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目的：探究血府逐瘀汤下调窖蛋白-1(Caveolin-1)抑制自噬改善大鼠脑出血（ICH）损伤的效应及机制。方法：将60只大鼠按随机数字表法分为空白组、假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组10只。采用自体股动脉血注入脑尾状核建立ICH大鼠模型。各给药组大鼠分别灌胃给予相应药物，空白组、模LGK-974使用方法型组、假手术组大鼠灌胃等体Medical disorder积生理盐水，1次/d，连续给药3周。观察各组大鼠状态，并行神经功能缺损评分。采集各组大鼠脑组织，HE染色观察脑组织结构的改变情况，免疫组织化学法检测LC3Ⅱ阳性表达，qPCR法检测Caveolin-1 mRNA相对表达量；Western blotting检测Caveolin-1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Caspase-3、Bcl-2/Bax、Beclin-1蛋白表达情况。结果：假手术组大鼠上述指标与空白组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；与空白组比较，模型组大鼠神经功能缺损评分明显降低（P<0.05），脑组织血肿区域明显，神经元胞浆减少，核固缩，脑组织中Caveolin-1、Caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及Caveolin-1 mRNA相对表达量均明显升高（P<0.05）,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl-2/Bax均明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低、中、高剂量组大鼠神经功能缺损评分均明显SB431542升高（P<0.05），脑组织血肿区域缩小、坏死神经元数目减少，脑组织中Caveolin-1、Caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及Caveolin-1 mRNA相对表达量均明显降低（P<0.05）,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl-2/Bax均明显升高（P<0.05）；中、高剂量组上述指标均优于低剂量组（P<0.05）。结论：血府逐瘀汤可下调Caveolin-1激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬，保护神经元而改善大鼠ICH损伤。

目的 探讨糖尿病（DM）患者并发视网膜病变（DR）的相关危险因素。方法 选择收治的糖尿病患者95例，评估患者DR发生情况，根据结果分为发生组与未发生组，设计基线资料调查表，详细统计两组基线资料并比较，重点分析糖尿病患者并发DR的危险因素。结果 经评估95例糖尿病患者中发生DR peptidoglycan biosynthesis39例，占41.05%；发生组与未发生组患者的糖尿病病程、胰岛素治疗史及糖化血红蛋白（HbA确认细节1c）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、胱抑素C(Cys-C)水平比较，差异有统计学意义（P<0.05），组间其他资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）；回归分析结果显示，糖尿病病程长、胰岛素治疗史及HbA1c、TNF-α、胱抑素C(Cyselleckchem GSK2118436s-C)水平高均是糖尿病患者并发DR的危险因素（OR<1,P<0.05）。结论 糖尿病患者并发DR的危险因素可能是胰岛素治疗史、糖尿病病程长及HbA1c和TNF-α水平高。

微生物来源的天然产物是一类具有多种生物活性的次级代谢产物,目前已成为药物及化学品的重要来源。微生物中负责生产调控天然产物的基因通常被压缩成几十到几百kb不等的大片段DNA,即这些基因组成几十到几百kb不等的生物合成基因簇(Biosynthetic gene clusters,BGC)。挖掘新颖结构的天然产物常见的一种策略便是准确高效克隆这些大型BGCs,进而实现其表达。常规的DNA克隆基于PCR分级扩增目的基因,随后利用DNA组装技术按照顺序组装。这类方法存在操作复杂、周期较长、效率低下、突变率高等问题。因此,亟需开发一款高效、准确、简易的大片段DNA克隆方法。CRISPR/Cas9系统仅需要Cas9核酸酶和工程sgRNA便可以高特异性靶向目的DNA。由于其高特异性和可编程性被广泛应用于基因编辑、细胞成像、医学治疗等各个领域。本研究以CRISPR/Cas9的高BI 10773小鼠特异性靶向切割能力为基础开发大片段DNA克隆技术,从而规避传统方法酶切位点限制问题。首先通过gRNA在线设计软件筛选高效率编辑靶点,缓解了部分位点靶向切割效率低下的问题,降低了脱靶效应,节省了筛选高切割效率靶点的时间;其次,本研究采用CRISPR/Cas9系统直接切割基因组DNA,从基因组中直接获取目BIOPEP-UWM database的DNA片段,从而避免PCR扩增限制以及突变等问题。利用酶解法处理细胞壁,并结合酚氯仿法抽提基因组DNA,该方法操作简单,获取的基因组完整度高,利于后续切割克隆及组装。本研究在大肠杆菌中采取了蓝白斑法进行克隆筛选并计算阳性率,通过设计双gRNA靶向切割分离基因组,然后利用NEBuilder一步式多片段无缝克隆方法进行质粒组装。我们首先选择一段15 kb含LacZ基因的DNA片段为目标,对CRISPR/Cas9介导的大片段DNA克隆涉及到的酶切体系、连接体系、同源臂长度等条件进行优化。结果表明,当体系中Cas9:gRNA:genome摩尔比例在5000:5000:1～10000:10000:1之间,且插入片段与载体DNA摩尔浓度为1:1时,克隆效率最高,接近100%。随后利用本方法逐次应用于30～100kb不同大小的DNA片段克隆:对50 kb以下大片段DNA克隆效率近100%,但当克隆DNA大于50 kb时,克隆效率迅速下降。尽管随着克隆DNA长度增加,克隆效率下降,但对77 kbIpatasertib分子量的大片段DNA克隆仍有46%的效率。链霉菌是微生物天然产物的重要来源,因此本研究也将该方法成功应用于天蓝色链霉菌,并以93%的阳性率成功克隆了40 kb天蓝色链霉菌基因组大片段。本研究基于CRISPR/Cas9系统,设计了体外靶向识别并切割基因组DNA体系,结合NEBuilder无缝克隆技术连接大片段DNA和载体,实现了快速高效地构建大分子重组质粒。本方法较其他大片段DNA克隆技术具有简便、可操作性高、效率高、周期短等特点。

目的 分析果胶泌在胃癌前病变患者治疗中的疗效，及其可能的作用机制。方法 选取2017年2月至2020年1月我院收治的胃癌前病变患者200例为研究对象，随机分为对照组和观察组，每组100例。两组患者均指导其建立健康的生活饮食习惯，并进行心理干预。对照组患者予以常规西医治疗，观察组患者在常规治疗基础上再予以果胶泌治疗。两组患者均连续治疗观察1个月为一疗程。对两组患者治疗前后采集血清检测胃泌素17、胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)和PGⅡ,辅助型T细胞1(Th1)/辅助型T细胞2(Th2)免疫细胞因子：白介素细胞-2(IL-2)、白介素细胞-4(IL-4)、白介素细胞-6(IL-6),并行组间比较。治疗一疗程后，对两组患者临床疗效进行评估，并行组间比较，收集两组患者治疗期间药物不良反应并比较。结果 (1)两组患者治疗前入组时胃泌素17、PGⅠ、PGⅡ组间比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗一疗程后Adavosertib细胞培养，两组患者上述指标均较治疗前下降，且观察组患者低于对照组患者(P<0.05);(2)两组患者入组时INF-γ、IL-2、IL-4、IL-6组间差异无统计学意义(P>0.05),治native immune response疗一疗程后，两组患者INF-γ较治疗前明显上升，且观察组高于对照组，IL-4、IL-6较治疗前明显下降，且观察组低于对照组(P<0.05);(3)观察组患者治疗一疗程后的临床总有效率高于对照组患者(P<0.05);(4)两组患者治疗期间未收到严重不良反应，一般不良反应率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 果胶泌联合常规治疗胃癌前病变患者可有效提升治疗疗效，其可能机制为改善了患者胃泌素及胃蛋白酶原、Th1/Th2平衡系统，且不增加患者药物不良IACS-10759反应，果胶泌联合西药是一种胃癌前病变较为有前途的治疗方案。

目的 基于网络药理学并结合大Gefitinib-based PROTAC 3化学结构鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(rat pheochromocytoma cell, PC12)分析地黄抗阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的主要活性成分及作用机制。方法 查阅文献收集地黄的化学成分，经TCMSP筛选其主要活性成分，并构建“地黄-活性成分-潜在靶点”相互作用网络图和PPI图，通过DAVID数据库进行GO生物学过程富集和KEGG代谢通路富集分析，最后采用MTT法验neonatal infection证活性成分对PC12细胞的保护作用。结果 网络药理学分析预测出地黄主要活性成分15个，作用于AD的CP-456773小鼠相关靶点343个，涉及MAPK信号通路、代谢通路、胰岛素信号通路、PI3K-Akt信号通路等。PC12细胞实验结果表明，通过网络药理学筛选得到的地黄9个活性成分均能不同程度提高PC12细胞的存活率，其中胡萝卜苷、木犀草素、京尼平1-β-D龙胆双糖苷、芹菜素、蔗糖、棉子糖处理的PC12细胞存活率更高(P<0.05)。结论 地黄对AD的作用呈多成分、多靶点、多通路的调节机制，为地黄用于AD的干预和治疗提供参考。

目的:探讨血清微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在不同程度急性胰腺炎(AP)中的表达及意义。方法:选取AP患者135为病例组，根据病情严重程度又分为轻症急性胰腺炎(MAP)组、中度重症急性胰腺炎(MSAP)组以及重症急性胰腺炎(SAP)组三个亚组，每组45例。选取同期体检健康者135例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)对血清LC3-Ⅱ、CLGX818aspase-3、HMGB1表达水平进行测定。采用急性生理学和慢性健康状况评估Ⅱ(APACHEⅡ)对病例组患者进行评估。比较病例组与对照组血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平。比较不同程度AP患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分。采用Spearman法分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP的预测价值。结果:与对照组相比，病例组患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平明显升高(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱselleck化学、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分在不同程度AP患者中由高到低依次为SAP组、MSTimed Up and GoAP组、MAP组，各组间比较差异有统计学意义(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.704、0.642、0.723,均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP具有良好的预测价值。结论:血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1水平在AP患者中升高，且与病情严重程度呈正相关，对AP具有良好的预测价值。

恶性肿瘤长久以来威胁着人类的健康，传统中药通关藤的茎和根以及其他部位已被广泛用于治疗恶性肿瘤、哮喘病、风湿病和气管炎等。近年越来越多的研究聚焦于通关藤的selleck激酶抑制剂抗肿瘤作用，由通关藤的提取物制成的消癌平制剂在临床上广泛用于治疗肝癌、肺癌、食道癌和胃癌等。至今为止，已从通关藤的各个部位提取鉴定出包括C21甾体皂苷、甾醇/环醇类、有机酸类、多糖类、三萜类、脂肪酸类、酯类等在内的几百种化学成分。C21甾体皂苷类为通关藤的首要特征和抗肿瘤活性成分。现代药理学研究证明通关藤在体内外均有抗肿瘤活性，主要体现在抗肝癌、肺癌、血液系统肿瘤、食管癌、胃癌、乳腺癌等。通关藤的单方制剂消癌平的常用剂型有片剂、糖浆、注射液、口服液、胶囊等，主要用于治疗肝癌、食道癌、非小细胞肺癌、胃癌、结Drug Screening肠癌、宫颈癌、乳腺癌和白血病等。通关藤及其制剂抗肿瘤作用的主要机制包括直接抗肿瘤作用，具体体现为抑制癌细胞增殖、调节肿瘤细胞血管生成、介导细胞凋亡、促进分化等，还包括对其他抗癌药物的增效减毒作用。主要综述通关藤抗肿瘤作用的主要成Y-27632化学结构分和作用机制的近年研究进展及现状，旨在为通关藤的应用开发以及抗肿瘤药物的研发提供参考。

目的 探究三阴性乳腺癌（TNBC）患者外周血单个核细胞中网状蛋白1C(RTN-1C)表达水平与新辅助化疗疗效的关系。方法 选取154例TNBC患者作为研究对象。收集所有受试者年龄、月经状态、病理类型、T_NM分期、组织学分级和Ki-67表达>30%情况、肿瘤直径。抽取TNBC患者化疗前（T_0）、化疗7 d(T_1)、化疗14 获悉更多d(T_2)和化疗21 d(T_3)的空腹肘正中静脉血，用KPT-330化学结构Ficoll密度梯度离心法分离外周血中单个核细胞，蛋白质免疫印迹法检测单个核细胞中RTN-1C表达水平。受试者工作特征（ROC）曲线评价RTN-1C判断新辅助化疗疗效的效能，Logistic回归分析新辅助化疗疗效的风险因素，构Intra-familial infection建列线图回归模型预测新辅助化疗后病理学完全缓解，一致性指数（C-index）、校准曲线和决策曲线评估模型效能。结果 根据新辅助化疗疗效分为完全缓解组（n=47）和未完全缓解组（n=107）。在T_1和T_3完全缓解组的RTN-1C均低于未完全缓解组（P<0.05）;T_0、T_1和T_2的2组RTN-1C相对表达水平随时间进展均降低（P<0.01）。T_3-RTN-1C判断新辅助化疗后病理学完全缓解的ROC曲线下面积（AUC）高于T_0-RTN-1C、T_1-RTN-1C和T_2-RTN-1C(P<0.01)。Logistic回归分析结果显示T_3-RTN-1C>0.91(OR=12.178,95%CI:4.796～30.924)、N1期或N2期（OR=2.180,95%CI:1.100～4.322）、组织学分级Ⅲ级（OR=3.609,95%CI:1.453～8.969）是新辅助化疗后病理学未完全缓解的独立危险因素（P<0.05）。模型A(N分期、组织学分级和T_3-RTN-1C构建)的拟合曲线和理想曲线重合度较高，模型B（由N分期和组织学分级构建）的拟合曲线和理想曲线重合度较差。模型A、B的Cindex分别为0.866和0.772。当阈值概率大于0.40时，模型A判断新辅助化疗后病理学完全缓解的净收益高于模型B。结论 N分期、组织学分级和T_3-RTN-1C构建的模型对判断新辅助化疗后病理学完全缓解有较高的区分度、精准度和临床应用价值。

目的 通过分析基因表达综合数据库（GEO）中代谢综合征患者外周血单个核细胞（PBMC）的基因数据集（GSE98895和GSE23561），寻找代谢综合征的关键基因。方法 分析GSE98895数据集中代谢综合征患者与健康志愿者PBMC的差异表达基因。对差异表达基因进行基因本体论（GO）富集分析和京都基因与基因组数据库（KEGG）富集分析。构建差异表达基因的蛋白质互作（PPI）网络，筛选出PUN30119体内度值最高的10个基因作为核心基因。通过GSE98895数据集、GSE23561数据集和人类蛋白图谱（HPA）数据库验证核心基因在代谢综合征患者PBMC中的表达，构建基于核心基因的环状RNA(circ RNA)-微小RNA(miRNA)-m RNATaurine小鼠互作网络。结果从GSE98895数据集中共获得155个代谢综合征患者与健康志愿者的差异表达基因，其中表达上调62个、表达下调93个。GO和KEGG富集分析结果显示，差异表达基因主要涉及转录调节、免疫应答、cAMP信号通路、T细胞受体信号通路等。PPI网络中度值最高的10个基因分别为：JUN、IFNG、MMP9、PIK3R1、LCK、NGF、PDGFRB、CD79B、CX3CR1和ABCA1。验证结果显示，代谢综合征患者PBMC中IFNG和LCK的表达均显著高于健康志愿者（P<0.05）。HPA数据库分析结果显mouse bioassay示，IFNG和LCK主要表达于T细胞和自然杀伤（NK）细胞。构建circ RNA-miRNA-m RNA互作网络，与IFNG相关的miRNA有7个、circ RNA有43个；与LCK相关的miRNA有16个、circ RNA有62个。结论 代谢综合征患者PBMC中IFNG和LCK表达显著增加，对基于IFNG和LCK的circ RNAmiRNA-m RNA互作网络进行深入研究，可能有助于发现代谢综合征发生、发展的分子机制和生物标志物。

贻贝是全球范围内具有重要经济价值和生态价值的双壳贝类。贻贝抗菌肽具有极强的分子多样性，也是当前抗菌肽研究的重要对象。防御素是贻贝抗菌肽的重要成员，从厚壳贻贝中鉴定到2种新型防御素，但其分子特性和免疫机制尚不清楚。为此，对厚壳贻贝体内新发现的2种防御素开展研究。序列分析结果表明，2种新型防御素均具有节肢动物防御素结构特征，因而被命名为arthropod like defenshttps://www.selleck.cn/products/azd9291.htmlin (ALDBiolistic-mediated transformation)。利用荧光定量PCR研究了2种防御素在贻贝不同组织及不同发育阶段的表达量差异。进一步分析了2种防御素在3种不同微生物诱导下的表达量时间曲线。利用固相化学合成技术对2种防御素的成熟肽区进行合成AY-22989配制并开展了功能验证。研究结果表明，2种ALD主要表达部位在外套膜和消化腺，且ALD-1具有雄性特异表达特征。此外，ALD-1和ALD-2在贻贝幼虫阶段均未表达；在不同微生物刺激下，2种ALD表现出不同的免疫反应模式，显示出2种防御素具有不同的免疫调节机制。化学合成的2种ALD均具有抑菌活性，其对不同微生物的抑制率在20%～80%之间。上述研究为深入了解贻贝免疫防御的分子机制，以及贻贝抗菌肽的免疫功能和后续的分子资源开发奠定了基础。