境,获得催化性能能够匹敌甚至超越天然酶的催化体系,是一项有挑战性的研究课题。本论文受天然酶的活性中心结构和催化原理启发,通过生物分子自组装的方法设计并构建了三种仿氧化酶催化体系:(1)天然水解酶活性中心通常含有组氨酸残基,同时组氨酸也是多铜氧化酶(如漆酶)活性位点的关键残基,能够与辅因子铜配位并实现底物的高效转化。受到水解酶和多铜氧化酶活性中心结构的启发,本论文通过芴甲氧羰基(Fmoc)组氨酸衍生物与Cu~(2+)自组装制备了能够催化水解和氧化反应的双功能模拟酶。通过Fmoc基团的聚集,实现组氨酸咪唑基团的富集,获得了较高的催化水解活性;Cu~(2+)与Fmoc-组氨酸组装构建了具有类似漆酶多铜活性中心的氧化模拟酶,鸟嘌呤核苷酸(GMP)的加入进一步提升了催化氧化活性。模拟酶展现了催化水解-氧化(或氧化-水解)级联反应的能力,且具有良好的热稳定性,在分解芳香酯类污染物方面具有一定的应用潜力。进一步地,通过对组装基元中咪唑不同位置N的甲基修饰实现了对仿酶活性的调控;当N_δ位的H被甲基取代后,咪唑侧基的亲核能力增强以及与铜的配位-解离速度变快,使得模拟酶表现出较高的催化水解和氧化活性,而N_ε位的H被甲基取代后水解和氧化活性均明显下降,咪唑不同位置的N在催化过程中展现出异质性。该工作证实了分子自组装方法可以方便的利用两亲性氨基酸构筑级联的人工催化体系,并通过氨基酸的修饰实现对催化性质的调控。(2)基于酶-底物复合物的启发,本论文通过鸟嘌呤核苷自组装制备了负载核黄素的可光产H_2O_2的超分子凝胶状材料。鸟嘌呤核苷在K~+的辅助下通过氢键形成G四分体,进而π-π堆积成纤维,随后在交联剂的作用下形成超分子凝胶,并通过共价连接和堆积作用负载核黄素。核黄素作为光催化活性中心,鸟嘌呤核苷作为还原性底物,两者相互靠近,形成待激活的活性中心-底物复合物功能材料。在蓝光(460 nm)照射下,材料无需添加其他组分便可实现完整的催化氧化循环并释放H_2O_2,且具有优异的储存稳定性和耐热性能。光产H_2O_2的特点使得光照后的材料表现出良好的抗菌性能,同时材料具备生物安全性,有潜力成为一种无需实时光照的具有抗菌效果的伤口敷料。(3)基于辣根过氧化物酶(HRP)活性中心远端组氨酸残基在催化循环中的作用,本论文设计了富含组氨酸的多肽并与HRP共组装形成具有高催化活性的超分子复合物。组氨酸多肽能够自组装形成β-折叠结构并与HRP发生非共价相互作用改变HRP的构象,使得多肽提供的外源组氨酸可能接近血红素活性中心并加快血红素静息态和中间态的转换,从而加快酶的催化循环,使得HRP的催化速率最大提升接近3倍。同时,HRP/多肽复合物具有更好的稳定性,且组氨酸多肽表现出对其他血红素依赖酶的活性增强作用。高催化活性的HRP/多肽复合物应用于生物分子检测,能够有效提高检测灵敏度。本论文中基于天然酶启发的生物分子自组装的方法为调控酶功能、扩大酶的应用范围提供了一条简而有效的途径,为超分子化学和酶工程等领域建立了桥梁。以天然酶为灵感进行模拟酶催化体系的人工仿生设计,有助于人们理解酶的催化过程和生命的进化演变。

单核细胞和巨噬细胞在健康和疾病中均发挥Docetaxel NMR重要作用，是固有免疫的重要组Serum laboratory value biomarker成，在其介导的炎症反应中保护宿主、清除病原Enasidenib体和调节免疫平衡，可通过清除细胞碎片、异物及调节炎症和愈合过程等维持内环境稳定。根据微环境和细胞激活状态，巨噬细胞可通过改变不同表型影响疾病转归。近二十年人们对胆碱能抗炎通路（CAP）在炎症反应中的作用及机制研究越来越深入，尤其是该通路中的重要结构——α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR），其本质为神经免疫系统的配体门控离子通道，且在调控单核/巨噬细胞吞噬、趋化因子和细胞因子产生、细胞存活和极化等方面发挥重要作用，相关机制涉及NLRP3炎症小体，可作为多种炎症性疾病的潜在治疗靶点。本文综述α7nAChR在炎症和免疫介导的疾病中对单核/巨噬细胞功能调控和极化的作用。

目的通过处方筛选制备出粒径均一,稳定的塞来昔布纳米晶;制备出针形较好,机械性能强的塞来昔布纳米晶可溶微针并建立评价体系;通过建立骨关节炎大鼠模型研究负载塞来昔布纳米晶可溶微针对骨关节炎的治疗效果,为骨关节炎的治疗提供新的思路与策略。方法通过反溶剂沉淀法制备塞来昔布纳米晶,优化处方和工艺;通过透射电镜观察纳米晶的形态;通过X射线衍射与差示热探讨纳米晶的晶型结构;通过体外溶出实验,研究将塞来昔布制备成纳米晶后的溶出率;通过体外细胞毒性实验,探讨纳米晶的安全性;通过Western Blot实验研究塞来昔布纳米晶的抗炎效果;通过两步制针法制备塞来昔布纳米晶可溶微针,对其形态、机械性能、溶蚀性能、载药量等进行考察,探讨可溶微针包载CXB-NCs的可行性;建立ACLT骨关节炎大鼠模型,通过对骨关节炎大鼠的膝关节宽度、炎性因子的水平、膝关节的Micro-CT、膝关节的HE染色与免疫组化的结果分析,探讨CXB-NC@DMNs对骨关节大鼠的治疗效果;通过药代动力学实验,研究不同给药方式的大鼠的血液中药物的浓度。结果经过处方筛选确定反溶剂沉淀法制备CXB-NCs,最终制备得TGF-beta/Smad抑制剂到的CXB-NCs通过透射电镜结果显示为棒状结构;通过马尔文粒径emerging Alzheimer’s disease pathology仪测定的粒径为70.2±2.6 nm,多分散性系数(PDI)为0.163±0.062,粒径均一,且制备纳米晶的处方稳定;通过傅里叶红外光谱图可知,将CXB制备成CXB-NCs,CXB的化学结构不会发生改变;通过X射线衍射与差示热的结果可知,将CXB制备成CXB-NCs后,晶型结构不变,晶型变小;通过体外溶出实验可知,与CXB相比,CXB-NCs的溶出率显著增加,说明将CXB制备为纳米晶后,通过减小粒径能够增加其溶出率;通过细胞毒性实验,经CXB-NCs处理的正常的软骨细胞,细胞生存率在90%以上,说明CXB-NCs的生物相容性好。通过两步制针法制备CXB-NC@DMNs,以HA为针部溶液的辅料,以PVP K90为可溶微针基层辅料;通过光学显微镜观察,所制备的可溶微针针形完整;通过将CXB-NC@DMNs复溶并通过透射电镜观察复溶后CXB-NCs的状态,结果显示CXB-NCs仍然是棒状结构,说明将CXB-NCs包载于微针中不会改变其形态;通过对CXB-NC@DMNs的评价,机械性能较好并能很好的插入皮肤,在大鼠体内15 min,微针针部基本完全溶解;体外细胞毒性实验结果显示,微针辅料对正常细胞无毒性,生物相容性好;通过体外释放实验,表明CXB-NC@DMNs可以安全有效的递送药物,为骨关节炎大鼠的治疗提供了基础。ACLT骨关节炎大鼠实验结果表明,VX-661细胞培养CXB-NC@DMNs可以显著减少膝关节宽度,减轻炎症反应,抑制滑膜增生,逆转软骨组织的破坏,对骨关节炎大鼠的治疗有很好的效果。药代动力学结果显示,将CXB制备成纳米晶后,CXB-NCs的AUC_(0-t)是CXB原料药的三倍,说明纳米晶能够显著提高CXB的生物利用度。将CXB-NCs包载于DMNs中,CXB-NC@DMNs组的C_(max)为81.3±51.6 ng/m L,AUC_(0-t)为1035.5±677.2 h·ng/m L。表明,DMNs可以经皮肤将药物递送进入全身血液循环,且具有延迟药物释放的作用。此外,体内药效最好的CXB-NC@DMNs组的血药浓度显著低于两倍药量的纳米晶组,说明可溶微针组并非通过直接提高血药浓度来增加药物治疗效果,由此推测,可溶微针递药系统还可能通过其他途径增加病灶部位的药物浓度,增加治疗效果。

西瓜是一种重要的园艺植物，近年来饱受病毒病危害。为明确西瓜病毒病害病原，对采自山西太谷区表现花叶、皱缩等症状的西瓜叶片进行小RNA深度测序，同时利用RT-PCR的方法并结合生物信息学的手段，综合分析造成西瓜花叶、皱缩症状的病毒病原。结果表明，表现皱缩、花叶症状的西瓜样品被瓜类蚜传黄化病毒（cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV）、甜瓜潜隐病毒（cucumis melo cryptic virus,CmCV）、西瓜病毒A(watermelon virus A,WVA)、西瓜皱叶病毒2号（watermelon crinkle leaf-associated virus2,WCLaV2）和黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）5种病毒复合侵染。利用RT-PCR的方法分别扩增获得5种病毒的外壳蛋白（coat protein, cp）基因序列，进一步通过序列相似性分析和系统进化分析发现，本研究获得的西瓜CABYV分离物CABYV-SXJZ(GeneBank登录号：OP957280)核苷酸序列与中国南瓜CABYV分离物InnerMongolia(GeneBIACS-10759抑制剂ank登录号：EU262627)的核苷酸序列相似性最高，达到100%；西瓜WVA分离物WVA-SXJZ(GeneBank登录号：OP957281)核苷酸序列与同样来自中国瓠瓜WVA分离物WVA-Huizhou(GeneBank登录号：MK292710)和西瓜WVA分离物WVA-KF15(GeneBank登录号：KY363796)核苷酸序列相似性最高，分FG-4592浓度别达到93.6%%和99.9%;WCLaV2分离物WCLaV2-SXJZ(GeneBank登录号：OP957282)核苷酸序列与WCLaV2巴西西瓜分离物Ju-01(GeneBank登录号：LC636075)核苷酸序列相似性性最高，达到99.6%；本研究首次从西瓜上获得的CmCV分离物CmCV-SXJZ(GeneBank登录号：OP957283)核苷酸序列与中国甜瓜分离物CmCV-HLJ(GeneBank登录号：MH479773)的核苷酸相似性高达99.9%；本研究获得的CGMMV分离物CGMMV-SXJZ(GeneBank登录号：OP957284)核苷酸序列与CGMMV分离物GDLZ(GeneBank登录号：MK933286)、CG038(GeneBank登录号：MH271443)、CGMMV-pXT1(GeneBank登录号：KY753929)、e WT(GeneBank登录号：KY753928)、C284R(GeneBank登录号：KY753927)、CGMMV-XG(GeneBank登录号：KP868654)、JD2(GeneBank登录号：KM873785)和Anhui(GeneBank登录号：KTprotamine nanomedicine236095)核苷酸序列相似性最高，均达到99.8%。

目的 观察丹皮酚是否能够影响巨噬细胞M1极化。方法 用Toll样受体7/8激动药雷西莫特(R848)刺激RAW264.7细胞建立M1型巨噬细胞模型。将细胞分为对照组、模型组、高剂量实验组。对照组细胞正常培养；模型组用2μg·mL~(-1)的R848处理24 h,高剂量实验组用2μg·mL~(-1)R848和30μmol·L~Recipient-derived Immune Effector Cells(-1)丹皮酚处理24 h。以酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌水平；以流式细胞术检测CD80阳性表达的巨噬细胞比例；以实时荧光定量多聚核苷酸链反应(Q-PCR)检测TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达水平；以蛋白质印迹法检测iNOS蛋白表达情况。结果 高剂量丹皮酚干预R848诱导的M1极化24 h后，对照组、模型组和高剂量实验组上清中TNF-α水平分别为(355.55±16.45)、(552.69±18.09)和(447.71±22.71)ng·L~(-1);CD80阳性细胞比例分别为(16.29±0.50)%、(43.57±3.78)%和(36.08±1.40)%;IL-1β mRNA表达水平分别为1.04±0.15、60.02±12.92和34.69±1.75;TNF-α mRNA表达水平分别为1.00±0.04、13.69±0.25和12.20±0.46;iNOS蛋白表达水平分别为1.00±0.00、1.11±0.05和0.91±0.0Decitabine供应商3。模型组上述指标与对照组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量实验组上述指标与模型组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 丹皮更多酚能够抑制R848诱导的巨噬细胞M1极化。

研究背景及目的骨折固定及假体植入已广泛应用于骨科植入物手术中,但因其无法抵抗微生物感染,而导致植入物相关感染的发生。我军海外基地、舰艇编队在执行远海作战任务时,大多数外伤伤部集中在四肢骨盆,伤员后送难度大,精确手术开展非常困难,由于远海作战伤员得不到及时有效的救治、后送困难,致残致死率高,严重影响作战和演训任务的顺利进行,并给伤员的伤后生活带来巨大的痛苦。对于四肢骨盆骨折,一期以外支架螺钉临时稳定骨折后修复软组织、二期更换髓内钉或锁定钢板的分Vorinostat浓度期治疗策略已被人们广泛接受。但外固定螺钉钉道感染和螺钉松动对二次手术转换时机以及外支架治疗的时限有很大影响。加上前线医疗条件差、设备简陋,战场恶劣环境也导致伤口极其易受感染。与骨科植入物相关的感染引起的过度炎症反应、进行性骨溶解和持续的细菌负荷,抑制了感染时的骨愈合。传统全身输注抗菌药物抗感染治疗可导致耐药性且副作用大,同时并不能抑制骨吸收和调节巨噬细胞炎症反应。为了改善细菌感染时的骨愈合,理想的治疗方法不仅要在局部清除细菌,还要促进骨修复、抑制炎症和骨溶解。因此,研制出一种具有抗感染、促进骨修复并抑制骨溶解和炎症的多功能生物材料,对骨科临床及我军一线战伤抗感染救治有重要的意义。近些年,通过对骨科植入物表面纳米结构改性或应用纳米载体来运送抗菌药物到给感染部位来增强局部抗菌效果越来越引起各国学者的关注。介孔二氧化硅纳米颗粒因其可控的孔径、高表面积、可调节的表面功能化、优良的化学稳定性和孔隙性质,成为生物医学等多领域的研究热点。本研究的目的是通过共价固定骨形态发生蛋白4的介孔二氧化硅纳米颗粒并负载依诺沙星来制备一种多功能纳米载药颗粒,具有良好的生物相容性和缓释药物的功能,用于局部抗菌、抑制炎症和骨溶解。同时,通过体内、外实验验证骨形态发生蛋白4/依诺沙星修饰介孔二氧化硅纳米颗粒的抗菌性能、抑制炎症和骨溶解能力。研究方法利用ABT-199溶胶-凝胶法制备介孔二氧化硅纳米颗粒(MSNs),并在氨化的介孔二氧化硅纳米颗粒表面共价接枝骨形态发生蛋白4(BMP4)以及在介孔二氧化硅纳米颗粒孔隙中负载依诺沙星(EN)。随后应用扫描电子显微镜(SEM)以及透射电子显微镜(TEM)观察涂层表面结构。所有样品通过超声分散在无水乙醇中后,使用纳米粒度分析仪测量纳米颗粒的分散性。通过药物释放实验研究介孔二氧化硅/骨形态发生蛋白4/依诺沙星纳米颗粒(MSNs-BMP4-EN)药物释放能力。通过体外抑菌实验测定MSNs-BMP4-EN纳米颗粒最低抑菌浓度(MIC)并记录其对金黄色葡萄球菌的生长曲线,并利用细菌活性实验、细菌涂板定量实验和活/死细菌染色实验来评估MSNs-BMP4-EN的体外抗菌性能。通过体外细胞毒性实验(CCK-8法)来探究纳米颗粒对大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs)增殖的影响。通过碱性磷酸酶(ALP)染色及定量实验、胶原染色及定量实验、茜素红(ARS)染色及定量实验以及大鼠的成骨分化标志物基因RNA定量分析、蛋白质印迹分析,研究MSNs-BMP4-EN对r BMSCs成骨分化的影响。利用抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色、破骨相关标志物基因RNdrug-resistant tuberculosis infectionA定量分析和骨吸收实验,评估MSNs-BMP4-EN对破骨分化的影响。利用Sanger测序、酶联免疫吸附试验(ELISA)炎症相关标志物基因RNA定量分析,评估MSNs-BMP4-EN对感染状态下局部炎症免疫的影响。通过构建大鼠股骨骨缺损模型,进行体内抗感染实验及体内成骨实验,利用micro-CT分析、微生物学分析、组织切片和Van Gieson染色等多种实验方法评估MSNs-BMP4-EN在体内的抗感染、成骨能力。研究结果利用SEM和TEM对纳米颗粒进行了分析,证实了成功合成了所需的MSNsBMP4-EN纳米复合材料,其呈粒径约50 nm的均匀球形、表面有许多均匀分布的孔洞。粒径分析仪显示三种纳米粒子在无水乙醇中分别形成直径分别为210.7 nm、220.7 nm和187.4 nm的粒子团。依诺沙星在吸光度286nm处有一个特征峰,浓度与吸光度呈良好的线性关系。其包封率和载药量分别为43.25%和30.10%。药物释放实验显示MSNs-BMP4-EN纳米颗粒具有较高的药物释放率,在12小时内爆发释放依诺沙星后可持续缓释5天。在第5天时依诺沙星的累积释放率为67.4%。体外抑菌实验证实,MSNs-BMP4-EN可显著抑制金黄色葡萄球菌的黏附和增殖。体外细胞毒性实验和成骨分化相关实验表明,MSNs-BMP4-EN可促进r BMSCs增殖及早期、晚期成骨分化。体外破骨分化相关实验表明,MSNs-BMP4-EN可阻止早期破骨细胞的形成、抑制骨溶解。体外炎症相关实验表明,MSNs-BMP4-EN可抑制小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)分泌炎症因子,从而改变免疫微环境,有利于成骨分化和细胞外基质矿化。动物体内实验表明,MSNs-BMP4-EN可有效抑制金黄色葡萄球菌感染并抑制感染时的巨噬细胞炎症反应和细菌导致的骨溶解,最终促进骨感染条件下的骨愈合。研究结论MSNs-BMP4-EN纳米复合材料具有制备方法简单、成本低、高载药量、较久的缓释性能及良好的生物相容性等优点。这些实验表明MSNs-BMP4-EN具有优良的抗菌和抗炎特性,并能在植入物感染的早期阶段抑制骨吸收,从而进一步促进骨愈合。因此,这种具有多种生物功能的纳米复合材料在治疗骨感染方面具有良好的临床应用前景,未来有望转化为临床骨科植入物涂层或手术部位植入药物,并对我军一线战伤抗感染救治有重要的意义。

化学动力学疗法(CDT)利用肿瘤细胞内源性H_2O_2与芬顿催化剂反应生成高毒性的羟基自由基(·OH),从而杀死肿瘤细胞,但内源性H_2O_2不足和纳米粒子转运效率较低导致抗癌效果不理想。本研ABT-199小鼠究制备了一种分散性良好、尺寸较小的铜掺杂介孔二氧化硅(Cu-MSN),负载化疗药物阿霉素(DOX)和抗坏血酸盐(AA)后,表面经叶酸(FA)和二甲基马来酸酐(DMMA)改性的壳聚糖(FA-CS-DMMA)以及羧甲基壳聚糖(CMC)包裹,得到pH响应型靶向纳米催化剂FA-CS-DMMA/CMC@Cu-MSN@DOX/AA(缩写为FCimmune cytolytic activityDC@Cu-MSN@DA)NSC 127716。扫描电镜显示纳米粒子FCDC@Cu-MSN@DA粒径约为100nm。体外48h内Cu~(2+)释放量可达80%,药物DOX释放达到57.3%。释放的AA经自氧化后产生H_2O_2,诱导Cu~(2+)发生类芬顿反应,从而增强CDT。细胞实验证明, FCDC@Cu-MSN@DA联合化疗药物表现出优异的抗肿瘤活性,说明该多功能纳米催化剂在癌症治疗中具有潜在应用前景。

研究背景与目的:胰腺激肽酶是一种具有改善微循环作用的血管扩张剂,目前主要用于糖尿病引起的早期肾病。胰激肽原酶肠溶片生物利用度低,为提高其生物利用度,本课题在胰激肽原酶中SAHA作用加入了促渗透剂SNAC,对SNAC的合成工艺进行了研究,并利用Caco-2细胞模型对SNAC促胰激肽原酶的吸收效果进行了评价,确定SNAC与胰激肽原酶的较佳比例,并将SANC与胰激肽原酶混合制备成肠溶胶囊,进行胰激肽原酶在大鼠体内的药代动力学考察,为二类新药的开发奠定基础。方法:通过对SNAC合成的相关专利及文献资料研究,明确了合成SNAC的起始原料,并从安全、经济、绿色等角度出发,考察了相关反应步骤的反应溶剂、辅料用量、反应温度、反应时间以及后处理等,并从产品收率、生产成本、工业化可行性等方面综合考虑优选SNAC合成工艺。利用Caco-2细胞模型对SNAC促胰激肽原酶的吸收效果进行研究。首先利用CCK-8法,进行SNAC和胰激肽原酶对Caco-2细胞的短期毒性的测定;将Caco-2细胞接种到Transwell小室上,进行为期21 d的模型建立,同步进行Caco-2细胞形态学观察、Caco-2细胞单层跨膜电阻、碱性磷酸酶活性、苯酚红通透性等细胞模型评价;模型建立成功后,在Transwell小室上进行SNAC对胰激肽原酶的转运考察,进行了5个比例、为期2 h的考察;最后将每个时间点的转运液利用胰激肽原酶ELISA试剂盒进行胰激肽原酶含量的测定。根据胰激肽原酶肠溶片成人日用量,换算成大鼠一次胰激肽原酶的剂量。利用玛瑙研钵将含SANC的胰激肽原酶和不含SANC的胰激肽原酶进行研磨,测定胰激肽原酶的均一性后,根据效价进行每粒胶囊的装填,然后进行肠溶包衣。利用ELISA试剂盒进行了胰激肽原酶在大鼠空白血浆中的方法学考察;最后进行含SANC与不含SNAC胰激肽原酶肠溶胶囊在大鼠体内的药代动力学研究。结果:1.查阅相关专利和文献,并进行工艺探索,SNAC的合成路线为:首先合成1,3-苯并噁嗪-2,4(3HBelumosudil小鼠)-二酮,即中间体1,以水杨酰胺为原料,以1.2个当量的CDI为缩合剂,THF为反应溶剂,该步反应产物收率达93.5%;其次,合成中间体2,以三乙胺为碱,8-溴辛酸乙酯先加1.1 eq,随着反应再加入0.1 eq,反应体系在55-65℃下,反应时间6-10 h,得到固体后,再用甲叔醚?正庚烷=1?5进行打浆纯化,产物收率在94.9%,降低了生产成本;然后,合成中间体8-(2-羟基苯甲酰氨基)辛酸,以氢氧化钠为开环试剂,反应体系在90-95℃下,反应3-4 h,反应效果较好,产物收率为94.0%;最后,合成SNAC,一步成盐反应,将中间体8-(2-羟基苯甲酰氨基)辛酸用异丙醇溶解,加入4倍水溶解的氢氧化钠,降温析晶,过滤时用异丙醇淋洗,60℃干燥14-20 h,得到最终产物SNAC,收率可达90.8%。2.利用CCK-8法进行Caco-2细胞短期毒性试验,SNAC和胰激肽原酶对Caco-2细胞活性较好的浓度分别不高于1000μg/m L和1200μg/m L。用倒置显微镜观察Caco-2细胞在Transwell上的细胞形态,发现其铺满后多成铺路石状,呈现很好地连接状态;随着培养天数增加,Caco-2细胞单层跨膜电阻TEER值逐渐增加,待第21 d时,TEER值升至976.5Ω*cm~2;随着细胞培养的时间天数的持续增加,细胞在AP侧中与其在BL侧细胞中的碱性磷酸酶酶活力比值出现显著性的加大,这一个结果证明出了APK在其AP侧表达,并因此也证明出现了极化情况,待21d时,AP/BP大于3时,说明Caco-2细胞极化及分化完成;利用苯酚红试验测定21 d时Caco-2细胞的通透性,其表观渗透系数Papp值为7.06×10~(-8)cm/s,小于标准值1×10~(-6)cm/s,进一步地确认了Caco-2细胞的完整性。成功建立Caco-2细胞模型后,进行了胰激酶的SNAC转运实验,加入SNAC?胰激肽原酶=32?1、16?1、8?1、4?1、2?1的实验组中,胰激肽原酶的累积透过量显著高于无SNAC的对照组,加入SNAC的胰激肽原酶累积透过率分别为13.574%、7.597%、10.653%、3.755%、2.523%,且使胰激肽原酶累积透过量分别提高了14.50%、9.50%、26.8%、5.27%、3.9%,累积透过率最高的是SNAC?胰激肽原酶=32?1,且提高的累积透过量也较高。3.根据成人胰激肽原酶肠溶片日用量换算成大鼠为15 U/只;测定胰激肽原酶混合粉末均一性,不含SNAC和含SNAC的胰激肽原酶效价均值分别为1.58、0.87U/mg,RSD分别为5.31%、3.04%,均小于10%。胰激肽原酶在大鼠空白血浆的中专属性考察:胰激肽原酶标准液与含标准品血浆的OD值接近,空白血浆与空白孔对照的OD值接近,表明空白血浆和空白孔均对胰激肽原酶的测定没有干扰;胰激肽原酶检测的质量浓度线性范围为75～1200 ng/L;回收率考察1000、500、100 ng/L的含标准品血浆的中的RSD分别为0.561%、0.813%、2.354%(n=3),且均小于5%,符合试验要求;连续测定3 d,精密度考察1000、500、100 ng/L的含标准品血浆的批内RSD分别为5.01%、3.04%、3.77%(n=3),批间RSD分别为4.39%、3.47%、4.19%(n=9),RSD结果均小于10%,符合试验要求;测1、3、7 d胰激肽原酶-20℃下保存,4℃冰箱缓慢融解的RSD分别为3.14%、7.36%、8.24%(n=9),均小于10%,证明胰激肽原酶在此条件下的稳定性较好。大鼠体内的药代动力学研究结果表明,含SANC胰激肽原酶肠溶胶囊中的胰激肽原酶在大鼠体内的药代动力学AUC_Medical incident reporting(0-12 h)为5679.747 ng/L*h、t_(1/2)为4.569 h;不含SANC胰激肽原酶肠溶胶囊中的胰激肽原酶在大鼠体内的药代动力学AUC_(0-12 h)为4639.665 ng/L*h、t_(1/2)为3.13 h;加入SNAC后,AUC提高了22%;C_(max)也高于不含SANC的胰激肽原酶肠溶胶囊组。结论:研究确定了一条低成本、绿色安全、适合工业化生产的SNAC合成路线,证实了SNAC对胰激肽原酶的促吸收效果,明确SNAC与胰激肽原酶较佳的比例为32?1,为今后开发胰激肽原酶新型口服二类新药打下基础。

减毒沙门氏菌VNP20009是一种应用范围较广的天然来源溶瘤细菌,基于其已证实的临床安全性、可特异性趋化靶向肿瘤和明确已知的基因组序列等优点而被广泛用于抗肿瘤biocultural diversity研究。本研究建立黑色素瘤小鼠模型(所有动物实验均遵循中国药科大学动物伦理委员会的规定),通过腹腔注射VNP20009对其抗肿瘤活性进行验证,与对照组相比,VNP20009治疗可显著抑制肿瘤生长;体外共培养实验证明VNP20009能够诱导巨噬细胞向M1表型极化并表达相确认细节关炎症因子;通过流式细胞实验分析肿瘤和肿瘤引流淋巴结(tumor-draining lymph node,TDLN)内免疫变化,证明VNP2000NSC 119875作用9治疗诱导肿瘤组织免疫细胞增加,进一步分析发现肿瘤引流淋巴结内T细胞浸润增加,而VNP20009治疗能够诱导肿瘤内部的CD4~+T和CD8~+T细胞活化。本研究结果证明,VNP20009可通过诱导巨噬细胞向M1表型极化,招募并激活细胞毒性T细胞,协同其自身组分,共同抑制小鼠体内黑色素瘤的生长。

目的环境PM2.5对公众健康的影响已成为全世界关注的主要问题。许多研究表明,即使在非常低的水平下,PM2.5仍然对公众健康构成威胁。二次颗粒物是由一次颗粒物与空气和环境中的其他成分之间通过物理或化学反应产生的,二次颗粒物的特性会发生变化。1,4-萘醌吸附的黑炭(1,4 NQ-BC)是PM2.Navitoclax体内实验剂量5的重要组分,也是一种典型的二次颗粒物。巨噬细胞外捕网(METs)是巨噬细胞捕获和摧毁入侵病原体的手段,从而行使先天性免疫功能。程序性坏死是一种程序性细胞死亡方式,伴随着细胞膜完整性的破坏和细胞内容物的释放,从而诱发炎症反应。值得注意的是,IL33是一种重要的炎性因子。然而,目前还没有关于1,4 NQ-Bupper respiratory infectionC暴露后程序性坏死和METs之间的串扰机制的研究,也没有关于1,4 NQ-BC是如何调控IL33生成机制的研究。材料和方法在我们的研究中,我们选择RAW264.7细胞作为研究对象。采用了CCK8、AO/EB染色、SYTOX Green染色、荧光探针、qPCR、免疫荧光、蛋白免疫印迹和蛋白质组学等实验方法。结果及结论我们的实验发现,在正常生理条件下,当巨噬细胞接受外部刺激(如病原体等,在本实验中使用的是PMA)时,它们会形成METs,捕获并杀死病原体,从而行使先天性免疫功能。然而,暴露于1,4 NQ-BC可导致巨噬细胞发生程序性坏死,并伴随着ROS和胞浆钙离子水平的增加,以及炎症因子和趋化因子的表达紊乱,并阻止METs的形成,导致巨噬细胞失去部分捕获和杀死病原体的功能,从而削弱先天性免疫功能。值得注意的是,程序性坏死的抑制恢复了METs的形成,表明程selleckchem Imidazole ketone erastin序性坏死抑制了METs的形成。本研究首次探讨了程序性坏死和METs之间的串扰机制。此外,1,4 NQ-BC可以通过铁蛋白轻链(FTL)上调IL33的表达水平。