骨骼肌是人体的重要组成部分,是进行运动、代谢等生命活动所必需的器官。临床上,肌肉损伤和肌肉退行性病变的预防和治疗过程中,还存在很多难以克服的问题,解决这些问题的钥匙是研究骨骼肌生长发育的分子机制。Egr1广泛表达于多种类型的细胞中,参与细胞增殖、分化、侵袭和凋亡等重要生理过程。实验室前期研究工作证明Egr1能hepatitis b and c够促进C2C12细胞的分化,进一步研究表明,Egr1在小鼠成肌细胞的增殖过程中也发挥作用。因此选择通过C2C12细胞和小鼠肌肉损伤修复模型来研究Egr1对小鼠成肌细胞增殖的影响及作用机制,以期为肌肉损伤及肌肉相关疾病的治疗提供理论依据。主要研究内容包括:(1)采用Western blotting技术检测Egr1在C2C12细胞增殖过程中的蛋白表达规律。(2)构建Egr1的过表达及干扰载体,Western blotting、Ed U、流式细胞术检测Egr1对C2C12细胞增殖的影响。(3)利用染色质免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因技术验证Egr1与Pax7启动子区的结合。(4)在C2C12细胞增殖过程中过表达和干扰Egr1,Western blotting检测Egr1对Pax7调控情况。(5)Western blotting、免疫组织化学染色检测Egr1和Pax7在小鼠肌肉损伤修复过程中的表达定位及Egr1对Pax7的调控情况。结果表明:(1)在C2C12细胞增殖过程中,Egr1蛋白表达量逐渐升高,增殖培养24 h时达到最高值,与增殖相关标志蛋白CCNB1、PCNA表达规律一致,证明Egr1可能参与C2C12细胞增殖过程的调节。(2)过表达Egr1后,CCNB1、PCNA的蛋白水平显著上升,Ed U检测结果显示细胞增殖率升高,流式细胞术检测结果显示处于S期的细胞比例显著升高;抑制Egr1后,CCNB1、PCNA的蛋白水平显著下降,Ed U检测结果显示细胞增殖率降低,流式细胞术检测结果显示处于S期的细胞比例显著下降。表明Egr1可以调节C2C12细胞的增殖。(3)染色质免疫共沉淀结果证明:Egr1在Pax7启动子区上预测的两个结合位点是正确的;双荧光素酶报告基因检测显示在Pax7启动子区上的两处Egr1结合位点同时或单独突变后,荧光素酶活性都显著降低,证明Egr1可以结合到Pax7启动子区的两个结合位点。(4)过表达和干扰Egr1后,Pax7的蛋白表达量随之升高和降低,证明Egr1能够调控Pax7的表达。(5)Western blotting检测结果显示在肌肉损伤修复selleck产品过程中,Egr1与Pax7蛋白表达规律一致,从损伤第0天到第3天逐渐升高,于第3天达到峰值,通过损伤位点注射IGF1上调Egr1表达水平后,Pax7蛋白表达量显著升高。免疫组织化学染色结果显示在肌肉损伤第3天,损伤部位的Egr1和Pax7在www.selleck.cn/products/cx-5461肌肉卫星细胞中的阳性信号最强。证明在小鼠肌肉损伤修复过程中,Egr1可通过调控Pax7的表达来调节肌肉卫星细胞的增殖。体内、体外研究证明Egr1可以通过结合到Pax7基因启动子区调控其表达,促进小鼠骨骼肌卫星细胞的增殖,加快骨骼肌的损伤修复过程。