研究目的种植体周围炎(peri-implantitis,PI)指发生在种植体周围与菌斑相关的病理状态,以种植体周围黏膜炎症和进行性支持骨组织丧失为特征。种植体周围堆积的细菌是发生种植体周围炎的始动因子。在形成生物膜的过程中,细菌会分泌一类自诱导信号分子(autoinducer,AI)。其中N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl homoserine lactone,AHL)主要由革兰氏阴性菌分泌,调控细菌的增殖黏附,生物膜的形成等其他特定的生物学行为。N-酰基高丝氨酸内酯酶(N-acyl homoserine lactonase,AHLlactonase)是针对AHL分子的淬灭酶,靶向水解AHL结构中的高丝氨酸内酯环,阻断自诱导信号分子的传递,干扰群体感应系统,从而抑制细菌形成生物膜的能力。目前,已经有研究证实AHL内酯酶显著抑制铜绿假单胞菌、伯克氏菌、胡萝卜软腐欧文氏菌、果胶杆菌等生物膜的形成和致病性,但其在口腔微生物领域的研究较少。因此本课题的研究目的是探究Est816对种植体周围优势致病菌之一的牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas.gingivalis,P.gingivalis)生理活动的作用,如代谢、成膜和毒力等,并研究Est816对犬种植体周围炎的影响,为Est816应用selleck AZD6738于牙周致病微生物的控制和有效防治牙周炎和种植体周围炎提供理论依据。方法5,9和15U/ml的Est816与P.gingivalis悬浮液于圆形钛片表面分别共培养48h,通过结晶紫染色,激光共聚焦,扫描电镜,XTT检测法和CFU菌落计数法分别检测Est816对生物膜量和生物膜结构的影响;苯酚-浓硫酸法和定量PCR检测Est816对P.gingivalis产生的毒力因子,如胞外多糖(extracellular polysaccharide,Eselleckchem GSK1349572PS),鞭毛蛋白(fimbriae,fim A),精氨酸依赖性牙龈素(gingipain R,rgp A)和赖氨酸依赖性牙龈素(gingipain K,kgp)的表达的影响。CCK-8检测Est816对人牙周膜干细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和实时定量PCR检测Est816能否抑制P.gingivalis刺激引起的人牙周膜干细胞中炎性因子表达。体内实验,通过丝线结扎结合P.gingivalis菌液法建立犬种植体周围炎模型,将犬种植体分为对照组(不结扎),PBS组(结扎+PBS),P.gingivalis组(结扎+P.gingivalis菌液)和Est816组(结扎+P.gingivalis菌液+Est816),在结扎后间隔2周进行临床指标检测记录种植体情况,在2个月时取种植体进行微型计算机断层扫描(MicBrassinosteroid biosynthesisro-computed tomography,Micro-CT),并进行HE和甲苯胺蓝染色,评估各组种植体周围软组织的炎症情况和周围骨组织附着和丧失情况。结果1.结晶紫染色,激光共聚焦,扫描电镜,XTT检测法和CFU菌落计数法显示,Est816在实验活性范围内(5-15U/ml)显著抑制钛片表面P.gingivalis生物膜的形成(P(27)0.01);2.Est816(9U/ml和15U/ml)能有效抑制P.gingivalis相关毒力因子的产生,如EPS,fim A,rgp A和kgp(P(27)0.01);3.CCK-8结果证明5,9U/ml的Est816对人牙周膜干细胞的增殖影响无统计学差异,具有良好的生物相容性;4.ELISA和PCR结果表明,Est816减弱P.gingivalis菌液对人牙周膜干细胞的刺激作用。Est816作用人牙周膜干细胞12h后,肿瘤坏死因子α,白介素1β,白介素6和白介素8的表达均显著降低(P(27)0.05)。5.Micro-CT结果显示Est816组未有明显种植体周围骨吸收,牙槽骨高度正常,验证了Est816组种植体周围骨附着良好。HE染色显示Est816组有效抑制种植体周围炎,龈沟上皮形态完整,临床指标检测与对照组相比,无显著差异。甲苯胺蓝染色结果显示Est816组种植体周围新骨形成明显,板层骨结构良好。结论1.Est816抑制钛片表面P.gingivalis生物膜的形成和毒力因子的表达;2.9U/ml的Est816抑制P.gingivalis引起的人牙周膜干细胞炎症反应,并且具有良好的生物相容性;3.Est816有效控制犬种植体周围软组织炎症反应和骨吸收。综上所述,Est816通过减少菌斑生物膜的形成,降低种植体周围炎主要致病菌毒力因子的表达和释放,从而抑制种植体周围炎并提高种植体稳定性,为预防和治疗种植体周围炎提供新的研究方向。