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目的:采用网状Meta分析的方法评价布南色林与临床常用6种抗精神病药治疗精神分裂症的效果及安全性。方法:计算机检索中国知网(CNKI)、万方数据库、维普数据库(VIP)、Pub Med和Cochrane Library数据库,检索时间为建库至2022年11月,两位研究人员根据纳入和排除标准独立对检索文献进行筛选。对符合标准的研究进行风险偏倚评价和数据提取,再将提取的数据采用ADDIS进行统计分析。主要结果是有效率、PANSS评分及发生不良反应事件的患者占所有研究者的百分率,次要结果是发生锥体外系反应、泌乳素增加、体重增加(≥7%)的患者人数占总研究人数的百分率。结果:1、在治疗有效率方面,阿立哌唑[OR=2.05,95%CI:(1.21,3.47)]、布南色林[OR=2.45,95%CI:(1.47,4.28)]优于安慰剂,差异均有统计学意义(P均<Galunisertib0.05),而在其他medical autonomy各干预措施之间的两两比较中,差异均不具有统计学意义(P值均>0.05)。一致性分析排序结果为:奥氮平(0.39)>利培酮(0.32)>布南色林(0.18)>阿立哌唑(0.04)>氟哌啶醇(LGK-9740.03)>氯氮平(0.02)>喹硫平(0.01)>安慰剂(0.00)。2、在PANSS评分方面,阿立哌唑[MD=-8.95,95%CI(-14.89,-3.42)]、布南色林[MD=-8.53,95%CI(-13.69,-3.05)]、氯氮平[MD=-11.30,95%CI(-21.02,-1.93)]、利培酮[MD=-8.99,95%CI(-14.05,-3.90)]降低PANSS评分的效果优于安慰剂;阿立哌唑[MD=-7.89,95%CI(-14.37,-1.22)]、布南色林[MD=-7.53,95%CI(-13.17,-0.97)]、氯氮平[MD=-10.27,95%CI(-20.22,-0.13)]、利培酮[MD=-7.95,95%CI(-13.29,-2.34)]降低PANSS评分的效果优于喹硫平,以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。而在其他各干预措施之间的两两比较中,差异均不具有统计学意义(P值均>0.05)。各干预措施成为最佳治疗措施的概率排序为:氯氮平(0.42)>奥氮平(0.24)>利培酮(0.1)>氟哌啶醇(0.09)>阿立哌唑(0.08)>布南色林(0.07)>喹硫平(0.00)=安慰剂(0.00)。3、在不良反应发生率方面,利培酮[OR=2.42,95%CI(1.13,5.76)]高于安慰剂;氯氮平[OR=3.18,95%CI(1.13,9.45)]高于奥氮平;阿立哌唑[OR=0.48,95%CI(0.20,0.98)]低于利培酮;差异有统计学意义(P<0.05)。而在其他各干预措施之间的两两比较中,差异均不具有统计学意义(P值均>0.05)。在不良反应发生率方面,各干预措施成为不良反应发生率最高的干预措施的概率排序为:氯氮平(0.53)>氟哌啶醇(0.31)>利培酮(0.10)>喹硫平(0.04)>奥氮平(0.01)>布南色林(0.00)=阿立哌唑(0.00)=安慰剂(0.00)。4、在泌乳素增高发生率方面,布南色林[OR=8.03,95%CI(1.41,78.07)]、氟哌啶醇[OR=16.11,95%CI(1.81,236.85)]和利培酮[OR=7.37,95%CI(2.00,30.99)]均高于安慰剂,差异均有统计学意义(P均<0.05),而在其他各干预措施之间的两两比较中,差异均不具有统计学意义(P值均>0.05)。各干预措施成为泌乳素增高发生率最高的概率排序为:利培酮(0.63)>氟哌啶醇(0.36)>喹硫平(0.00)=布南色林(0.00)=安慰剂(0.00)。5、在体重增加(≥7%)发生率方面,阿立哌唑[OR=0.06,95%CI(0.00,0.57)]低于氯氮平;阿立哌唑[OR=0.30,95%CI(0.04,0.88)]低于利培酮;差异有统计学意义(P<0.05)。而在其他各干预措施之间的两两比较中,差异均不具有统计学意义(P值均>0.05)。概率排序结果显示,在体重增加(≥7%)发生率方面,各干预措施导致体重增加(≥7%)的概率由高到低排序为:氯氮平(0.39)>喹硫平(0.36)>奥氮平(0.20)>布南色林(0.00)=阿立哌唑(0.00)=安慰剂(0.00)。结论:在治疗精神分裂症的效果方面,奥氮平可能优于布南色林、氟哌啶醇、利培酮、氯氮平、喹硫平、阿立哌唑;在降低精神分裂症PANSS评分方面,氯氮平效果最佳。在安全性方面,阿立哌唑、布南色林效果最佳。

目的:通过观察导师丁世霖副教授经验方柴胡胜湿汤加减治疗湿热蕴结型精浊(慢性前列腺炎)的临床疗效,为柴胡胜湿汤加减治疗湿热蕴结型精浊的疗效及安全性提供临床证据,为治疗慢性前列腺炎提供理论依据。研究方法:根据研究方案,收集2021年12月—2022年12月前来云南省中医医院男科、泌尿外科就诊的且符合本次临床研究纳入标准的72例患者,随机分为治疗组、对照组。治疗组予以柴胡胜湿汤加减联合盐酸坦索罗辛缓释胶囊治疗,对照组予以前列解毒胶囊联合盐酸坦索罗辛缓释胶囊治疗。分别记录治疗前、治疗后患者的中医证候评分、NIH-CPSI评分、前列腺Laboratory biomarkers检查评分、及患者抑郁程度评分(PHQ-9),对以上数据进行统计学处理与分析。研究结果:本课题研究共完成72例入组,治疗组1例未按时复诊,1例因外出工作原因不愿意继续进行临床试验而选择退出,有效病例34例;对照组1例因疗效不满意而擅自联合服用对本研究影响较大的药物剔除,1例因服药依从性差剔除,有效病例34例。(1)治疗结束后,两组西医疗效比较,治疗组、对照组总有效率分别为88.24%、79.41%。治疗组疗效优于对照组,P<0.05。(2)治疗结束后,两组中医疗效比较,治疗组、对照组总有效率分别为91.18%、82.35%。治疗组疗效优于对照组,P<0.05。(3)GSK1349572体内实验剂量治疗结束后,治疗组NIH-CPSI总评分明显低于对照组,P<0.05,主要表现在排尿症状评分、生活质量评分;两组疼痛症状评分无统计学差异,P>0.05;将以上行组内比较,疗程结束时,两组NIH-CPSI总分各项评分较治疗前均明显下降,P<0.01。(4)疗程结束,治疗组中医证候总评分低于对照组,P<0.01,治疗组中医主证各单项症状评分及阴囊潮湿、尿后滴沥评分低于优于对照组,P<0.05;两组在改善尿道灼热、小便短赤评分方面无显著差异,P>0.05。将以上行组内比较,疗程结束时中医证候评分及各单项症状评分较治疗前均明显下降,P<0.01。(5)疗程结束,治疗组前列腺检查总评分低于对照组,P<0.01,治疗组前列腺压痛、卵磷脂小体评分selleckchem VX-445低于对照组,P<0.01;两组在前列腺质地、白细胞计数评分方面无显著差异,P>0.05。将以上行组内比较,疗程结束时前列腺检查各项评分较治疗前均明显下降,P<0.01。(6)疗程结束,治疗组患者抑郁程度评分(PHQ-9)低于对照组,P<0.05。将以上行组内比较,疗程结束时两组患者抑郁程度评分(PHQ-9)较治疗前均明显下降,P<0.01。结论:(1)柴胡胜湿汤加减能够有效改善湿热蕴结型精浊患者的临床症状,主要表现为降低中医证候评分、NIH-CPSI评分、前列腺检查评分、及患者抑郁程度评分。(2)柴胡胜湿汤加减治疗湿热蕴结型精浊疗效优于前列解毒胶囊治疗,且无特殊不良反应,安全性有保障,故值得临床推广。

深海作为海洋系统的最重要组成部分,是世界上最大的生态单位,具有物理化学性质迥异、地质作用不同的各种极端环境。近年来在冷泉、热液系统中的微生物类群、生物地球化学过程等研究取得了长足进展,极大地增加了人们对深海极端环境的了解。热液Root biomass和冷泉是现代深海环境中两个重要的极端系统,它们均是岩石圈与外部圈层之间进行物质、能量转移和交换的重要途径,它们之间既有显著差异,但也存在很多相似点。由于热液羽流可以使海洋沉积物的环境条件在时空尺度上发生快速变化,尤其是营养元素和金属元素含量随着距热液喷口的距离形成显著的梯度变化,并且影响沉积物中微生物的组成以及能量代谢途径。如果冷泉系统与热液系统在空间上相隔较近,并处在热液羽流的潜在影响范围内,那么两者理论上就可能会存在物质和能量上的交流,进而影响微生物群落结构以及微生物介导的地球化学循环。因此,将冷泉和热液系统同时纳入海底极端环境系统进行考虑,从更加广阔的视角开展冷泉-热液共存系统中的微生物群落特征、微生物介导的生物地球化学循环等研究,对全面了解深海沉积物生物圈的物质循环和能量流动具有重要意义,有望加深对深海极端环境与微生物生态的认识。基于此,本论文以孕育了大量繁盛的热液和冷泉活动的冲绳海槽为研究对象,依托“海洋地质九号”科学综合考察船对冲绳海槽南庵西热液区和西侧陆坡冷泉区(两者之间直线距离约50公里)进行了系统采样。借助16S rDNA扩增子高通量测序及宏基因组测序技术,对冷泉-热液系统共存区沉积物中的微生物群落及其介导的地球化学元素循环进行了分析讨论,取得了如下进展:一、海底甲烷渗漏程度显著影响微生物群落的组成。冲绳海槽西侧陆坡冷泉区沉积物中,甲烷厌氧氧化古菌呈现出高度的多样性,并与硫酸盐还原菌主导着海底渗漏甲烷的厌氧氧化作用;嗜热微生物类群的发现暗示着冷泉与热液系统的微生物可能存在交流。Chao1、ACE、Shannon和Simpson等微生物多样性指数显示样品中细菌和古菌在高甲烷渗漏强度区的丰富度和多样性要高于低甲烷渗漏强度区。根据沉积物中微生物优势类群和周围环境特征可以评估甲烷通量的高低及冷泉发育阶段,其中,低通量甲烷扩散环境中,硫酸盐-甲烷转换带(Sulfate-methane transition zone,SMTZ)较深,在SMTZ之上的沉积物中以微生物介导的有机质降解过程为主;在冷泉发育成熟期(R6-C2位点,甲烷渗漏速率1475 mmol m~(-2) yr~(-1)),有机质会大量累积;之后,随着甲烷渗漏强度逐渐降低,沉积物中有机质的含量会渐渐降低,冷泉开始进入消亡期(初始期;R5-C1位点,甲烷渗漏速率515 mmol m~(-2)yr~(-1))。而在断层区域或泥火山处甲烷具有很大的通量时,部分甲烷会穿过海底沉积物直接进入海水层。在高通量甲烷冒泡环境中,SMTZ往往非常浅,沉积物中以甲烷厌氧氧化作用(Anaerobic methane oxidation,AOM)为主,冷泉正处于活跃期。甲烷厌氧氧化古菌(Anaerobic methanotroph,ANME)、δ-变形菌和ε-变形菌在高甲烷渗漏强度的沉积物(R6-C3位点,甲烷渗漏速率6450 mmol m~(-2) yr~(-1))中占相对优势并且具有丰富的多样性。具体体现为目前所有已知的ANME古菌类型在冲绳海槽西侧陆坡冷泉区沉积物中均被发现,包括ANME-1b(相对丰度为古菌群落的67%)、ANME-2c(8%)、ANME-1a(7%)、ANME-2b(3%)、ANME-2a(2%)和ANME-3(1%)。通常来说,ANME古菌类群具有各自的生态位,其在同一取样位点中共存的现象为国内外首次报道,符合海底冷泉-热液系统共存特殊环境条件的推论。此外,嗜热微生物在冷泉区沉积物中被检测到,极有可能是通过流体循环来源于相邻的热液系统。总之,这些结果指示了冲绳海槽冷泉与热液系统之间的耦合或相互作用。二、海洋沉积物微生物群落组成及功能在冲绳海槽冷泉-热液系统共存区不同站位的分布具有生境特异性。热流值高的海底断裂带沉积物中嗜热微生物相对丰度增高;邻近热液区,微生物介导的氮循环过程显著富集,而靠近冷泉区,硫酸盐还原作用较强。表明冷泉及热液活动均是海洋沉积物中微生物介导的生物地球化学循环的重要物质来源。在冲绳海槽冷泉-热液系统共存区5个站位(GC-2,-4,-5,-6,-8)次表层沉积物样品中,细菌丰度较高、古菌较低。宏基因组微生物群落中相对丰度较高的分类单元依次为δ-变形菌、α-变形菌和γ-变形菌,且在不同站位具有差异分布特性。在GC-2站位(位于冲绳海槽西侧陆坡冷泉区)中主要的微生物类群为硫酸盐还原菌(Sulfate reducing bacteria,SRB)。因深海沉积物-水界面高硫酸盐的特性及其厌氧环境,丰富的硫酸盐还原菌及其较强的代谢能力促进了硫元素的快速循环。GC-6站位位于海底断裂区,因而具有较高的热流值,其沉积物中嗜热微生物的相对丰度要高于其他站位。而邻近热液区(GC-8站位)沉积物中微生物群落结构主要受到环境因子NO_2~-(0.0023 mg/L)和砂质含量(16.5%,“渗漏型”沉积物)的影响,主导微生物类群有α-变形菌和浮霉菌,以氧化低价硫化合物和厌氧氨氧化为主要代谢类型。此外,通过微生物功能基因分析发现,在“渗漏型”海洋沉积物有氧-厌氧界面,氨氧化、硫氧化耦合硝酸盐还原等过程促进了氮元素的循环。Candidatus Methylomirabilis oxyfera具有独特的亚硝酸盐驱动的甲烷氧化能力,也分布于此沉积物层,利用环境中的NO_2~-和甲烷。冲绳海槽紧靠东海陆架,海槽内堆积了较厚的富有机质的第四纪沉积层。因此热液流体中携带有大量还原性的物质(铵、硫化物、金属离子)与周围氧化的冰冷的海水相互混合,可以形成几百米到几千米的热液羽流。来源于热液流体外源物质的输入对于沉积物中微生物的群落结构及其介导的元素循环过程具有重要影响。三、海底冷泉、热液流体相互作用影响了金属依赖型甲烷厌氧氧化作用的发生。冲绳海槽冷泉-热液共存体系为海洋元素循环耦合过程提供了很好的模型。在厌氧的海洋沉积物中,硫酸盐(SO_4~(2-))是AOM主要的电子受体(硫酸盐依赖型甲烷厌氧氧化,Sulfate-AOM),并且大部分甲烷会在SMTZ被拦截。但是在活跃冷泉区,表层沉积INCB28060纯度物中甲烷的浓度仍然较高(GC-2站位,353μL/L)。GC-2站位沉积物中除了存在大量SRB外,还检测到了许多铁还原菌(例如Geobacter)。而且,通过对冲绳海槽冷泉-热液系统共存区沉积物中Emricasan研究购买金属组分、热液来源铁比率(f_(hydrothermal))等的检测和计算,可以初步确认从弧后盆地扩张中心经热液羽流携带的活性金属物质,能够进入到西侧陆坡冷泉区。同时,西侧陆坡冷泉区流体不断向上运移,在沉积物SMTZ带,冷泉流体中的甲烷和正常向下扩散的硫酸盐发生Sulfate-AOM,但由于又有大量的热液铁氧化物加入,则可能同时发生铁依赖型甲烷厌氧氧化(Fe-AOM)。总之,由于冲绳海槽半封闭的地形特征以及冷泉和热液系统的独特共存,来源于扩张中心的热液羽流为其覆盖的冷泉区沉积物提供了额外的能源和营养元素,并通过生物地球化学循环耦合将两个生态系统有机地联系起来。海洋沉积物中微生物介导的甲烷的生成氧化对于海底甲烷的存储、转化或释放,乃至对全球碳循环都有巨大的影响,而冲绳海槽冷泉-热液系统共存体系为研究探索特殊的代谢类型提供了很好的模型。研究结果为全面了解冲绳海槽热液-冷泉共存系统极端环境中微生物群落及其参与的生物地球化学循环提供了科学证据,海底冷泉-热液流体相互作用概念模型对深部生物圈中的物质来源和能量流动具有重要科学理论意义。

目的：探讨在体外受精-胚胎移植反复着床失败患者子宫内膜基质细胞中添加β-烟酰胺单核苷酸(β-NMN)对子宫内膜基质细胞蜕膜化水平的影响。方法：活检获得反复着床失败3例患者子宫内膜组织，酶消化分离体外培养后获得了三株原代子宫内膜基质细胞。根据培养过程中添加β-NMN和诱导蜕膜化情况分为实验组、对照组、空白组。实验组在子宫内膜基质细胞蜕膜化培养过程中添加β-NMN,对照组不添加β-NMN,无蜕膜化培养为空白组。比较3组细胞培养过程中蜕膜标志物泌乳素(PRL)和Baricitinib溶解度人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)的mRNA表达和分泌水平。结果：实验组PRL(2.38±0.10 ng/nl)、IGFBP-1(1.89Lorlatinib±0.12 ng/nl)水平均高于对照组(1.19±0.17 ng/nl、0.99±0.20 ng/nl)(P<0.05),对照组与空白组相比无差异；定量PCR检测蜕膜前后细胞内PRL(15.82±12.92)和IGFBP-1(9.86±8.67)的mRHepatocytes injuryNA表达量上升(P<0.05)。结论：反复着床失败患者子宫内膜基质细胞蜕膜化中添加β-NMN能够提高蜕膜化水平。

开花是植物从营养生长转向生殖生长的重要标志，过早开花会造成植物早衰，严重影响以营养体为产品器官的经济作物的产量和品质PI3K/Akt/mTOR抑制剂，因此研究植物开花基因并对其进行编辑以延迟开花时间具有重要的理论意义和应用价值。LFY基因可抑制叶原基生长并促进functional symbiosis花分生组织及花器官形成，是调控植物开花的关键“分子开关”。为利用LFY基因延迟易早花植物的开花时间，本研究以本氏烟为试验材料，构建了NbLFY基因的CRISPR/Cas9敲除载体，利用农杆菌介导法转化叶盘并对编辑植株的表型进行了观察分析。结果表明，通过抗性筛选和PCR检测共获得了10株T_0代植株，靶位点测序分析发现其中有2株NbLFY基因发生了突变，编辑效率为20%，突变类型均为缺失了一个碱基(T)而造成了移码突变。对T_1代基因编辑植株进行表型性状观察发现，与野生型相比，基因编辑植株株高显著降低，现蕾期延迟20 d，第一花序节位也明显提Naporafenib高，表明NbLFY基因的突变导致本氏烟开花时间延后，生殖生长进程延迟。本研究结果证实了NbLFY基因可促进本氏烟开花，敲除该基因可以推迟开花时间。上述研究结果为其他经济作物利用LFY基因延迟开花时间提供了参考依据。

目的 建立基于加权TOPSIS法的质子泵抑制剂（PPI）用于围手术期预防应激性溃疡（SRMD）评价细则，为临床围手术期合理使用PPI预防SRMD提供参考。方法 以药品说明书、临床指南、专家共识及相关文献为依据，制定围手术期使用PPI预selleck PF-07321332防SRMD合理性评价细则，根据此评价细则采用加权TOPSIS法对中山大学附属第三医院202此网站1年4月肝胆外科围手术期使用PPI预防SRMD的病历进行评价。结果 211份病历中，评价为合理病历（Ci≥0.8）有29份（13.75%），基本合理病历（0.6≤Ci <0.8）有62份（29.38%），不合理病历（Ci <0.6）有120份（56.87%）。结论 基于加权TOPSIS法制定的质子泵抑制剂用于预防intramedullary abscess围手术期应激性溃疡评价方法可以用于该药的合理使用评价，说明该院肝胆外科围手术期使用PPI预防SRMD的不合理现象较为普遍，应加强管理，进一步规范围手术期质子泵抑制剂的合理使用。

目的：运用数据挖掘技术分析针刺治疗抑郁症的选穴特点和腧穴配伍规律。方法：检索自建库以来至2021年7月的中文数据库有关针刺治疗抑郁Telaglenastat研究购买症的文献，包括中国知网期刊全文数据库（CNKI）、中国学术期刊数据库（万方Ras抑制剂数据）、中文科技期刊数据库（维普网）以及中国生物医学文献数据库（CBM）。经筛选后形成针刺治疗抑郁症的处方数据库，并利用关联规则、聚类分析、复杂网络分析等实现数据挖掘以及可视化peripheral pathology展示。结果：针刺治疗抑郁症腧穴以百会应用频次最高；腧穴归经督脉使用频次最高；关联规则中以百会-印堂、太冲-百会和太冲-内关关联性最强。结论：治疗抑郁症的针刺处方以多穴配伍为主，配伍原则为远近配穴、按部位配穴与按经脉配穴相结合，针刺核心处方的核心腧穴为百会、太冲、印堂、内关、三阴交、神门、四神聪、神庭。

目的:评估结直肠癌患者KRAS、NRAS和BRAF的基因突变状态、临床病理特征和预后价值,为结直肠癌患者的基因检测策略提供理论依据。方法:回顾Puromycin体内实验剂量性分析2017年1月1日至2020年12月1日期间在吉林大学第二医院结直肠外科接受手术治疗的患者数据。收集临床信息Indirect genetic effects包括性别、年龄、病理免疫组化结果,肿瘤组织学、淋巴血管浸润、肿瘤位置、肿瘤大小、分化程度、肿瘤分型、肿瘤TNM分期等。由吉大二院病理科专家基于UICC/AJCC第8版的TNM肿瘤分期标准评定病理特征和临床分期。在吉大二院精准医学中心使用突变阻Etoposide体内滞扩增系统PCR(ARMS-PCR)技术检测KRAS基因、BRAF基因和NRAS突变的突变状态。使用统计学分析KRAS、NRAS和BRAF基因突变的临床病理特征以及预后价值。结果:(1).KRAS基因突变占全部结直肠癌患者的40.2%(68/169),其中突变率相对较高的是G12D(15.4%)、G12V(9.4%)和G13D(8.8%)。BRAF V600E突变率为4.7%(8/169)。(2).临床病理相关性分析显示,KRAS突变患者相较于KRAS野生型患者有着更高的神经浸润和粘液腺癌比例(P<0.05);KRAS突变亚型G12D、G12V和G13D之间的临床病理特征没有差异。(3).NRAS与临床病理特征没有显著相关性。(4).BRAF基因突变与右半结肠癌,N分期更高,更高的脉管浸润率相关(P<0.05)。(5).预后分析表明KRAS基因突变的结直肠癌患者预后更差(P<0.005)。(6).多变量Cox回归分析显示,KRAS突变、患者性别以及患者年龄大小和肿瘤部位是结直肠癌患者预后的独立预后因素(P<0.05)。结论:(1)KRAS基因突变型率为40.2%,BRAF和NRAS的突变率为4.7%。(2)KRAS突变的位点中,突变率相对较高的是G12D(15.4%)、G12V(9.4%)和G13D(8.8%)。(3)NRAS突变位点中,3号外显子上的Q61R(2.2%)突变率最高。(4)肿瘤神经浸润,粘液腺癌与KRAS突变率显著相关。右半结肠癌与BRAF突变显著相关。NRAS与临床病理特征没有显著相关性。(5)生存分析显示,KRAS是CRC患者的不良预后因素。性别,年龄,肿瘤部位和KRAS状态是与患者预后相关的独立风险因素。

目的:太原市于2010年建立了HFMD监测系统,为了解有关HFMD流行病学特征以及柯萨奇病毒A16(Coxsackievirus A16,CVA16)的遗传特征,我们研究了2010-2021年中国山西省太原市HFMD的流行病学和CVA16的遗传特征。通过研究,我们可以了解太原市HFMD的流行情况,增加全球范围内CVA16的可用遗传资源,为Dolutegravir分子量HFMD的预防、控制及疫苗研发提供科学依据。方法:1.太原市不同区县的10家医院采集发病后3天内临床诊断的HFMD病例,每个月至少采集5份样本,样本类型为咽拭子或粪便,按照生物安全管理条例由各区县疾病预防控制中心(Center for Disease Control and Prevention,CDC)将样本送至太原市CDC微生物检验科。2010-2021年共采集6641份样本,送往太原市CDC微生物检验科进行肠道病毒核酸检测。2010-2021年太原市HFMD流行病学资料来源于中国疾病预防控制信息系统,使用Excel、SPSS软件进行统计分析。2.对收集的样本进行肠道病毒RNA提取,使用三通道实时荧光定量PCR肠道病毒检测试剂盒进行核酸检测,对CVA16病毒核酸阳性的样本,扩增VP1基因全长序列并进行测序。3.对测序所获得的核苷酸序列使用Sequencher(5.4.6)软件进行拼接和比对;使用Bio Edit(7.2.5)软件对核苷酸和氨基酸的同源性进行分析。采用MEGA(11.0.11)软件对太原市CVA16毒株的VP1序列与国内外参考毒株序列进行比对分析,构建系统发育树采用邻接法(neighbor-joining),分析CVA16的基因特征。结果:1.2010年1月1日至2021年12月31日,太原市共报告HFMD 71158例。HFMD的年平均发病率为123.69例/10万人(20.68-219.25/10万人)。大多数HFMD病例发生在1至5岁年龄组84.42%(60075/71158)。男性HFMD的发病率(144.41/10万人)明显高于女性(101.20/10万人)(χ~2=22188.249,P<0.001),平均男女性别比为1.47:1。2.除2020年受新冠SAG小鼠肺炎疫情影响外,HFMD病例月分布呈现两次疫情高峰;一个高峰在5月至8月,另一个高峰在10月至12月。HFMD病例峰值出现了明显的变化,2016年(包括)之前的高峰在6月,到2017年以后转移至7月。在新冠肺炎流行期间,仅在2020年10月至12月出现HFMD疫情高峰,占全年病例的74.33%。3.6641份样本中共检测到4236份EV阳性样本,其中EV-A71 988份(23.32%)、CVA16 1488份(35.13%)、其他肠道病毒1760份(41.55%)。4.太原市CVA16毒株属于B基因型中的B1基因亚型,并处于两个不同的进化分支,分别为B1a、B1b。在所有毒株中,184株为B1b,38株为B1a。184株B1b毒株主要处于两个不同的传播链,一个流行于2012年至2019年,另一个流行在2016年至2021年,而38株B1a毒株在2010年至2015年和2019年至2021年流行。5.太原市CVA16核苷酸同源性为86.5%-100%,氨基酸同源性为96.9%-100%;太原市CVA16毒株与原型株(G10/RSA/1951)在核苷酸和氨基酸序列上的同源性分别为74.2-77.2%和90.9-92.2%。184株B1b CVA16在核苷酸和氨基酸序列上同源性分别为90.6-99.8%和97.9-100%。38株B1a CVA16毒株在核苷酸和氨基酸序列上分别具有90.5-99.8%和97.6-100%的同源性。结论:太原市12年(2010-2021年)HFMD病例监测数据显示,HFMD感染人群中,男性患病人数明显高于女性,1-5岁的儿童占大多数。HFMD病例全年均有报告,但呈明显的季节性,高发病区主要在小店区、万柏林区、杏花岭区。根据太原市HFMD的流行特征,需针对高危地区,在高发时间前提前做好预防工作,减少HFMD的流行。HFMD的病原体谱发生了一定程度的变化,由EV-A71引起的HFMD病例数量逐渐减少;但是,CVA16仍然流行,并已成为太原市引起HFMD的最重要病原体之一。在太原市发现的所有CVA16毒株都属于B基因型,B1亚基因型,分属于两个进化支B1a和B1b。因此实验室应扩大肠道病毒病原型别medical dermatology监测范围,并有针对性的进行病原检测,为太原市HFMD防治工作提供科学依据。

背景:随着社会的高速发展和各种高压事件的频发,抑郁症逐渐成为全球范围内最为普遍的精神障碍类疾病。抑郁症以长期的情绪低落、快感缺失和行为绝望为主要特征,但目前临床使用的一线抗抑郁药物治疗效果不佳,患者停药后易复发,这些现状提示抑郁症具有多病因机制的显著特点。因此,目前亟需更全面地阐明抑郁症的病理机制,以寻找治疗抑郁症的新靶点,并针对性地开发更优化的诊断和治疗策略。近年研究表明,神经元可塑性失调在抑郁症的发生发展中可能起着重要作用。慢性、持续的压力应激往往导致大脑出现适应性异常,神经元发生结构和功能可塑性损伤,从而影响正常的神经放电、神经内分泌等活动,这可能是促进抑郁、焦虑等情绪障碍发生的重要诱因,但具体机制不清。细胞内酸碱平衡是细胞维持功能活动稳态的重要特征之一,但截至目前止,神经元细胞内酸碱稳态失衡在抑郁症发病中的作用及机制尚不清楚。Na+/H+交换体(Na+/H+exchanger,NHE)属于高度进化保守的转运蛋白家族,可将细胞内H+与胞外Na+进行电中性交换,调控细胞内pH值(intracellular pH,pHi)的动态平衡。其中,NHE1是中枢神经系统中表达最丰富的亚型,尤其在皮质、海马和小脑中高表达,是哺乳动物神经元细胞内酸碱稳态的主要调节者,但其在突触可塑性调节中的作用,及其异常表达是否参与抑郁症的发病过程,目前尚未可知。在此研究背景下,我们拟构建慢性不可预知温和应激(Chronic Unpredicted Mild Stress,CUMS)诱导的抑郁动物模型,并采用蛋白质组学、膜片钳电生理、行为学检测、化学遗传学、病毒学和转基因鼠结合等多种实验技术与方法,探究压力应激作用下,NHE1是否通过调节神经元突触可塑性参与抑郁症的发生发展,及其发挥作用的具体分子机制。方法:(1)在体CUMS建模:将雄性Wistar大鼠(120-140 g)随机分为Control(空白对照组,Ctrl)组和CUMS组,给予CUMS组大鼠5周的慢性不可预知温和应激。造模结束后,对两组大鼠进行行为学测试以评估大鼠抑郁样和焦虑样行为,包括蔗糖偏好实验、强迫游泳实验、旷场实验和高架十字迷宫实验;采用H+荧光探针检测神经元细胞内pH值水平;采用免疫荧光、高尔基染色、透射电镜检测神经元结构可塑性如树突棘、突触的形态数目变化等;采用脑片膜片钳技术检测神经元功能性放电活动。对Control组大鼠和行为学测试中表现出抑郁样行为的CUMS组大鼠海马组织样本进行Label-free定量蛋白质组学检测,通过生物信息学分析寻找与调节细胞内pH值有关的差异性表达蛋白质。(2)敲减NHE1的腺相关病毒脑内注射建模:构建特异性敲减兴奋性神经元中NHE1的腺相关病毒,利用脑立体定位仪注射于大鼠的双侧海马CA1(Cornu Ammonis 1)区,病毒感染2-3周后进行蔗糖偏好实验、强迫游泳实验等行为学检测,若无显著的抑郁样行为,则给予大鼠2周的慢性不可预知温和应激刺激;通过Western blot技术、免疫荧光、转盘式共聚焦、高尔基染色、全细胞膜片钳技术和电子显微镜分别观察NHE1蛋白的表达水平、细胞定位、细胞内pH值以及神经元结构和放电活动的改变。采用全转录组学测序和qPCR技术验证NHE1的mRNA表达水平;通过富集分析寻找调控翻译后修饰相关的蛋白质,进一步利用定量蛋白组学结果和生物信息学分析寻找与调控NHE1蛋白表达水平相关的差异性表达蛋白质。(3)离体实验建模:培养原代大鼠海马神经元,构建皮质LEE011体内酮(Corticosterone,CORT)诱导的细胞应激模型,验证应激刺激作用下NHE1蛋白的降解途径:采用溶酶体抑制剂氯喹阻断溶酶体降解通路,采用蛋白酶体抑制剂MG132阻断蛋白酶体降解通路;利用免疫荧光技术观察NHE1和CUL4A(Cullin4A)在神经元中的定位;采用免疫沉淀技术验证应激刺激作用下NHE1的泛素化水平。(4)构建过表达CUL4A的腺相关病毒,并通过脑立体定位仪定位注射于Thy1-Cre小鼠双侧海马CA1区,病毒感染2-3周后,对各组动物进行蔗糖偏好实验和强迫游泳实验等行为学测试;采用H+荧光探针和转盘式共聚焦检测小鼠海马CA1区神经元内pH值变化;通过Western blot技术检测CUL4A和NHE1的蛋白表达水平;使用膜片钳技术检测神经元自发性放电及诱发的动作电位变化。(5)基于化学遗传学技术,构建AAV-DIO-hM4Di-mCheery病毒,通过脑立体定位仪定点注射于Thy1-Cre小鼠海马CA1区;构建AAV-CaMKII-hM4Di-mCheery病毒注射于正常大鼠的海马CA1区,病毒感染2-3周后,对动物进行腹腔注射生理盐水或者CNO(clozapine-N-oxide)处理,通过蔗糖偏好实验和强迫游泳实验检测行为学改变;采用脑片膜片钳技术检测CNO给药前后神经元的兴奋性变化。结果:(1)与Control组比较,CUMS组大鼠在蔗糖偏好实验中对糖水的消耗百分比明显降低;在强迫游泳实验中其保持不动、相对静止的时间显著增多;在旷场实验中运动的总距离没有明显差异,但与Control组比较,CUMS组大鼠在中央格停留的时间减少;在高架十字迷宫实验中,与Control组比较,CUMS组点击此处大鼠进出开放臂的次数以及停留在开放臂的总时间均明显减少。与Control组比较,CUMS组大鼠海马CA1区神经元内pH值显著降低;CUMS组大鼠海马CA1区神经元的树突复杂性、树突棘密度和突触数量均有一定程度的降低;与Control组比较,CUMS组大鼠海马CA1区神经元自发性兴奋性突触后电流和微小兴奋性突触后电流减弱。以上结果提示5周的慢性不可预知温和应激可诱导大鼠表现出抑郁样行为,降低神经元内pH值水平并导致海马神经元结构和功能可塑性异常。(2)蛋白质组学结果显示,多种蛋白质在抑郁样大鼠海马CA1区存在差异性表达,其中NHE1蛋白表达明显减少,提示NHE1可能是参与抑郁症发病中神经元胞内pH值降低和可塑性损伤的关键分子。(3)行为学检测结果显示,相比于注射对照病毒组,敲减正常大鼠海马CA1区NHE1的蛋白表达后,动物的行为学检测结果无显著性变化,但给予这组大鼠仅2周的CUMS刺激,就足以诱导明显的抑郁样行为,包括在蔗糖偏好实验中饮用糖水的百分比减少,在强迫游泳实验中呈现静止状态的时间显著增加等。以上结果提示,相比于注射对照病毒组,敲减大鼠海马CA1区NHE1蛋白表达使大鼠在受到压力应激刺激后更容易表现出抑郁样行为,对应激刺激的易感性增加。(4)QPCR结果显示,Control组和CUMS组间NHE1的mRNA表达水平无统计学意义,提示NHE1蛋白水平下调可能是由于转录后或翻译后调控所致。COG(Cluster oforthologous group)富集分析显示,抑郁大鼠海马CA1区呈差异性表达的蛋白质主要富集在蛋白质翻译后修饰途径。在富集于翻译后修饰通路的差异性蛋白质中,CUL4A作为可通过泛素化降解蛋白质的E3泛素连接酶家族重要成员,与Control组比较,其在CUMS组表达水平明显增高。Western blot技术检测发现,经蛋白酶体抑制剂MG132处理后,可明显逆转CORT诱导的NHE1表达水平的下调,说明应激刺激作用下NHE1蛋白水平的下调可能与蛋白酶体降解途径有关。免疫荧光结果显示CUL4A和NHE1在内质网上存在共定位现象。免疫沉淀结果表明,随着CORT作用时间增加Collagen biology & diseases of collagen,培养的原代神经元中NHE1泛素化水平明显升高。这些结果提示CUL4A可能靶向NHE1的泛素化修饰,并促进其通过蛋白酶体途径降解。(5)在Thy1-Cre小鼠海马CA1区锥体神经元中过表达CUL4A,给予小鼠2周的CUMS刺激,即可诱导其产生明显的抑郁样行为。同时发现,相比于注射对照病毒组,过表达CUL4A的小鼠CA1区谷氨酸合成酶活性下降,锥体神经元内pH值降低,神经元自发性放电及诱发的动作电位明显减少,并伴随NHE1蛋白表达水平降低。(6)脑片膜片钳全细胞记录结果发现,在新鲜的脑切片灌流液中加入CNO后,表达hM4Di的Thy1-Cre小鼠海马椎体神经元产生动作电位的诱发电流阈值增高,神经元兴奋性降低;相比于CNO给药前,在相同的注入电流诱发条件下,表达hM4Di的大鼠兴奋性神经元动作电位频率降低。行为学检测结果发现,在锥体神经元中特异性表达hM4Di的Thy1-Cre小鼠中,相比于生理盐水注射组,腹腔注射CNO组小鼠在在强迫游泳实验和悬尾实验中的静止时间均增多。同样,在兴奋性神经元中特异性表达hM4Di的大鼠中,相比于腹腔注射生理盐水组,腹腔注射CNO的大鼠在强迫游泳实验中静止不动时间增多,在蔗糖偏好实验中糖水消耗百分比减少,表现出抑郁样行为。结论:慢性压力应激可导致大鼠海马CA1区E3泛素连接酶CUL4A表达增加,CUL4A可能通过泛素化修饰NHE1使其降解增加,导致神经元内H+排出减少、pH值降低,细胞内酸碱稳态失衡,继而导致海马CA1区锥体神经元突触可塑性发生失调,突触传递效能减弱,神经元兴奋性降低,并最终促进动物产生抑郁样行为。本研究结果完善了压力应激刺激导致抑郁症发病的神经可塑性损伤机制,为发现和筛选新型抗抑郁药和抗抑郁治疗新策略提供潜在靶点和科学依据。