achr抑制剂

目的 探讨小剂量低分子肝素治疗极低出生体重败血症患儿的临床效果。方法 选取2021NSC 119875半抑制浓度年2月至2022年12月广东省惠州市第一妇幼保健院新生儿科收治的80例极低出生体重败血症患儿作为研究对象，按照随机数字表法分为对照组与观察组，每组各40例。对照组采用注射用头孢哌酮钠治疗，观察组在对照组基础上加用小剂量低分子肝素治疗。比较两组治疗效果、炎症指标、肝肾功能指标及复发率。结果 观察组总有效率高于对照组（P <0.05）。治疗后，两组白细胞计数、降钙素原、C反应蛋白均低于治疗前，且观察组低于对照组（P <0.05）NBVbe medium。治疗后，GNE-140浓度两组谷丙转氨酶及血清肌酐均低于治疗前（P <0.05）；治疗后，两组肝肾功能指标比较，差异无统计学意义（P> 0.05）。观察组复发率低于对照组（P <0.05）。结论 极低出生体重败血症患儿采用小剂量低分子肝素治疗可改善炎症指标、降低疾病复发率、提高治疗效果。

研究背景与目的口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cNSC 127716临床试验ell carcinomaCobimetinib IC50,OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,其转移及致死率均较高.目前常用的治疗手段以手术治疗为主,放,化疗为辅,但肿瘤所在解剖部位及放化疗所带来的毒副反应严重影响了口腔鳞癌患者的生存质量.近年来热疗(Hyperthermia,HT)作为一种无创且副反应小的疗法得到了广泛的研究及临床应用,这些结果证明热疗能够有效增敏放化疗的疗效,促进肿瘤细胞死亡.目前细胞死亡主要分为调节性细胞死亡(regulated cell death,RCD)或程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)和细胞意外死亡(accidental cell death,ACD)两大类.根据加热温度,一般将热疗分为温热治疗(41～45℃)和热消融治疗(55℃以上),研究表明较高温度下细胞死亡以ACD为主,随着温度的降低细胞死亡转变为以PCD为主.其中铁死亡是被重点关注的一个因素.铁死亡(Ferroptosis)是一种铁依赖的PCD形式,活性氧(reactive oxygen species,ROS)引起的脂质过氧化反应是目前公认的铁死亡的生化标志.研究表明,通过激活p53/Tf R1轴可调节细胞内铁水平进而调控铁死亡进程.p53是重要的抑癌基因,在多种肿瘤尤其是头颈鳞癌中高度突变,不能发挥抑癌作用,而转铁蛋白受体1(Transferrin receptor 1,Tf R1)在肿瘤中的高表达常与不良预后有关,并被认为是一种新的肿瘤治疗靶点.本研究旨在通过分子生物学方法探究HT对OSCC铁死亡的调控作用及相关机制,进一步探究热疗引起的铁死亡对OSCC生物学行为的影响,为OSCC的治疗提供新的靶点,为口腔鳞癌的临床治疗提供新的治疗思路.实验方法1.通过生信数据库进行检索,得到铁死亡的相关蛋白互作网络,分析相关因子在癌及癌旁组织(肿瘤边缘0.5cm)中表达差异情况,并对相关通路进行验证.2.临床收集口腔鳞癌患者病理组织切片,免疫组织化学染色法检测口腔鳞癌的癌和癌旁(肿瘤边缘)正常组织中Tf R1,HSPA8表达水平.3.CCK-8法检测铁死亡抑制剂Ferrostain-1(Fer-1)的半数抑制浓度IC_(50).4.通过活性氧检测试剂盒检测各分组细胞活性氧表达水平.5.铁离子浓度检测试剂盒检测各组细胞铁离子浓度.6.q RT-PCR和WB检测各处理组中,HT对细胞铁死亡通路的调控作用.7.细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力.8.流式细胞(Annexin V FITC/PI双染)凋亡试剂盒检测各组细胞的细胞凋亡量.实验结果1.STRING数据库检索得到p53/Tf R1/HSPA8蛋白互作网络,TIMER数据库检索结果示Tf R1,HSPA8在头颈鳞癌中显著高表达,p53无显著差异.2.IHC结果显示,HSPA8和Tf R1在OSCC组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(肿瘤边缘0.5cm).3.CCK8法测定Fer-1在Cal-27细胞系中的IC_(50)值为1.184μmol/L,并用于后续实验.4.活性氧检测试剂盒检测各组细胞活性氧表达水平,结果显示HT组ROS明显升高(P<0.01),HT+Fer-1组ROS与HT组相比明显降低(P<0.01).5.铁离子浓度检测试剂盒检测结果显示,HT组铁离子浓度明显高于Control组(P<0.001),HT+Fer-1组铁离子浓度与HT组相比明显降低(P<0.01).6.q RT-PC和WB检测各组细胞铁死亡相关基因,目标信号通路基因及蛋白表达,结果显示:HT组铁死亡抑制基因GPX4,SLC7A11表达量降低(P<0.05),铁死亡相关信号通路分子p53,Tf R1及HSPA8的基因及蛋白表达量上调(P<0.05);HT+Fer-1组铁死亡抑制基因GPX4,SLC7A11表达量较HT组升高(P<0.05),而铁死亡相关信号通路分子p53,Tf R1及HSPA8的基因及蛋白表达量降低(P<0.05).7.细胞划痕实验结果显示HT可明显降低口腔鳞癌细胞的迁移能力(P<0.05),HT+Fer-1组迁移能力恢复(P<0.05).8.用流式细胞法检测细胞的凋亡情况,结果显示:HT组细胞凋亡率明显提高(P<0.05),HT+Fer-1组凋亡率较HT组明显降低(P<0.05)结论1.人OSCC组织中Tf R1,HSPA8表达量显著高于癌旁组织,可能与肿瘤形成有关.2.43℃HT可上调细胞内ROS以及相关细胞因子促进CAL-27发生铁死亡.3.association studies in genetics43℃热疗可通过激活p53/Tf R1/HSPA8通路诱发CAL-27细胞铁死亡.4.43℃热疗可能通过诱导CAL-27细胞铁死亡从而抑制CAL-27细胞的迁移能力,并促进其凋亡.

研究背景及目的免疫球蛋白A肾病(Immunoglobulin A Nephropathy,IgAN)是一种累及肾脏的自身免疫性疾病,以大量IgA颗粒和免疫复合物沉积在肾小球系膜为主要特征,是最常见的原发性肾小球肾炎之一。目前,IgAN的病因和发病机制尚未完全阐明。铁死亡是一种铁依赖性的调节性细胞死亡,涉及基因、蛋白水平等方面调节,与脂质活性氧的异常累积有关,继而产生氧化应激导致细胞死亡。研究表明,在多种肾病的发生发展过程中可出现不同程度的铁过载及脂质过氧化等铁死亡特征。据报道,铁死亡可能参与多种自身免疫性疾病的发生。然而,铁死亡在IgAN发病中的作用及其相关调节机制尚缺乏相应研究证据。因此,本研究探究铁死亡基因与IgAN病理分型和重要临床指标之间的关系,从而为IgAN的诊断和治疗提供参考。研究方法本研究分为三个部分。第一Barasertib说明书部分首先利用高通量测序数据集结合生物信息学方法,基于GEO平台中的IgAN的GSE93798数据集筛选出DEG。结合已公开的铁死亡基因数据库,取交集确定铁死亡相关DEG。使用DAVID在线工具进行GO功能和KEGG通路富集分析,应用STRING进行PPI蛋白互作分析,进一步确定hub基因。使用CIBERSORT探讨IgAN组和对照组之间免疫细胞标志物表达的差异,估计免疫细胞和铁死亡相关DEG之间的相关性。第二部分应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)分别检测55例IgAN患者、55例系统性红斑狼疮患者和55例健康对照的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中铁死亡相关DEG的表达水平。应用受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线评价铁死亡相关基因作为诊断IgAN的效能。第三部分分析铁死亡基因表达水平在不同病理分型和不同疾病史的差异,以及与IgAN患者的重要临床指标的关联。研究结果第一部分,共筛选出348个差异表达基因,其中241个上调基因,107个下调基因。基于已公开的铁死亡公共数据库,取交集进一步筛选出18个铁死亡相关的DEGs,基于PPI蛋白互作分析以及MCC算法,最终枢纽基因确定为IL1B、JUN、ATF3、CDKN1A、TMicrobiology抑制剂NFAIP3。免疫浸润分析表明,JUN,ATF3,CDKN1A和TNFAIP3与中性粒细胞相关性最强。第二部分,PCR实验结果表明,铁死亡基因ATF3(P<0.001)、IL1B(P<0.001)、JUN(P<0.001)和TNFAIP3基因(P=0.002)在IgAN组表达水平低于健康对照,差异具有统计学意义。ROC曲线分析表明,IL1B、JUN、ATF3的曲线下面积(Area under the curve,AUC)均在0.7以上,分别为0.763,0.738和0.789。IL1B、JUN和ATF3基因联合诊断价值较高。将SLE病例作为疾病对照,结果表明IL1B(P<0.001)、ATF3(P<0.001)和TNFAIP3基因(P<0.001)在SLE组表达水平高于IgAN,差异具有统计学意义。JUN(P<0.001)和CDKN1A基因(P=0.004)在IgAN组表达水平高于SLE组,差异具有统计学意义。ATF3和TNFAIP3的AUC值分别为0.776和0.743。第三部分,病理类型表现为细胞纤维性新月体占肾小球总数百分比为1-24%(C1)的患者PBMC中IL1B表达水平高于无新月体患者(C0)。在Lee氏分型中,更严重的肾小球新月体和硬化、肾小管和肾间质病变的IgAN患者的IL1B表达水平更高(Ⅳ型vsⅢ型)。EGFR和铁水平与IL1B基因表达水平呈负相关。JUN基因表达水平与葡萄糖苷酶和尿微量白蛋白呈正相关,但与血红蛋白水平呈负相关。CDKN1A基因表达水平与钠、铁和总蛋白呈负相关。有肾病家族史的IgAN患者TNFAIP3表达水平低于没有肾病家族史的IgAN患者。结论(1)铁死亡基因IL1B、JUN、ATF3,CDKN1A和TNFAIP3与免疫细胞相关。JUN,ATF3,CDKN1A和TNFAIP3与中性粒细胞相关性最强。(2)与健康对照组相比,IgAN患者PBMCs中的IL1B、JUN、ATF3和TNFAIP3表达水平降低。IL1B、JUN、ATF3对区分Landfill biocoversIgAN和健康对照的诊断价值较高。IL1B、ATF3和TNFAIP3在SLE组表达水平高于IgAN组;JUN和CDKN1A基因在IgAN组表达水平高于SLE组。ATF3和TNFAIP3基因联合诊断价值较高。(3)IL1B表达水平在牛津分型为C1的患者中高于C0,Lee氏分型Ⅳ型患者Ⅲ高于Ⅲ型。有肾病家族史的IgAN患者TNFAIP3表达水平低于无肾病家族史的IgAN患者。IL1B、JUN和CDKN1A表达水平与IgAN的重要临床指标存在关联。综上所述,本研究结果表明铁死亡相关基因在IgAN中存在异常表达,且与该病多种临床特征存在关联,为IgAN的预防、诊断和治疗提供新的思路。

为探究凡纳滨对虾机体糖代谢途径，采用注射葡萄糖法，分析凡纳滨对虾血清生化指标及糖代谢酶活力的变化。根据葡萄糖注射浓度，分别设置低浓度组(V组，0.3μmol/g)、高浓度组(K组，1.5μmol/g)及对照组(S组，0.7%无菌生理盐水组),注射后于0,1,3,6,9,12,24 h取样分析。结果显示：注射葡萄糖后，凡纳滨对虾血糖先升高后降低，高、低浓度组变化趋势相同，在1 h达到峰值，恢复至基础水平时间不同。与生理盐水组相比，低浓度组胰岛素在3 h达到峰值，高浓度组胰岛素在6 h达到峰值，后显著下降。低剂量组肝糖原含量呈先升高后下降趋势，6 h恢复正常。高selleckchem剂量组在6 h达到峰值后下降至初始状态。肌糖原含量无显著差异。己糖激酶、丙酮酸酶、醛缩酶均呈先上升后下降趋势，磷酸果糖激酶活力在注射葡萄糖后没有发Cellobiose dehydrogenase生变化。注射葡萄糖后高浓度组葡萄糖-6磷酸酶(G6pase)含量在6 h高于其他组。果糖1,6-二磷酸酶(FBpase)活力呈先上升后下降趋势。2个葡萄糖剂量组磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)活力变化不显著。研究结果表明，高糖导致凡纳滨对虾体内糖异生代谢混乱，肝糖原含量持续升高，胰岛素释放MRTX1133 molecular weight延迟。这可能是凡纳滨对虾表现出高糖不耐受的原因之一。

为探讨盐度变化对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏基因转录表达的影响，将体质量为(59.68±1.32) g的大黄鱼从盐度25转入盐度36或10的水体中暴露24 h，采用Illumina Hiseq 2500对肝脏样本进行转录组测序。结果显示，从高盐vs.对照组(H vs. Raf抑制剂C)、低盐vs.对照组(L vs. C)和高盐vs.低盐(H vs. L)中分别筛选出71个、180个和438个差异基因(DEGs)。GO (Gene Ontology)和KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析发现，H vs. C中的DEGs显著富集在三羧酸循环、MAPK信号通路、内质网蛋白加工和Toll样受体信号通路等；L vs. C中的DEGs显著富集在FoxO信号通路、戊糖磷酸途径、mTOR信号通路、RNA 降解、P53信号通路和内质网蛋白加工等，表明大黄鱼对高盐和低MK-4827临床试验盐胁迫的响应均涉及到糖类代谢、内质网应激、细胞凋亡和自噬等生理功能。H vs. L中的DEGs显著富Disease biomarker集在内质网蛋白加工、FoxO信号通路、甘油脂代谢、糖酵解/糖异生、吞噬体和P53信号通路等，表明大黄鱼在高盐和低盐适应过程中，内质网应激、脂类代谢、糖类代谢、细胞凋亡和自噬等生理功能存在差异。本结果可为深入研究鱼类对盐度胁迫的响应机制奠定基础。

目的:探究美洲大蠊糖蛋白(Periplaneta americana glycoprotein,PAG)抗运动性疲劳作用,为PAG的研发应用提供理论依据。方法:1.在模拟胃、肠消化环境下,考察PAG的总还原能力,DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率;2.采用体外发酵实验,考察PAG对植物乳杆菌和青春双歧杆菌的增殖促进作用,及对菌液p H值、总酸含量、乳Panobinostat临床试验酸和短链脂肪酸(乙酸、丙酸和丁酸)含量的影响;3.建立小鼠游泳疲劳实验模型,研究PAG对小鼠负重游泳时长和肝脏状态的影响;HE染色观察小鼠肝细胞氧化损伤情况;用紫外分光光度计和酶标仪检测小鼠体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肌糖原(muscle glycogen,MG)、肝糖原(liver glycogen,LG)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)和乳酸(lactic acid,LA)的表达水平;4.建立气相色谱-质谱(GC-MS)法,检测运动疲劳小鼠粪便中短链脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸和戊酸)含量;采用16S r RNA高通量测序技术,分析小鼠肠道内含物中肠道菌群结构和丰度的变化;绘制Spearman相关性聚类热图,分析肠道菌群、SCFAs和抗疲劳相关指标之间的关系。结果:1.PAG在模拟胃、肠环境下的抗氧化活性:(1)胃空白组、胃蛋白酶组与胃酸组的总还原能力、DPPH和羟自由基清除率无明显差异,但胃蛋白酶组的ABTS自由基清除率明显高于胃酸组与胃空白组(P<0.01);(2)胰蛋白酶组的总还原力、羟自由基和ABTS自由基清除率均高于肠空白组,DPPH自由基的清除能力无明显变化;2.PAG对植物乳杆菌、青春双歧杆菌体外增殖作用的影响:(1)与空白对照组相比,PAG浓度在0.5～2.0 mg/m L范围内,对植物乳杆菌增殖以及菌液中乳酸和短链脂肪酸(SCFAs)产量具有较好的促进作用。PAG浓度为1.0 mg/m L时,促菌生长效果最佳,菌液中总酸、乳酸和SCFAs的含量也达到最大,优于菊粉;(2)相较于空白对照组,PAG在1.0～4.0 mg/m L浓度范围内,对青春双歧杆菌增殖以及菌液中总酸、乳酸和SCFAs产量有较好的促进作用。PAG浓度为2.0 mg/m L时,促菌生长效果最佳,菌液中总酸、乳酸和SCFAs产量达到最大,优于同浓度菊粉;3.PAG的抗疲劳活性:与Control组相比,Positive、PAG-L、PAG-M和PAG-H组小鼠的负重游泳时间分别延长了15 min、12 min、27 min和27 min,肝脏系数分别下降了0.70%、0.45%、0.57%和1.04%。HE染色结果显示,Control组肝细胞排列紊乱,细胞核和细胞出现破损现象,PAG组肝细胞排列随浓度增加逐渐趋于正常。PAG组小鼠肝脏中的SOD、GSH-Px水平较Control组升高(P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01),MG和LG储备量增加(P<0.01),血清中的LDH、CK、BUN以及肌肉中的LA含量明显减少(P<0.05),均呈现剂量依赖性;4.给予运动疲劳小鼠不同浓度PAG后,粪便中SCFAs的含量较Control组有不同程度升高(P<0.05;P<0.01)。16S r RNA高通量测序结果显示,在门水平上,PAG各组较Control组小鼠肠道内含物中的Firmicutes丰度增加,分别上调了6.49%、4.31%、4.15%,Actinobacteria丰度分别下调了Whole Genome Sequencing0.39%、0.61%、-2.70%。属水平上,PAG组在不同程度上增加了Ligilactobacillus、Akkermansia和Lactobacillaceae-unclassified等细菌的相对丰度,减少了Limosilactobacillus和Desulfovibrio等细菌的相对丰度。Spearman相关性分析表明,小鼠粪便中短链脂肪酸的含量,门水平上FirmicutPuromycin体内es、Actinobacteria和Verrucomicrobiota的相对丰度,属水平上Lachnospiraceae-uncultured、Lachnospiraceae-NK4A136-group、Faecalibaculum、Akkermansia、Ligilactobacillus和Bifidobacterium的相对丰度均与SOD、GSH-PX、MG和LG的表达水平呈正相关。结论:1.模拟胃、肠环境下,PAG对ABTS自由基、羟自由基的清除能力,及其总还原能力在不同程度上均有提升,表明PAG具有一定的抗氧化活性;2.一定浓度范围内,PAG能促进植物乳杆菌、青春双歧杆菌的增殖,促进总酸、乳酸和SCFAs的分泌。3.PAG可能是通过降低肝脏氧化应激损伤,减少代谢产物堆积,提高糖原存储,从而延长小鼠负重游泳时间。4.PAG通过调节运动疲劳小鼠肠道菌群的平衡,提高益生菌丰度和SCFAs的含量,进而调节SOD、GSH-PX、MG等的表达水平,起到抗运动性疲劳的作用。综上所述,PAG可能是通过多重途径协同作用发挥抗疲劳的功效。

目的：探究富马酸二甲酯（DMF）通过调节巨噬细胞极化影响原发免疫性血小板减少症（ITP）的作用。方法：将BALB/c小鼠分为对照组、ITP组、DMF低剂量组和DMF高剂量组，每组15只，除对照组外，其余3组小鼠均构建ITP模型，DMF低、高剂量组小鼠分别以10 mg/kg、20 mg/kg DMF灌胃，1次/d，连续14 d；全自动血细胞分析仪检测小鼠外周血血小板（PLT）、红细胞（RBC）、白细胞（WBC）以及血红蛋白（Hb）水平；ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17及TGF-β1水平；电子天平称量小鼠体质量、脾脏、胸腺，计算脏器指数；HE染色观察小鼠脾脏组织和骨髓组织内巨核细胞数目；免疫荧光染色检测小鼠脾脏组织内巨噬细胞极化情况；流式细胞术测定小鼠外周血中巨噬细胞极化情况。结果：同一时间点下造模小鼠外周血血小板数量较对照组小鼠明显下降（P<0.05），说明造模成功；造模后，与对照组比较，ITP组小鼠PLT、RBC及Hb均下降，WBC升高（P<0.0GABA-Mediated currents5），血清中IFN-γ、IL-2及IL-17均升高，TGF-β1、IL-4及IL-10均下降（P<0.05），脾脏指数升高（P<0.05），脾脏与骨髓中巨核细胞数目均增加（P<0.05），脾脏组织内M1型巨噬细胞标记CD68~+CD86~+阳性表达率升高，M2型巨噬细胞标记CD68~+CD206~+阳性表达率降低（P<0.05），外周血内F4/80~+CD86~+标记细胞比例升高，F4/80~+CD206~+标记细胞比例则降低（P<0.05）；与点击此处ITP组比较，DMF低剂量组小鼠PLT升高，WBC下降（P<0.05),DMF高剂量组小鼠PLT、RBC及Hb均升高，WBC下降（P<0.05),DMF低、高剂量组血清中IFN-γ、IL-2及IL-17均下降，TGF-β1、IL-4及IL-10均升高（P<0.05），脾脏指数降低（P<0.05），脾脏与骨髓中巨核细胞数目也均减少（P<0.05），此外，脾脏组织内CD68~+CD86~+阳性表达率降低，CD68~+CD206~+阳性表达率升高（P<0.05），外周血内F4/80~+CD86~+标记细胞比例也降低，F4/80~+CD20此网站6~+标记细胞比例则升高（P<0.05）。结论：DMF能够提高ITP小鼠PLT数量，减少脾脏与骨髓内巨核细胞的增多，调节细胞因子水平，从而改善ITP，其作用机制可能与抑制巨噬细胞向M1型分化并促进向M2型分化有关。

破骨细胞刺激性跨膜蛋白(OC-STAMP)参与二氧化硅(SiO_2)暴露引起矽肺纤维化,其通过诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞铁死亡从而参与矽肺纤维化的作用及相关机制尚不明确。[目的]探讨SiO_2暴露下OC-STAMP调控肺泡Ⅱ型上皮细胞铁死亡参与大鼠矽肺纤维化的作用及可能机制。[方法]20只SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为2组,每组10只,分别为对照组(Sham组)、SiO_2组。SiO_2组大鼠通过气管非暴露法一次性给予1 mL 50 mg·L~(-1)的SiO_2混悬液建立矽肺动物模型,Sham组大鼠采用同样的方法给予1 mL0.9%氯化钠溶液,8周后处死大鼠。取左下肺固定于戊二醛或多聚甲醛,用透射电镜观察线粒体超微结构;用HE染色、Masson染色、VG染色及普鲁士蓝染色显示肺组织结构变化及铁沉积状况。通过免疫组化和免疫荧光评价OC-STAMP表达水平和肺纤维化程度。采用实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织OCSTAMP表达水平及验证OC-STAMP的转染效果。培养MLE-12细胞,通过转染OC-STAMP质粒或OC-STAMP小干扰RNA(siRNA)构建过CHIR-99021采购表达(OCS组)和抑制表达(SI-OC组)模型。采用Western blotting法检测肺组织及MLE-12中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)等蛋白的相对表达量。[结果]SiO_2暴露8周后,HE、Masson和VG染色结果显示造模成功;组织免疫荧光结果显示,OC-STAMP与ATP结合盒亚家族A成员3(ABCA3)共定位于肺泡Ⅱ型上皮中;免疫组化结果显示,SiO_2组OC-STAMP、Ⅰ型胶原表达水平与Sham组相比升高(P<0.01);实时荧光定量PCR结果显示,SiO_2组肺组织中OC-STAMP的mRNA高于Sham组(P<0.01);肺组织普鲁community-pharmacy immunizations士蓝染色结果显示在SiO_2组可见阳性棕黄色颗粒;经透射电镜观察,Sham组线粒体结构正常,SiO_2组线粒体普遍肿胀,线粒体嵴溶解、消失;肺组织免疫印迹结果显示,在SiO_2组,SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),Vimentin蛋白表达水平增加(P<0.01);在转染的MLE-12细胞中,与Sham组相比,OCS组SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.01)。[结论]OC-STAMP可能通过影响铁死亡相关蛋白表达,从而促进SiOselleck HPLC_2暴露导致的肺纤维化。

目的:利用生物信息学方法对结直肠癌(CRC)中的DNA聚合酶ε(POLE)和DNA聚合酶δ1(POLD1)的突变情况进行分析,并探索其对CRC的预后以Fer-1体外及免疫治疗的影响方法:基于TCGA数据库的数据集,利用cBioPortal工具对所有癌症中的POLE/POLD1的改变及其预后进行分析,利用MSIsensor、MINTIS两种评分系统对POLE/POLD1野生型和突变型的CRC患者微卫星不稳定性(MSI)进行评价,最后利用TIMER数据库分析CRC的免疫细胞浸润以及免疫检查点表达与POLE/POLD1突变之间相关性。结果:在CRC中POLE/POLD1基因的改变频率为6%,且均为错义突变为主,在泛癌中POLD1的突变后患者无进展生存期(P<0.001)、无病生存期(P<0.001)及疾病特异性生存期(BIOPEP-UWM databaseP=0.0178)均显著延长,CRC中POLE/POLD1的突变与微卫星不稳定性、免疫检查点的表达以及CD8+T细胞等免疫细胞的浸润相关。结论:POLE/POLD1基因的改变在CRC中较为常见,在NSC125066泛癌中POLD1的突变与患者预后相关。POLE/POLD1基因突变后可能造成微卫星不稳定性增高、免疫检查点的表达上调和免疫细胞浸润程度增加,可能成为免疫治疗的新靶点。

褐藻胶是海洋中最丰富的植物海藻的主要组成成分之一。褐藻胶可以通过化学法、物理法和生物酶法转化为褐藻寡糖,但只有生物酶法生产的褐藻寡糖生物活性最好。因此,开发高效降解褐藻胶生产褐藻寡糖的褐藻胶裂解酶具有研究意义。本研究通过序列比对与结构分析对来自于假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.Alg6B)的褐藻胶裂解酶基因Alg2944进行定点突变并获得比酶活和热稳定性提高的突变体。通过分子动力学模拟对突变体和野生型进行结构与性质分析,解释比酶活和热稳定性提高提高机制。将最优突变体通过信号肽筛选成功在枯草芽孢杆菌中分泌表达。工作的主要内容如下:(1)重组菌株E.coli BL21(DE3)-p ColdⅡ-Alg2944诱导产酶条件优化。结果表明:诱导前的预培养时间5 h左右;诱导剂IPTG在培养基中最适终浓度1.0 mmol·L~(-1);最适钙化合物CaCl_2,最适CaCl_2浓度10 mmol·L~(-1);诱导时间12 h。(2)突变株筛选及酶学性质表征。利用序列比对与结构分析对褐藻胶裂解酶Alg2944定点突变并获得比酶活较高突变体N145D、A195F、A195I、A195L和F246Y,比酶活分别为8559.2 U·mg~(-1)、12938.3 U·mg~(-1)、9753.3 U·mg~(-1)、12854.2 U·mg~(-1)和8291.7U·mg~(-1),较野生型分别提高了21.9%、84.2%、38.9%、83.0%以及18.1%;野生型和突变体N145Dwww.selleck.cn/products/Taurine、A195F和F246Y最适反应温度为40℃,突变体A195L和A195I的最适反应温度为45℃,突变体A195L和A195I在35℃与40℃下热稳优于野生型;最适p H 8.0,在p H 7.0～8.0之间p H稳定性较强;genetic constructsCa~(2+)、Mg~(2+)、Ba~(2+)对酶活有明显激活作用,Ag~+、Zn~(2+)、Co~(2+)对酶活有明显抑制作用,金属离子螯合剂EDTA明显抑制Alg2944活性。(3)分子动力学模拟。A195L在突变位点附近均方根波动(Root Mean Square Fluctuation,RMSF)低于野生型Alg2944,解释了A195L热稳优于野生型的原因;结合自由能计算发现A195L(-59.9 kcal·mol~(-1))高于Alg2944(-33.7 kcal·mol~(-1)),解释了在K_m方面A195L(2.137 mg·m L~(-1))低于Alg2944(4.122 mg·m L~(-1))的原因;溶剂可及表面积(SolvenMCC950作用t Accessible Surface Area,SASA)计算发现A195L(180.34 nm~2)低于Alg2944(193.92 nm~2),说明Leu195为催化中心入口提供了疏水袋。总之,通过A195L与野生型分子动力学分析证明了位于催化口袋入口环区的刚性与疏水性对其催化活力很重要。(4)A195L在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)中表达和酶解产物分析。通过信号肽筛选,该酶在枯草芽孢杆菌中分泌表达的最适信号肽为Npr B,在37℃下摇瓶发酵24 h发酵液上清酶活达1237.4 U·m L~(-1);酶解条件优化得出最适底物浓度10 mg·m L~(-1),在500μL的反应体系中最适酶添加量为240 U。薄层层析法(TLC)对酶解产物分析得产物为单糖、二糖以及三糖,其中单糖和二糖为最终产物。