achr抑制剂

褐藻胶是海洋中最丰富的植物海藻的主要组成成分之一。褐藻胶可以通过化学法、物理法和生物酶法转化为褐藻寡糖,但只有生物酶法生产的褐藻寡糖生物活性最好。因此,开发高效降解褐藻胶生产褐藻寡糖的褐藻胶裂解酶具有研究意义。本研究通过序列比对与结构分析对来自于假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.Alg6B)的褐藻胶裂解酶基因Alg2944进行定点突变并获得比酶活和热稳定性提高的突变体。通过分子动力学模拟对突变体和野生型进行结构与性质分析,解释比酶活和热稳定性提高提高机制。将最优突变体通过信号肽筛选成功在枯草芽孢杆菌中分泌表达。工作的主要内容如下:(1)重组菌株E.coli BL21(DE3)-p ColdⅡ-Alg2944诱导产酶条件优化。结果表明:诱导前的预培养时间5 h左右;诱导剂IPTG在培养基中最适终浓度1.0 mmol·L~(-1);最适钙化合物CaCl_2,最适CaCl_2浓度10 mmol·L~(-1);诱导时间12 h。(2)突变株筛选及酶学性质表征。利用序列比对与结构分析对褐藻胶裂解酶Alg2944定点突变并获得比酶活较高突变体N145D、A195F、A195I、A195L和F246Y,比酶活分别为8559.2 U·mg~(-1)、12938.3 U·mg~(-1)、9753.3 U·mg~(-1)、12854.2 U·mg~(-1)和8291.7U·mg~(-1),较野生型分别提高了21.9%、84.2%、38.9%、83.0%以及18.1%;野生型和突变体N145Dwww.selleck.cn/products/Taurine、A195F和F246Y最适反应温度为40℃,突变体A195L和A195I的最适反应温度为45℃,突变体A195L和A195I在35℃与40℃下热稳优于野生型;最适p H 8.0,在p H 7.0～8.0之间p H稳定性较强;genetic constructsCa~(2+)、Mg~(2+)、Ba~(2+)对酶活有明显激活作用,Ag~+、Zn~(2+)、Co~(2+)对酶活有明显抑制作用,金属离子螯合剂EDTA明显抑制Alg2944活性。(3)分子动力学模拟。A195L在突变位点附近均方根波动(Root Mean Square Fluctuation,RMSF)低于野生型Alg2944,解释了A195L热稳优于野生型的原因;结合自由能计算发现A195L(-59.9 kcal·mol~(-1))高于Alg2944(-33.7 kcal·mol~(-1)),解释了在K_m方面A195L(2.137 mg·m L~(-1))低于Alg2944(4.122 mg·m L~(-1))的原因;溶剂可及表面积(SolvenMCC950作用t Accessible Surface Area,SASA)计算发现A195L(180.34 nm~2)低于Alg2944(193.92 nm~2),说明Leu195为催化中心入口提供了疏水袋。总之,通过A195L与野生型分子动力学分析证明了位于催化口袋入口环区的刚性与疏水性对其催化活力很重要。(4)A195L在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)中表达和酶解产物分析。通过信号肽筛选,该酶在枯草芽孢杆菌中分泌表达的最适信号肽为Npr B,在37℃下摇瓶发酵24 h发酵液上清酶活达1237.4 U·m L~(-1);酶解条件优化得出最适底物浓度10 mg·m L~(-1),在500μL的反应体系中最适酶添加量为240 U。薄层层析法(TLC)对酶解产物分析得产物为单糖、二糖以及三糖,其中单糖和二糖为最终产物。

济南市是京津冀以及其周边“2+26”城市大气污染传输通道之一,随着冬季取暖清洁能源替代政策的实施,济南市优良天逐渐增多,但冬季依旧存在雾霾天频发的现象。造成雾霾天产生的主要原因是细颗粒物PM2.5浓度超标,尤其是其二次组分的浓度和占比增加对PM2.5浓度升高贡献较大,因此有必要对PM2.5中的二次组分的形成机制进一步研究。本文基于PM2.5中水溶性离子浓度在线数据,D-Lin-MC3-DMA说明书分析了 2020年冬季PM2.5中二次无机组分的污染特征,以及气态前体物和气象因素对其生成的影selleck RAD001响;并采集了 2021年冬季昼夜PM2.5样品,运用超高效液相色谱联用质谱仪定量测定了PM2.5中7种硝基苯酚类化合物,分析了其浓度水平及昼夜变化;结合量子化学Gaussian程序对二次无机组分和硝基苯酚的形成机制进行了理论研究,研究了污染天气下湿度和氨气等对二次组分生成途径及反应速率的影响。主要的结论如下:(1)济南市2020年冬季PM2.5的平均浓度为66.4±41.04μg/m3,其中二次无机组分硝酸根(NO3-)、硫酸根(SO42.)和铵根(NH4+)的平均浓度分别为14.59±11.74 μg/m3、9.26±8.52 μg/m3 和 8.39±6.61 μg/m3,在 PM2.5 中的占比分别为 21.97%、13.95%和 12.63%,NO3-在PM2.5中的占比最高。NO3-、SO42-和NH4+的质量浓度均随污染程度的加重而升高,在PM2.5浓度(209.33μg/m3)最高时,三者的总占比为66.52%。在不同污染等级下,二次无机组分的浓度以及在PM2.5中占比排序均为NO3->SO42->NH4+,重污染天气下NO3-在PM2.5中的占比最高达到24.1%。相关性分析中发现,二次无机组分与湿度相关性较强,说明在污染过程发生时,湿度有助于二次组分前体物NO2、SO2和NH3的快速转化,使得NO3-、SO42-和NH4+的浓度急剧升高,导致PM2.5污染加重。(2)济南市冬季PM2.5中7种硝基苯酚类化合物的日均总浓度ρ(ΣNPs)为45.56±13.22ng/m3,与往年监测数据相比,有所下降,但仍高于北京(41.71 ng/m3)和南京(30.95 ng/m3)等国内其他城市的检测值。7种硝基苯酚类化合物中4-硝基苯酚(4NP)的浓度最高,平均浓度为29.42±7.86 ng/m3,其余组分浓度降序排列为:4-硝基邻甲酚(6.06±2.14ng/m3)>3-甲基-4-硝基苯酚(4.87±1.73 ng/m3)>4-硝基愈创木酚(1.69±0.96 ng/m3)>3-硝基水杨酸(1.62±1.07 ng/m3)>2,6-二甲基-4-硝基苯酚(1.14±0.65 ng/m3)>5-硝基邻甲氧基苯酚(0.87±0.78 ng/m3)。昼夜浓度对比发现,ρ(ΣNPs)的大部分时间夜间高于白天,但在PM2.5污染最严重(201 μg/m3)的2022年1月9日伴随着高浓度的NO2气态前体物,ρ(ΣNPs)白天浓度明显高于夜间,说明冬季PM2.5浓度较高时,存在硝基苯酚类化合物夜间生成积累使得白天浓度升高的现象。ρ(ΣNPs)在清洁天和污染天浓度分别为43.51±14.59 ng/m3和50.09±9.76 ng/m3,且PM2.5浓度升高时,ρ(ΣNPs)也升高,除4-硝基愈创木酚和5-硝基邻甲氧基苯酚外,其余5种硝基苯酚类化合物浓度均在污染天时高。清洁天和污染天夜间硝基苯酚类化合物浓度差异不大,但在白天时污染天的浓度比清洁天的高,且随污染加重时,白天的硝基苯酚类化合物浓度明显升高。7种硝基苯酚类化合物中4-硝基苯酚、4-硝基邻甲酚和3-甲基-4-硝基苯酚相互之间有着较强的相关性,说明三者的来源存在一定的相似性。(3)运用量子化学对二次无机组分的形成机制进行了理论研究,获得了基于二次无机组分前体物形成硝酸铵(NH4NO3)和硫酸铵((NH4)2SO4)可能的反应路径。根据计算结果发现NO2和NH3可在水分子的作用下通过氢键形成NO2-NH3-H2O团簇,其稳定化能为-0.94kcal/mol,再与NO2反应生成HONO-HNO3-NH3团簇,其总吉布斯自由能变为-0.81 kcal/mol,当气态中的HNO3-NH3团簇数量增加时,便可生成颗粒态的NH4NO3,这是冬季污染天NO2转化最可能的反应途径。经过计算也发现水分子的增加,可降低生成HNO3-NH3的吉布斯自由能变。在冬季NOx/O3等氧化性气体无法直接氧化SO2,但却能有效的氧化亚硫酸,因此(NH4)2SO4的生成途径可能是SO2与H2O反应先生成亚硫酸,其反应的活化能较高为47.7 kcal/mol,但NH3参与可有效地降低其反应活化能(19.42 kcal/mol)。当体系中存在3个H2O参与时反应的活化能降低了 34.71 kcal/mol,这与湿度增加,SO2转化更快的现象一致。这可从理论上解释监测发现重污染天气湿度和氨气增大时硝酸盐和硫酸盐浓度增加的现象。硝基苯酚的形成机制是苯酚在自由基的存在下脱氢之后形成苯氧自由基,再与NO2反应形成中间产物,发生H转移,最终形成4(或者2)hepatitis-B virusNP,活化能分别为84.2kcal/mol和49.6 kcal/mol,尽管相同情况下生成2NP相对容易,但由于其生成速率常数较小,实际大气中这一过程依旧很难实现。理论模拟结果表明当有2个水分子或1个氨气分子参与反应时,生成的4NP的活化能分别为10.99 kcal/mol和10.13 kcal/mol。当反应过程存在H2O、2H2O和NH3时,生成4NP的速率常数排序为kNH3>k2H2O>kH2O,表明若大气环境中存在水分子和氨气分子,可将H转移的反应活化能大幅下降,大幅升高生成速率常数,进一步促进硝基苯酚的生成。这一结果解释了冬季重污染过程当湿度增加和有氨气存在时硝基苯酚的生成和积累增加的原因。

目的 探究老年中重度良PR-171供应商性前列腺增生患者采用普适泰治疗的临床效果。方法 通过对2022年6月至2023年6月入院的84例老年中重度良性前placenta infection列腺增生患者进行随机分组，两组均为42例。对照组采用常规治疗，研究组在此基础上采用普适泰片治疗，观察两组治疗前后前列腺体积（prostate volume,PV）、残余尿量（residual urine volume,RU）、最大尿流率（maximum flow rate,MFR）、前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）、白细胞介素细胞-17 (interleukin-17,IL-17)、肿瘤坏死因子-α (tumornecrosis factor-α,TNF-α)水平、前列腺症状（international prostate symptom score,IPSS）评分改善状况，及临床疗效、不良反应发生情况。结果 各组治疗前PSA、TNF-α、IL-17、IPSS评分与PV、RU、MFR指标对比差异不明显（P>0.05），研究组治疗后的PV、RU指标值小于对照组，IL-17、PSA、TNF-α水平、IPSS评分、不良反应发生率均比对照组低，但其MFR指标值和治疗总有效率与对照组比较则更高（P<0.05）。结论CL 318952 普适泰用于治疗老年中重度良性前列腺增生能有效改善患者的前列腺症状，与治疗前相比，患者的前列腺增生体积明显缩小，患者尿道功能逐渐恢复正常，患者的前列腺组织学炎性反应得以减轻，临床治疗效果得以提高，且用药后不良反应较少，具有良好的应用价值。

目的:铁死亡(ferroptosis)是近年来新发现的一种细胞死亡形式,有研究指出糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发生发展与细胞铁死亡存在一定的联系,但其机制尚未被完全阐明。Xc~-/GPX4通路被证实在细胞铁死亡中起着重要作用,葡萄籽原花青素(grape seed procyanidin extract,GSPE)已被证明对DN具有一定的保护作用,然而GSPE能否通过介导Xc~-/GPX4通路改善细胞铁死亡从而抑制或者缓解DN的发生发展尚不明确。本研究拟建立DN大鼠确认细节及高糖培养的人肾皮质近曲小管上皮细胞(Human Kidney-2,HK-2)模型,从细胞铁死亡的角度,探讨GSPE对DN的保护作用及具体机制。方法:1.体内实验:45只SD大鼠随机挑选10只为对照,其他35只大鼠以高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立DN模型,31只大鼠造模成功。DN大鼠分为DN组(11只)、GSPE组(10只)以及铁抑素-1(Ferrostatin-1,Fer-1)组(10只),GSPE或Fer-1组的大鼠分别以250 mg/kg的GSPE灌胃12周或以2.5μmol/kg的Fer-1腹腔注射12周。测量大鼠基础指标如血糖、尿量、饮水量、体重,肾功能指标如血肌酐、尿素氮、尿白蛋白,氧化抗氧化指标MDA、SOD、GSH。观察肾脏组织切片的HE、PAS、Lillie、Masson染色,同时Western Blot检测纤维化相关蛋白COL I、TGF-β1和α-SMA,铁死亡关键蛋白ACSL4、GPX4、TfR1以及Xc~-/GPX4通路相关蛋白SLC7A11、GSS、GCLM的表达情况。2.体外实验:细胞选用HK-2细胞模拟体内糖尿病环境,使用30mmol/L的葡萄糖建立高糖损伤模型,分别给予erastin(20μmol/L)、Fer-1(1.2μmol/L)以及GSPE(10、20、30 mg/L)干预,或使用erastin(20μmol/L)抑制Xc~-/GPX4通路后施加GSPE干预。使用CCK-8检测细胞活力,荧光检测细胞ROS水平以及线粒体膜电位情况,相应试剂盒检测细胞GSH、MDA含量,Lillie染色检测细胞中Fe~(2+)水平,同时WestEmricasan配制ern Blot检测纤维化相关蛋白COL I、TGF-β1和α-SMA、铁死亡关键蛋白ACSL4、GPX4、TfR1以及Xc~-/GPX4通路的相关蛋白SLC7A11、GSS、GCLM的蛋白表达情况。结果:1.DN大鼠血糖、饮水量、尿量均明显升高,而体重降低(P<0.05),同时血肌酐、尿素氮以及尿白蛋白均明显升高(P<0.05)。肾脏组织SOD和GSH的含量均降低,MDA水平和Fe~(2+)均升高(P<0.05)。HE和PAS结果显示肾脏基底膜增厚,肾小球扩张,囊腔变小,Masson染色显示纤维原沉积显著增加,同时COL I、TGF-β1和α-SMA的表达均明显增加(P<0.05)。铁死亡相关蛋白ACSL4和TfR1的表达均明显增加,而GPX4的表达明显降低(P<0.05),同时SLC7A11及其下游蛋白GSS和GCLM的表达均降低(P<0.05)。以Fer-1和GSPE干预之后大鼠血糖、饮水量、尿量、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白均降低,同时体重有所增加(P<0.05)。肾脏SOD、GSH的含量均升高,MDA水平及Fe~(2+)均降低(P<0.05)。纤维原沉积减少,COL I、TGF-β1和α-SMA的表达均降低(P<0.05)。且ACSL4和TfR1的表达均被明显抑制,GPX4的表达明显增强,SLC7A11及其下游蛋白GSS、GCLM的表达均增强(P<0.05)。2.HK-2细胞在施加高糖干预之后细胞存活率明显降低(P<0.05)。细胞中GSH水平下降、线粒体膜电位降低,而MDA、ROS水平以及Fe~(2+)均显著升高(P<0.05)。细胞COL I、TGF-β1和α-SMA的表达均明显增加(P<0.05),同时ACSL4和TfR1的表达均显著增加,而GPX4的表达均明显降低(P<0.05),且SLC7A11及其下游蛋白GSS、GCLM的表达均降低(P<0.05)。而在给予铁死亡抑制剂Fer-1或者不同剂量的GSPE干预之后,细胞存活率提高(P<0.05)。细胞中GSH水平、线粒体膜电位均升高,MDA、ROS水平以及Fe~(2+)均降低(P<0.05)。细胞COL I、TGF-β1和α-SMA的表达均明显下降(P<0.05),同时ACSL4和TfR1的表达均显著降低,而GPX4的表达明显增强(P<0.05),且SLC7A11及其下游蛋白GSS、GCLM的表达均明显增强(P<0.05)。在使用erastin抑制Xc~-/GPX4之后细胞存活率显著降低(Pper-contact infectivity<0.05),同时细胞COL I、TGF-β1和α-SMA的表达均明显增加(P<0.05),同时ACSL4和TfR1的表达均显著增加,而GPX4的表达均明显降低(P<0.05),且SLC7A11及其下游蛋白GSS、GCLM的表达均降低(P<0.05),此时施加不同剂量的GSPE仍能有效提高细胞存活率(P<0.05),使细胞中GSH水平、线粒体膜电位均升高,MDA、ROS水平以及Fe~(2+)均降低(P<0.05),使细胞COL I、TGF-β1和α-SMA的表达均明显下降(P<0.05),同时使ACSL4和TfR1的表达均显著降低,而使GPX4的表达明显增强(P<0.05),且SLC7A11及其下游蛋白GSS、GCLM的表达均明显增强(P<0.05)。结论:DN会出现以肾脏纤维化为表征的肾脏损伤,而铁死亡参与了DN的发生发展,抑制铁死亡可以明显改善DN;GSPE可以通过激活Xc~-/GPX4信号通路抑制肾小管上皮细胞铁死亡的发生而减轻以纤维化为表现特征的糖尿病肾病。

纤维素是由β-1,4糖苷键链接而成的葡萄糖单体聚合物,广泛分布于自然界,是一类易获取且廉价的可再生资源。自然界含纤维素材料的利用和处理是目前亟待解决的问题,筛选产纤维素酶的优良菌株并实现纤维素的有效利用具有重要意义。利用纤维素酶降解纤维素是绿色、高效和可持续的利用方式,广泛应用于工业和农业领域(养殖、能源、纺织等)。因此,实现高效低成本的纤维素酶生产成为研究和发展的目标。木霉属真菌是重要的纤维素酶产生菌,具有产酶量大、酶系全和酶活性高等优点,分泌的胞外酶易于工业生产中的分离提纯。本研究以课题组前www.selleck.cn/products/ch-223191期积累和保存的25种木霉150个菌株为材料,通过刚果红平板法筛选、滤纸酶活测定和天然纤维素降解等测试,筛选出14株产纤维素酶能力较强的菌株(优于对照菌株里氏木霉QM9414),从中选取3株进行最佳产酶条件探索,如接种量、吐温80添加量、发酵培养基pH值等。初步测试结果表Trichostatin A核磁明,贵州木霉菌株8705在20℃条件下、摇瓶发酵9 d、在优化后的发酵培养基中产酶效果最佳,其上清液酶活可达到6.63 IU/mL。通过优化发酵温度、发酵时间Anteromedial bundle和培养基成分配比等发酵条件,为资源利用打下物质基础并提供理论依据。

目的:探究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate, DEHP)损伤小鼠GC-1 spg精原细胞功能的可能机制。方法:采用不同浓度DEHP(0、30、60、90、120μmol/L)处理GC-1 spg细胞，通过CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力的变化；化学分光光度比色法检测细胞内铁离子(Fe~(3+))和丙二醛的相对含量；蛋白质印迹实验检测细胞内铁死亡相关蛋白胱氨酸/谷氨酸逆转运蛋白(xCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的相对表达；细胞免疫荧光染色技术检测细胞内活性氧水平以及线粒体膜电位(JC-1)的改变。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(1μmol/L)与DEHP(90μmol/L)联合培养GC-1 spg细胞24 h, CCK8实验检测细胞的增殖能力。结果:与对照Persian medicine组(0μmol/L)相比，30、60、90、120μmol/L DEHP组细胞的增殖能力、克隆形成能力和迁移能力明显下降；丙二醛、活性氧、FeCX-5461溶解度~(3+)(90、120μmol/L DEHP组)含量明显升高；线粒体膜电位(60、90、120μmol/L DEHP组)明显降低；GPX4(60、90、120μmGDC-0973纯度ol/L DEHP组)和xCT蛋白表达水平明显降低。DEHP与Ferrostatin-1联合培养后细胞增殖能力较DEHP单独培养明显提高。结论:DEHP能够抑制GC-1 spg细胞的增殖和迁移能力，降低GPX4和xCT蛋白的表达，可能通过铁死亡途径引起细胞死亡。

苯丙烷代谢途径是植物中重要的次生代谢途径之一,多种次生代谢产物都是由这一途径直接或者间接生成,然后进入类黄酮、木质素等化合物的下游合成途径。C4H(肉桂酸4-羟化酶)是苯丙烷代谢途径中的关键酶,参与调控植物类黄酮和植物木质素的生物合成。通过转录组和qRT-PCR联合分析,筛选并鉴定了一个CtC4H1基因。对CtC4H1系统发育、蛋白结构、理化性质等方面进行了详细分析。对于异源表达CtC4H1拟南芥和病毒诱导CtC4H1沉默的红花进行了表型分析、次生代谢产物含量测定及通路基因表达量的分析。对于CtC4H1蛋白相互作用网络进行了预测,亚细胞定位分析、酵母双杂交(Y2H)以及双分子荧光互补(BiFC)技术明确了CtC4H1蛋白的定位情况及互作蛋白。分析了CtC4H1对非生物胁迫响应的表达水平存在的差异,在干旱胁迫下揭示了CtC4H1转基因拟南芥的抗氧化性能。具体研究结果如下:1.基因组测序获得2条候选CtC4H基因,通过转录组数据的GMO biosafety热图分析和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现,CtC4H1的表达量始终高于CtC4H2,所以选择CtC4H1进行克隆研究,其编码区为1518 bp。多序列比对和同源性分析表明,红花中CtC4H1基因与其他物Captisol细胞培养种中C4H进化关系密切,都具有细胞色素P450结构域、膜锚区、脯氨酸丰富区、苏氨酸结合区、血红素结合区和E-R-R三联体结构域,同时,CtC4H1具有CYP73A亚家族的6个特征底物识别位点,包括(SRS1、SRS2、SRS3、SRS4、SRS5和SRS6),与CYP73A亚家族最接近。并且,CtC4H1蛋白是亲水性不稳定蛋白,具有一个跨膜结构域和丰富的磷酸化位点。2.异源表达CtC4H1拟南芥经逐代筛选,经基因组鉴定和qRT-PCR分析,得到12株T3代转基因拟南芥,并从中选择了OE4和OE10两个高表达株系。对于野生型(WT)和两个过表达株系(OE4和OE10)生长发育阶段的表型统计分析显示,与野生型相比,转基因拟南芥具有更为明显的长势。CtC4H1转基因拟南芥的叶片偏大且莲座叶数目更多,抽薹时间稍早且茎的直径偏大,并伴随着茎端紫色色素的积累。CtC4H1转基因拟南芥中总黄酮含量为野生型中的1.5倍,而花青素含量则为野生型的2.5倍。过表达植物中参与黄酮类物质生物合成的基因(At PAL、At4CL、At CHS、At CHI、At F3H、At F3’H、At FLS、At DFR和At ANS)的表达显著上调,其中,At PAL基因最高上调了130倍。3.病毒诱导(VIGS)红花CtC4H1基因沉默实验中,对于TRV病毒介导下的CtC4H1植株沉默效率进行检测,选择了沉默效率较高的Line 1和Line 3进行对比分析。对注射前后的红花植株的表型观察发现,瞬时过表达的植株显示出比对照稍好的生长趋势,尤其是在注射七天时的生长状态。而基因沉默后的植株随着时间的推移显示出明显的叶片黄化情况,并且植物的生长受到阻遏显示出生长延缓的趋势。TRV病毒介导下的CtC4H1基因沉默的红花中总黄酮含量为空载对照的0.3-0.5倍,而花青素的含量为空载对照的0.3-0.6倍,参与黄酮类物质生物合成的基因(CtPAL、CtCHS、CtCHI、CtF3MK-1775’H、CtFLS、CtDFR和CtANS)的表达显著降低。4.对红花中CtC4H1的相互作用网络进行了预测,结果显示C4H蛋白与通路上其他蛋白(PAL,4CL,HCT,FLS,ANS等)存在密切的关联以及相互作用的可能,利用烟草叶片细胞瞬时表达系统分别对CtC4H1和CtPAL1进行亚细胞定位分析,两个蛋白的定位主要分布于质膜和细胞核中。通过酵母双杂交(Y2H)验证了CtC4H1和CtPAL1蛋白之间存在互作的潜能,利用双分子荧光互补(BiFC)技术验证两个蛋白存在互作关系。5.通过qRT-PCR技术验证了CtC4H1基因在干旱、茉莉酸甲酯、光和暗等不同激素和非生物胁迫条件下的表达水平。与其他处理相比,在外部干旱处理下CtC4H1基因的表达水平从48 h开始显著提高且有持续增加的现象,结果表明CtC4H1具有调控红花应对干旱胁迫的反应机制。6.选择了CtPAL1和CtC4H1过表达拟南芥株系,研究这两个基因在干旱胁迫下过表达株系中的作用。两个CtC4H1过表达系(OE4和OE10)和CtPAL1过表达系(OE6)在干旱胁迫14 d后的表型分析表明,与WT拟南芥相比,干旱受损的叶子程度稍轻。3,3’-二氨基联苯胺(DAB)和硝基蓝四唑(NBT)对实验植株的叶片进行染色以及含量测定结果表明,转基因植株的过氧化氢(H_2O_2)和超氧阴离子(O_2~-)积累量少于对照株。干旱胁迫后转基因株系中总黄酮类化合物和花青素含量显著增加,转基因叶片的MDA含量明显低于WT。与野生型拟南芥相比,干旱胁迫诱导下转基因株系中参与活性氧(ROS)解毒的SOD、CAT、POD的活性以及脯氨酸的含量增加明显。以上结果表明,CtC4H1和CtPAL1基因可以促进黄酮类化合物的积累,刺激抗氧化防御系统,从而促进拟南芥中ROS的清除。

MYB类转录因子KAN4 (KANADI4)在红麻类黄酮合成和纤维发育中发挥着重要作用。本研究以红麻品种‘福红952’为材料,对HcKAN4基因进行克隆和表达模式分析,探讨TRV-VIGS诱导该基因沉默对类黄酮合成途径中关键酶基因表达量改变的影响。基因克隆显示, HcKAN4基因开放阅读框(open reading frame, ORF)全长为966 bp,编码322个氨基酸,包含一个MYB保守结构域D-Lin-MC3-DMA核磁。进化树分析发现,其与拟南芥和木槿KAN4s的亲缘关系较近。表达分析表明,该基因在红麻不同组织中均有表达,且转录MK-2206小鼠水平随着植物生长而递增。VIGS诱导基因沉默显示, 6株HcKAN4的转录水平显著下调,达到基因沉默效果。进一步实时荧光定量PCR检测发现,类黄酮合成相关基因HcCHS、HcF3’5’H、HcANS、HcANR的转录水平显著下调,分别是对照组的0.51、0.14、0.23、0.11Non-specific immunity倍,表明HcKAN4基因可调控红麻类黄酮生物合成相关基因。这些结果为阐明红麻MYB转录因子调控类黄酮合成提供了依据,同时为改善纤维品质提供了研究思路。

目的：探索乙酰葛根素-聚乳酸-乙醇酸纳米颗粒（AP-PLGA-NPs）通过与Wnt/β-catenin通路的联合作用在大鼠脑缺血再灌注损伤（CIRI）期间对自噬的影响。方法：将48只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组（16只ABT-263临床试验/组），实验组（AP-PLGA-NPs联合Wnt/β-catenin激动剂氯化锂）、CIRI组和对照组。制备AP-PLGA-NPs后，采用大脑中动脉缝合闭塞法，在缺血2 h后再灌注24 h，建立CIRI大鼠模型。然后使用Garcia神经功能评分评估所有组的神经行为表现。使用2%三苯基四氮唑（TTC）对脑梗死体积进行鉴定和染色，并通过Western Blot和密度测定法测定皮层β-catenin、Bcl-2和Bax的表达。结果：与CIRI组相比，实验组神经行为评分明显降低（P<0.05），脑梗死体积相应减小（P<0.05）；与CIRI组相比，实验组β-catenin表达增加，皮质Bax和Bcl-2表达也明显降低（P<0.05）。结论：AP-PLGA-NPs联合Wnt/β-catenin信KPT-330分子量号可以下调自噬水平、减轻大鼠PCR Equipment的脑缺血再灌注损伤。

目的 观察脑胶质瘤组织中透明质酸合成酶2(HAS2)的表达变化，探讨HAS2表达与脑胶质瘤临床病理参数及预后的关系。方法 收集行脑胶质瘤切除术患者的胶质瘤组织标本70例纳入病例组，肿瘤WHO分级1～2级32例、3～4级38例。另收集同期行颅内减压术的脑外伤患者的脑组织标本10例纳入对照组。分别采用免疫组化法及Western blotting法检测两组HAS2蛋白，分析Microscopy immunoelectronHAS2表达与脑胶质瘤临床病理参数的关系。采用Logistic回归分析胶质瘤组织中HAS2表达量的影响因素。绘制Kaplan-Meier生存曲线，比较不同HAS2表达水平的脑胶质瘤患者的预后。结果 免疫组化检测结果与Western blotting检测结果均显示，病例组HAS2表达高于对照组，且3～4级脑胶质瘤组织中HAS2表达高于1～2级脑胶质瘤组织（P均<0.05）。Barasertib纯度WHO分级3～4级、突变型p53、Ki-67高表达脑胶质瘤组织中HAS2高表达率分别高于1～2级、野生型p53、Ki-67低表达的肿瘤组织（P均<0.05）。将WHO分级、Ki-67表达、p53分型、年龄、性别、肿瘤部位和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达作为自变量，将HAS2表达作为因变量，纳入Logistic回归模型分析，结果显示WHO分级、Ki-67表达与p53分型是脑胶质瘤患者HAS2表达的独立影响因素（P均<0.05）。HAS2高表达患者的平均生存时间、总生存率低于HAS2低表达患者（P均<0.01）。结论 HAS2在脑胶质瘤组织中高表达，HAS2高表达与脑胶质瘤恶性程度有GSKJ4纯度关，并影响患者预后。