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目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是人类最常见的恶性肿瘤之一,HCC起病隐匿,许多患者在确诊时已失去了手术切除的机会。尽管近些年靶向、免疫等药物为HCC的治疗带来了很大的进步,但HCC患者的总体生存仍然是一个重大挑战,迫切需要新的治疗策略。铁死亡是近年来新发现的一种调节性细胞死亡形式,以细胞内铁离子和脂质过氧寻找更多化物的积累为特点,在细胞的细微结构水平,表现出线粒体膜皱缩,同时线粒体嵴减少或消失。研究表明,铁死亡与HCC的发生、发展有着紧密联系。microRNAs(miRNAs)是一类进化上保守的非编码RNA,作为基因表达的转录后调节因子,oncology and research nurse参与细胞增殖、凋亡等多种生物学过程。miRNAs在HCC的发生、发展中发挥着重要作用,并被认为可能成为新的HCC治疗靶点。miR-552-5p与乳腺癌、胰腺癌、胃癌等多种恶性肿瘤相关,研究证实,miR-552-5p促进HCC的发生发展。miR-552-5p高表达通过抑制细胞凋亡介导HCC索拉非尼耐药。但miR-552-5p是否参与HCC铁死亡的调控,还缺乏相关的研究。本研究旨在探讨miR-552-5p在铁死亡中的作用及机制,为HCC的治疗提供新的策略。方法:本研究中所采取的研究方法有CCK-8实验,细胞克隆形成实验,GSH实验,FerroOrange染色实验,C11-BODIPY实验,透射电镜实验,裸鼠皮下成瘤实验,生物信息学分析,Western blot实验,双荧光素酶报告实验,PCR实验。结果:1.miR-552-5p在HCC中高表达。在RSL3诱导铁死亡的条件下,抑制miR-552-5p表达,Huh-7和Hep3B细胞的活力明显下降,细胞内GSH水平减少,Fe2+水平升高,脂质过氧化水平升高,透射电镜下观察细胞内线粒体变小,线粒体膜密度增大。过表达miR-552-5p后结果则相反。体内实验证实抑制miR-552-5p增强了体内HCC细胞对铁死亡的敏感性。2.双荧光素酶报告实验证实miR-552-5GW4869价格p与ACSL4 mRNA 3′-UTR相互作用。qPCR和Western Blot实验结果证实miR-552-5p负向调控ACSL4的表达,GSH实验、FerroOrange染色实验、C11-BODIPY实验等证实miR-552-5p通过靶向ACSL4降低了HCC细胞对铁死亡的敏感性。3.双荧光素酶报告实验验证了转录因子ZNF8与miR-552的结合,ZNF8过表达降低了细胞内miR-552-5p的水平,CCK-8实验、GSH实验、FerroOrange染色实验、C11-BODIPY实验等证实ZNF8通过抑制miR-552-5p的转录增强了 HCC细胞对铁死亡的敏感性。4.利用TCGA数据库分析证实ACSL4与ZNF8在HCC中表达升高,通过GEPIA数据库得到ACSL4和ZNF8表达水平相关的HCC患者的生存曲线,结果显示,ZNF8和ACSL4在肝癌组织中较癌旁组织表达升高。ZNF8高表达作为HCC危险因素,促进了 HCC复发,降低了 HCC患者总体生存率,ACSL4高表达同样作为HCC患者危险因素,降低了 HCC患者的总体生存率,但是没有明显证据表明ACSL4高表达与HCC复发有显著相关性。结论:1.miR-552-5p参与抑制HCC铁死亡。2.miR-552-5p 靶向 ACSL4 mRNA 的 3′-UTR 负向调控 ACSL4 的表达。3.ZNF8通过与miR-552启动子区域结合,抑制miR-552的转录。4.ZNF8与ACSL4对HCC患者的预后具有参考意义。

目的:通过对文献及临床病例的分析selleckchem SBE-β-CD探究慢性心衰合并房颤中医证候、证素分布规律,以期为慢性心衰合并房颤的中医临床辨证施治提供客观理论依据。材料与方法:首先,使用中国知网(CNKI)、万方数据库收集有关心衰合并房颤证候或证素的文献,检索时间设定为自各个数据库的建库时间到2021年12月31日前。提取文献中证候、证素信息,使用Excel表格建立数据库,采用SPSS软件进行描述性统计及关联分析;再通过病历系统收集2019年7月-2022年9月辽宁中医药大学附属医院住院的心衰合并房颤的患者,提取病历中的证候、证素信息,使用Excel表格建立数据库,运用SPSS软件对数据进行描述性统计和关联分析。分别分析文献及临床病例中心衰合并房颤的中医证候、证素分布规律。结果:1.分析文献得到常见病性证素为气虚、血瘀、痰浊、阴虚、购买GW-572016阳虚;常见病位证素为心、肺、肾、脾。2.分析文献得到证素组合多为虚实夹杂,其中以“气虚+血瘀”“阳虚+水/湿”“气虚+阴虚+血瘀”“气虚+血瘀+痰浊”最为多见。文献关联分析中分别设置支持度≥10%、置信度≥80%及支持度≥10%、置信度≥70%,使用关联规则得出“气虚→血瘀”“血瘀→痰浊”“气虚→痰浊”等组合。3.分析临床病例得到常见病性证素为气虚、血瘀、阴虚、水饮、阳虚;常见病位证素为心、肺、肾、脾。4.分析临床病例得到证素组合多为虚实夹杂,其中以“气虚+血瘀”“阳虚+水饮”“气虚+阴虚+血瘀”最为多见。5.临床病例关联分析中设置支持度≥10%、置信度≥80%,使用关联规则得出“血瘀→Laparoscopic donor right hemihepatectomy气虚”“血瘀→水饮”“阴虚→水饮”等组合。结论:1.心衰合并房颤的中医病性证素最常见的有“气虚”“血瘀”“阴虚”“痰浊”“水饮”,“阳虚”次之。2.心衰合并房颤的中医病位证素常见的有心、肺、肾、脾。3.心衰合并房颤的中医证素组合类型以双证素组合最为常见,以“虚实夹杂”为特点,如“气虚血瘀”“阴虚血瘀”“阳虚血瘀”,其中“气虚血瘀”这一组合类型最为常见。

目的 探究四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin,BH4）对胰腺癌细胞生物学行为的影响及可能机制。方法 细胞分为对照组与实验组，实验组根据BH4浓度（2、4、8、12μM）分为4组，采用CCK-8、Hoechst及划痕实验检测细胞的增殖、凋亡和迁移能力，RT-qPCR检测细胞中Notch1 mRNA表达情况，Western blottingLIHC liver hepatocellular carcinoma检测细胞中E-Cadherin与NAMG510试剂-cadherin表达情况。结果 与对照组相比较，随着BH4浓度的增加，HPAC与BxPC-3细胞的活性与迁移能力逐渐下降，细胞凋亡率逐渐增高，且8μM、12μM浓度的BH4作用有显著意义（P<0.01,P<0.05）；与对照组相比较，12μM BH4组细胞中Notch1 mRNA显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.01,P<0.05）,N-cadherin蛋白表达水平降低（AZD2281 IC50P<0.05）。结论BH4可抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移，促进其凋亡，其机制可能与抑制上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）有关，而Notch1在EMT发生过程中改变，提示Notch1信号通路可能参与该过程的调控。

目的：探讨二代冷冻球囊治疗阵发性心房颤动的有效性以及安全性，并分析其术后复发的相关危险因素。方法：研究纳入2017年2月至2021年10月于南京鼓楼医院行二代冷冻球囊消融术的阵发性心房颤动患者。记录患者的基线临床资料、术中冷冻消融参数、手术并发症和随访结果。手术后3、6、12个月及以后每12个月进行规律的门诊及电话随访。根据术后是否复发分组，比较两组患者的差异，并通过多因素Logistic回归分析术后复发的独立危险因素。房颤复发定义为术后3个月以后常规心电图或24www.selleck.cn/products/gsk-j4-hcl h动态心电图提示持续时间≥30 s的房颤、房扑、房速。结果：总共204例患者被纳入分析，年龄为(61.27±10.25)岁，中位病程Dinaciclib纯度为15(3,60)个月，其中110(53.9%)例为男性患者，共10(4.9%)例患者出现手术并发症。术中累计消融833根肺静脉，每根肺静脉平均消融(1.89±0.31)次，平均消融时间为(277.34±38.94) s，平均最低温度为(-48.19±3.95)℃。总计135(66.2%)例患者在冷冻过程中监测到肺静脉隔离时间（TTI），平均TTI时间为(35.41±13.00) s。在中位随访37(25,46)个月后，房颤复发率为20.1%(41/204)。复发组男性占比、血红蛋白低于未复发组，平均最低温度高于未复发组，差异有统计学意义（P=0.013;P=0.045;P=0.001）。在记录到TTI时间的患者中，复发组TTI时间长于未复发组（P=0.037）。多因素回归分析显示，平均最低温度（OR=1.174,95%CI:1.063～1.297,PExternal fungal otitis media=0.002）是二代冷冻球囊术后房颤复发的独立预测因素，平均最低温度>-42.87℃可以预测房颤复发。结论：二代冷冻球囊消融是治疗房颤的安全、高效的手段。复发组及未复发组患者在男性占比、血红蛋白、平均最低温度、平均TTI时间均有显著差异。平均最低温度是房颤复发的独立预测因素，平均最低温度>-42.87℃可预测房颤复发，敏感性为36.6%，特异性为96.3%。

为筛选出适宜在陇东旱作区种植的胡麻种质，本研究对PL1071、PL1051、PL1015、PL1053、08008、同亚20号、内亚14号、固亚17号、坝亚20号和陇亚13号共10个胡麻种质的生产性能和营养性状进行研究。结果表明，供试胡麻种质的籽粒产量介于1.02 t/hm~(2)～1.37 t/hm~(2)之间，其中PL1071的籽粒E7080纯度产量最高，其次为PL1051和PL1015，内亚14号的籽粒产量最低。此外，不同胡麻Japanese medaka种质的营养性状差异明显，其含油率介于37.85%～43.25%之间，棕榈酸含量介于5.16%～6.59%之间；硬脂酸含量介于4.06%～6.80%之间；油酸含量介于23.30%～29.54%之间；亚油酸含量介于14.18%～16.27%之间；亚麻酸含量介于44.34%～50.19%之间。通过灰色关联度分析法对其生产性能和营养性状进行综合评价，发现胡麻新品系PL1071在陇东旱作区的籽粒产量高，营养性状好，适宜于陇东旱作区种植。本研究为培育适宜于陇东旱作区种植更多的胡麻新品种提供一定的参考。

目的 探讨大鼠椎板切除术后预防性局部使用羟基脲(HU)的疗效。方法 选取8周龄SD大鼠36只，随机分为A组(对照)、B组(15 mg/mL HU)、C组(30 mg/mL HU)。制备椎板切除术模型；暴露硬脊膜后，A组生理盐水冲洗后逐层关闭术区，B、C组分别以浸湿不同浓度的HU棉垫放入术区内5 min后移除，逐层闭合术MCC950区。观察手术前后大鼠脊髓评genetic population分的变化。术后4周，通过一般观察、苏木精-伊红(HE)染色、成纤维细胞计数、天狼猩红染色和免疫组织化学染色来评估术后硬膜外粘连情况。结果 各组手术前后的大鼠脊髓评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)。大体观察和HE染色显示，与A组相比，B、C组大鼠术区硬膜外粘连程度明显减轻。采用Image J对各组成纤维细胞计数，与A组相比，B、C组成纤维细胞数量呈浓度依赖性下降，差异有统计学意义(P<0.001或P<0.000 1);与B组比较，C组成纤selleck Ipatasertib维细胞数量更低，差异有统计学意义(P<0.01)。天狼猩红染色显示B、C组中Ⅰ型胶原纤维显著减少，Ⅲ型胶原纤维表达增多。结论 大鼠椎板切除术后局部应用HU可以减缓硬膜外纤维化的发生。

背景和目的:非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种无过量饮酒史,以肝细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征,非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一种高级形式,可发展为肝硬化和肝细胞癌(HCC)。据估计,全球超过25%的人口患有NAFLD,并有发展为NASH的风险,给社会造成了巨大的医疗和经济负担~([1])。与单纯的脂肪肝相比,NASH的特点是广泛的炎症和明显的肝细胞死亡,从而进一步促进肝纤维化的发展。NAFLD的基本治疗原则是改变生活方式、坚持运动、减轻体重等,目前尚没有明确的特效药物治疗,NASH发展过程中的分子机制仍有待充分了解。EF手性域家族成员D2(EFHD2),也被称为swiprosin-1,是钙结合EF-hand钙离子结合蛋白超家族的一员。EFHD2最早在淋巴细胞中被发现~([2]),在T淋巴细胞中,EFHD2与程序性细胞死亡1(PD-1)的相互作用是T细胞介导的细胞毒性和抗肿瘤免疫反应所必需的~([3])。除了淋巴细胞,越来越多的研究~([4-8]),包括我们的研究,已经发现EFHD2在巨噬细胞/单核细胞中高度表达,参与巨噬细胞的迁移和炎症因子的分泌。我们前期研究发现,EFHD2在NASH患者中表达增高,提示EFHD2可能参与了NASH的发展进程。在本文中,我们探究了EFHD2在NASH发展过程中的作用及相关分子机制,期待为后期NASH治疗药物的靶点提供新思路。实验方法及结果:1.NASH患者和NASH模型小鼠肝脏组织中EFHD2表达升高本实验在上海市第十人民医院收集了10个不患有NASH但有其他疾病的患者和10个患有NASH的患者肝脏样本,该研究得到了上海市第十人民医院伦理委员会的批准(批准文号:SHSY-IEC-4.1/19-126/01)。动物实验使用C57BL/6J小鼠,利用胆碱缺乏、左旋氨基酸高脂饲料(CDAHFD)和高脂肪高胆固醇饲料(HFHC)两种饮食诱导小鼠NASH模型,饲喂16周后收集小鼠肝脏样本。利用蛋白免疫印迹、RT-q PCR以及免疫组化等手段检测肝脏组织上EFHD2的表达,PLX-4720采购发现NASH患者和NASH模型小鼠肝脏组织中EFHD2的蛋白水平和m RNA水平均升高,该结果提示:EFHD2可能参与了NASH发展进程。2.EFHD2基因敲除可以缓解CDAHFD和HFHC诱导的小鼠NASH进程利用重组技术从含有EFHD2基因(C57BL/6J自交系)的细菌人工染色体(BAC)中生成一个基因靶向结构。用该结构转染E14 ES细胞,将靶向ES细胞注入C57BL/6J囊胚中,在种系中携带2-4号外显子缺失的靶向等位基因的小鼠被培育成EFHD2 KO小鼠,同窝出生的野生型(WT)小鼠作为对照。本实验分别使用了胆碱缺乏、左旋氨基酸高脂饲料(CDAHFD)饮食和高脂肪高胆固醇饲料(HFHC)饮食去构建小鼠NASH模型。两种饲料造模周期均为16周,造模结束后收集血清及肝脏组织。血清中ALT和AST活力检测结果显示,CDAHFD和HFHC饲喂后WT小鼠血清中ALT、AST活力显著上升,敲除EFHD2基因后ALT、AST活力下降。HE染色结果显示,CDAHFD和HFHC饲喂小鼠肝脏损伤明显,肝细胞排列紊乱并伴随出现大量脂滴泡,敲除EFHD2基因后可以缓解CDAHFD和HFHC饲喂导致的肝脏损伤。小鼠肝脏组织油红O染色、Masson染色和天狼星红染色结果显示CDAHFD和HFHC饲喂后WT小鼠出现了明显的肝脏脂肪变性和纤维化病变,敲除EFHD2基因后可以改善CDAHFD和HFHC饲喂导致medical worker的肝脏脂肪变性和纤维化。蛋白免疫印迹和RT-q PCR检测结果显示CDAHFD和HFHC饲喂后WT小鼠肝脏的炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞核因子-κB(NF-κB p65)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的蛋白表达水平均显著上升,相关趋化因子的m RNA表达水平显著上升,包括趋化因子(C-X-C基序)配体1(Cxcl1)、趋化因子(C-X-C基序)配体10(Cxcl10)和CC类趋化因子配体5(Ccl5),在EFHD2 KO小鼠中相关炎症因子和趋化因子的表达均下降。以上结果提示EFHD2敲除后可以缓解小鼠NASH进程。3.NASH小鼠中EFHD2主要表达在肝脏巨噬细胞前期实验中人类和小鼠肝脏的EFHD2免疫组化图可以初步判断EFHD2表达在肝脏非实质细胞,所以我们想进一步判断EFHD2主要来源于肝脏哪种类型的细胞。在公开的人类图谱数据库(www.proteinatlas.org)中查阅单细胞RNA测序数据可以看出,EFHD2在正常的人类肝脏组织中主要表达在肝脏枯否细胞(Kupffer cells,KCs)和T细胞。在NASH小鼠肝脏中,EFHD2和F4/80(巨噬细胞的标志物)免疫荧光双染结果显示,大约50%-60%的EFHD2阳性细胞与F4/80共染。然而,EFHD2和αSMA(肝脏星状细胞的标志物)的免疫荧光双染或CD3(T细胞的标志物)的免疫荧光双染表明,EFHD2阳性细胞几乎没有与αSMA或CD3共染,该结果提示NASH小鼠中EFHD2主要表达在肝脏巨噬细胞。4.髓系特异性敲除EFHD2延缓CDAHFD诱导的小鼠NASH进程通过CRISPR-Cas9技术构建Efhd2~(flox/flox)小鼠,Efhd2的2号外显子两侧插入了两个loxp位点,用于cre酶介导的切除,即为Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠,同窝出生的Efhd2~(flox/flox)作为对照组。普通饲料和CDAHFD饲喂16周后,处死小鼠收集血清及肝脏组织。血清中血脂相关指标TC、TG和肝脏转氨酶ALT、AST检测结果显示,CDAHFD饲喂后Efhd2~(flox/flox)小鼠中TC、TG、ALT、AST活力水平显著上升,在Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠中该作用被抑制。HE染色结果显示:饲喂CDAHFD后,与Efhd2~(flox/flox)小鼠相比,Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠肝脏损伤减轻,肝脏脂滴泡减少。小鼠肝脏组织冰冻切片油红O染色、Masson染色、天狼星红染色结果显示:饲喂CDAHFD后,与Efhd2~(flox/flox)小鼠相比,Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠的肝脏脂肪变性和纤维化程度显著减轻。蛋白免疫印迹结果显示,CDAHFD饲喂16周后,Efhd2~(flox/flox)小鼠肝脏相关炎症因子TNF-α、IL-6、NF-κB p65、MCP-1的蛋白表达水平均显著上升,而在髓系特异性敲除EFHD2后,相关炎症因子的蛋白表达水平下降。此外,CDAHFD饲喂16周后,相关趋化因子的m RNA表达水平显著上升,包括Cxcl1、Cxcl10和Ccl5,而在髓系特异性敲除EFHD2后,相关趋化因子的m RNA表达水平下降。接下来,我们使用多色流式细胞仪研究了髓系特异性敲除EFHD2对NASH条件下肝脏巨噬细胞/单核细胞群的组成和功能的影响。根据CD11b、F4/80、Ly6C、CD64、Mer Tk、CCR2、CD163和TIM4的不同表达,确定肝脏巨噬细胞/单核细胞亚群。有趣的是,我们发现在正常饮食或NASH条件下,Efhd2~(flox/flox)小鼠和Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠在NASH肝脏中的KCs(CD45~+CD11b~(int)F4/80~(hi))比例是相当的。然而,在NASH条件下,浸润性巨噬细胞(IMs,CD45~+CD11b~(hi)F4/80~(int))的比例被诱导上升约7倍。值得注意的是,在NASH条件下,Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠与Efhd2~(flox/flox)小鼠相比,IMs的比例下降了约50%。在全部KCs中,Efhd2~(flox/flox)小鼠肝脏中TIM4~(hi)-Res KCs(CD45~+CD11b~(int)F4/80~(hi)TIM4~(hi))的比例从约95%下降到约80%,这在Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠中得到部分阻止。相反,在NASH条件下,Efhd2~(flox/flox)小鼠肝脏中TIM4~(lo)-Mo KCs(CD45~+CD11b~(int)F4/80~(hi)TIM4~(lo))的比例增加了约5倍,而这种变化在Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠中被抑制了MRTX849临床试验。此外,与Efhd2~(flox/flox)小鼠相比,Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre中的M1样IMs(CD45~+CD11b~(hi)F4/80~(int)CD64~(hi)CD163~(lo))的比例明显更低。M2样IMs(CD45~+CD11b~(hi)F4/80~(int)CD64~(lo)CD163~(hi))的比例在Efhd2~(flox/flox)Lysm-Cre小鼠和Efhd2~(flox/flox)小鼠之间没有区别。以上结果提示髓系特异性敲除EFHD2可以缓解NAFLD的疾病进程。实验结论:1.EFHD2是NASH的一个关键启动因子,在NASH患者和小鼠模型中显著诱发。2.全身性敲除EFHD2可以缓解CDAHFD和HFHC诱导的小鼠NASH发展进程。3.在小鼠NASH模型中,EFHD2主要在肝脏内的巨噬细胞中表达;4.髓系特异性敲除EFHD2后可以缓解小鼠NASH发展的进程。

目的:检测心房颤动(AF)病人与窦性心律者血清溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)的水平,分析二者与AF之间的相关性及临床意义。方法:选取2019年12月至2020年7月于蚌埠医学院第一附属医院心血管内科住院的AF病人118例作为观察组,根据相关指南分为阵发性AF组67例和非阵发性AF组51例。对照组Empagliflozin体内实验剂量取窦性心律健康者96名。选择酶联吸附免疫实验法(ELISA)测出血清中SLC7A11、FGF23浓度;比较3组病人的临床资料及血清学指标,利用Pearson相关性分析血清SLC7A11、FGF23水平与超声心动图中左房内径(LAD)、左室舒张内径(LVD)、左室射血分数(LVEF)和左室缩短分数(FS)相关性。采用多元logistic回归分析AF病人房颤发生持续相关因素。结果:1.与对照组相比,血清SLC7A11在阵发性AF组和非阵发性AF组均下降(P<0.01),且非阵发性AF组中SLC7A11低于阵发性AF组(P<0.01),血清FGF23在阵发性AF组和非阵发性AF组均升高(P<0.01),且非阵发性AF组中FGF23高于阵发性AF组(P<0.01)。2.Pearson相关性分析显示,LAD与血清SLC7A11呈负相关(r=-0.534,P<0.fatal infection01),与血清FGF23呈正相关(r=0.532,P<0.01)。3.多元Logistic回归分析结果显示,SLC7A11Gefitinib临床试验是AF独立的保护因素(OR=0.231,P<0.01),而FGF23是独立危险因素(OR=1.097,P<0.01)。结论:SLC7A11、FGF23可能与AF的发病、进展有关。

研究背景:铁死亡是近年来发现的一种铁依赖的程序性细胞死亡,以脂质过氧化为特征,在肿瘤和炎性疾病中发挥重要作用,但在慢性鼻窦炎中的作用尚不明确。研究方法:通过免疫组化和Western blot分析各组临床组织中铁死亡调控分子的表达及分布。免疫荧光验证15-脂氧合酶(ALOX15)等分子在巨噬细胞中的共定位情况。透射电镜观察巨噬细胞线粒体的形态学特征。构建人外周血单个核细胞(PBMC)和THP-1细胞系来源的巨噬细胞模型,采用流式细胞术等方法验证细胞模型。通过RSL3诱导巨噬细胞铁死亡,并利用ALOX15抑制剂PD146176等验证ALOX15对M2型巨噬细胞铁死亡和炎症反应的调控作用。通过转录组测序探索ALOX15对巨噬细胞调控的信号通路。CCK-8和LDH释放量分析各亚型巨噬细胞对铁死亡的敏感性。使用BODIPYTM 581/591 C11分析ALOX15对巨噬细胞脂质过氧化的调控,并通过ELISA验证铁死亡对巨噬细胞CCL18分泌水平的影响。研究结果:1.eCRSwNP中ALOX15和酰基辅酶a合成酶长链家族成4(ACSL4)等铁死亡驱动分子水平较高,而谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)等铁死亡抑制分子含量较低。2.eCRSwNP巨噬细胞内高表达ALOX15,同时透射电镜显示eCRSwNP巨噬细胞线粒体存在铁死亡形态学改变。3.转录组测序结果显示,ALOX15影响巨噬细胞的趋化因子的分泌功能,同时也影响铁死亡相关分子溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)的表达。4.与M0和M1型巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞对RSL3引起的铁死亡更敏感,ALOX15的抑制剂能够挽救细胞铁死亡的发生。5.NSC 127716使用方法ALOX15通过影响脂质过氧化水平介导M2型巨噬细胞铁死亡,此外铁死亡可影响巨噬细胞对趋化因子above-ground biomass配体(CCL18)的分泌功能。结论:eCRSwNP中巨噬细胞存在铁死亡相关分子学和形态Immunology & Inflammation抑制剂学改变,M2型巨噬细胞对铁死亡更为敏感。而ALOX15可通过介导脂质过氧化参与M2型巨噬细胞的铁死亡调控,铁死亡可影响M2型巨噬细胞分泌CCL18的能力。

目的 检测微小RNA-543(miR-543)在胃癌中的表达及预后价值，进一步探讨miR-543对胃癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响和作用机制。方法 选取河北医科大学第四医院2019-06-01-2021-10-31收治的50例胃癌组织和癌旁正常黏膜组织作为研究对象，采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测50例胃癌和癌旁正常黏膜组织中miR-543的表达，记录患者术后接受替吉cancer – see oncology奥(5-FU衍生物)联合奥沙利铂(SOX)方案化疗的无病生存期(DFS)。培养正常胃上皮细胞株GES-1、胃癌细胞株AGS和对5-FU耐药细胞株AGS/5-FU,用qRT-PCR法检测miR-543的表达；在miR-543抑制物转染AGS/5-FU细胞株后，用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测AGS/5-FU对5-FU的敏感性；qRT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后AGS/5-FU细胞selleck激酶抑制剂中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、无精症相关蛋白2(DAZAP2)、p53、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和胸苷酸合成酶(TS)的表达。生物信息学分析miR-543的靶向基因，并用双荧光素酶报告基因分析对其进行验证。通过DAZAP2回复实验进一步验证miR-543的作用。采用配对t检验比较miR-543在胃癌组织与癌旁正常组织的表达差异；采用独立样本t检验比较抑制miR-543后胃癌5-FU敏感性的差异；采用单因素方差分析探究调控miR-543表达后，Bcl-2、Bax、DAZAP2、p53、MRP1、TS的表达差异。结果 miR-543在胃癌组织中的表达水平(1.031±0.408)高于癌旁正常组织(0.236±0.056),t=13.640,P<0.001;高表达miR-543的患者DFS短于低表达miR-543患者，P=0.008。qRT-PCR法结果显示：miR-543在AGS/5-FU细胞中的表达水平(7.223±1.260)高于GES-1(1.306±0.285)和AGS细胞(3.286±1.166),F=16.050,P=0.004;抑制AGS/5-FU细胞株中miR-543的表达后，AGS/5-FU细胞对5-FU的敏感性(0.452±0.168)增加，F=12.003,P=0.008。生物信息学分析结果显示，DAZAP2是miR-543的直接靶基因。蛋白质印迹法和qRT-PCR法结果显示，在抑制miR-543表达后，AGS/5-FU细胞中Bcl-2、TS表达减少，Bax、DAZAP2、p53表达增加，MDorsomorphinRP1表达无明显变化。双荧光素酶报告基因分析证实miR-543对DAZAP2有直接调控功能。在AGS/5-FU细胞中抑制miR-543的同时过表达DAZAP2,发现对5-FU的敏感性增加，Bcl-2、TS、Bax、p53等蛋白的表达有所恢复。结论 miR-543可能通过抑制DAZAP2基因参与胃癌细胞5-FU耐药的形成。