achr抑制剂

目的：观察和分析青少年抑郁症非自杀性自伤行为（NSSI）患者联合应用舍曲林与坦度螺酮治疗的效果。方法：选取2022年10月—2023年1月于福建省福州神经精神病防治院治疗的72例青少年抑郁症NSSI患者作为研究对象，按照住院顺序编号后以随机数表selleck HPLC法将患者分为对照组和观察组，各36例。两组均采用盐酸舍曲林片治疗，观察组加用枸橼酸坦度螺酮胶囊治疗，比较两组临床疗效、负性情绪[汉密尔顿抑郁量表-17项版（HAMD-17）评分、汉密尔顿焦虑量表（HAMA）评分]、冲动行为[冲动量表（BIS-11）]、NSSI行为及不良反应发生情况。结果：观察组总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组HAMD-17评分与HAMA评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组HAMD-17评分与HAMA评分均低于治疗前，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组注意multiscale models for biological tissues、运动、缺乏计划及总分比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组注意、运动、缺乏计划及总分低于治疗前，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组NSSI行为发生情况比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗2周、4周后https://www.selleck.cn/products/fg-4592.html，两组NSSI行为发生次数少于治疗前，且观察组少于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：青少年抑郁症NSSI患者采用舍曲林联合坦度螺酮治疗能显著改善焦虑与抑郁情绪，还能改善冲动行为和NISSI行为，且不会增加不良反应。

目的：基于银离子（Ag~+）介导的G-四链体构象转换策略建立免标记的荧光传感法用于Ag~+定量分析。方法：首先，荧光染料吖啶橙嵌入G-四链体后可使其荧光显著增强。其次，当体系加入Ag~+后，Ag~+可螯合G-四链体中的鸟嘌呤进而抑制G-四链体空间结构形成使得荧光降低。最后，根据荧光强度的变化进行Ag~+的定量检测。样品的荧光光谱分析以480 nm为激发波长，检Pexidartinib临床试验测500～700 nm的荧光发射光谱，并获悉更多记录最大发射波长525 nm处的荧光强度。结果：本研究设计的荧光传感器对Ag~+的检测呈现出较宽的检测线性范围（0.1～2.0μmol/L）和较低的检测限（43.5 nmol/L）。此外，该方法在复杂的实际环境样品回HIV-related medical mistrust and PrEP收率分析中取得了满意的结果。结论：本研究构建的Ag~+检测方法操作简单，无需任何荧光标记，成本低，分析速度快，选择性好，在环境分析中具有广泛的实际应用前景。

植物激素(Phytohormones)是指植物内源产生的一类信号分子,参与了包括调控植物生长发育、介导植物的免疫应答等多种生理过程,在植物适应各种环境胁迫的过程发挥着关键作用。植物激素对于药用植物在逆境中生存及调控次生代谢产物含量的过程中具有重要意义,其作用机理研究一直是植物生理和抗逆境研究的热点问题。植物激素发挥作用首先需与植物体内受体蛋白结合,但是系统性的鉴定植物激素结合蛋白并研究其功能仍是相关研究领域的难点。研究目的由于植物激素在不同的高等植物中作用高度相似,本课题以拟南芥作为模式系统,建立起系统性研究植物激素结合蛋白的方法和技术平台,并探究其功能。本课题以水杨酸和脱落酸两种植物激素为例,建立起了化学蛋白质组学研究平台,系统研究了这两种激素分子的作用蛋白和调控的分子机制,以期为重要中药材的种植和抗逆境提供科学参考。研究方法(1)基于化学蛋白质组学解析水杨酸的作用机理。水杨酸(Salicylic acid,SA)是一种防御激素,可以使植物在生物和非生物胁迫条件下更好地适应环境。在这Galunisertib化学结构里,selleck Z-VAD-FMK我们使用化学蛋白质组学的方法来揭示拟南芥中SA介导的蛋白质组重塑机制,追踪SA影响的新合成蛋白质的机理以及使用该技术寻找新的SA结合蛋白(SA binding proteins,SABPs)。首先,采用生物正交非天然氨基酸标记方法(Bioorthogonal noncanonical amino acid tagging,BONCAT)结合点击化学来标记拟南芥中新合成的蛋白质,在本研究中,使用的探针是甲硫氨酸的类似物L-Azidohomoalanine(AHA),在其氨基酸侧链中带有的叠氮基团,可以通过click反应选择性地修饰和富集标记的新合成的蛋白质。此外,我们基于SA的结构设计合成了水杨酸探针(Salicylic acid probe,SA-P),结合点击化学反应,筛选出SA-P在拟南芥裂解液中合适的标记浓度。采用基于活性的蛋白质分析技术(Activity-based protein profiling,ABPP)和液相色谱仪-串联质谱法(Liquid chromatograph-tandem mass spectrometer,LC-MS/MS)技术,鉴定了水杨酸在拟南芥裂解液中的结合蛋白。通过生信分析手段对结合蛋白进行信号通路富集分析以及功能聚类分析,筛选出目标蛋白以及其涉及的信号通路。通过构建基因表达载体以及外源表达纯化相应的目标蛋白。并通过纯蛋白的标记和竞争实验,表面等离子共振技术(Surface plasmon resonance,SPR)以及差示扫描荧光法(Differential scanning fluorimetry,DSF)验证SA可否结合这些蛋白。通过蛋白质谱检测探寻SA与目标蛋白的结合位点。通过蛋白质免疫印迹试验(Western blotting,WB)分析SA处理对目标蛋白表达及活性的影响。(2)基于化学蛋白质组学解析脱落酸的作用机理。根据脱落酸(Abscisicacid,ABA)的化学结构式,设计并合成脱落酸探针(Abscisicacidprobe,ABA-P)。利用模式植物拟南芥,通过点击化学反应,筛选出ABA-P在拟南芥裂解液中合适的标记浓度。同时利用蛋白质谱定性、定量分析了脱落酸的结合蛋白。通过生信分析手段筛选出高可信度并具有一定研究意义的目标蛋白。通过构建基因表达载体以及外源表达纯化相应的蛋白。并通过纯蛋白的标记和竞争实验以及表面等离子共振技术(Surface plasmon resonance,SPR)验证目标蛋白是否与ABA结合。同时利用酶活性检测试剂盒,考察ABA对目标蛋白酶活性的影响。通过蛋白质谱寻找ABA与目标蛋白的具体结合位点并进行验证。此外,我们通过RT-qPCR实验比较了野生型(Wild type,WT)和突变体中ABA相关marker基因的表达量。研究结果(1)通过生物正交BONCAT实验结果显示,AHA探针能够有效标记拟南芥中新合成蛋白质,且SA能够以剂量依赖型的方式抑制拟南芥中新生成蛋白的合成。结合质谱分析结果我们发现,水杨酸主要通过抑制蛋白质合成所需的核糖体蛋白来重塑拟南芥蛋白质组以适应环境压力。我们设计并合成了水杨酸探针(SA-P),用于寻找相应的SABPs。SA-P具有类似SA的功能,可诱导病原相关基因(PR1及WRKY51)的表达,并且能够结合已知的SABPs,甘油醛-3-磷酸脱氢酶C2(GAPC2)。基于ABPP技术,SA-P可呈剂量依赖性的标记拟南芥裂解液中的相互作用蛋白,且随着SA竞争浓度的增加,SA-P结合的蛋白减少。随后通过ABPP联合LC-MS/MS分析,鉴定得到了 126个SA结合蛋白。我们对目标蛋白进行功能聚类分析,结果表明,氨基酸生物合成过程是最显著的通路之一。此外,值得注意的是,涉及翻译的相互作用蛋白被SA-P靶向,在蛋白-蛋白相互作用(Protein-proteininteractions,PPI)分Clinical immunoassays析中占据了重要位置。我们筛选了翻译相关的蛋白,在体外测试了 SA与其相互作用蛋白的结合。通过纯蛋白的竞争实验、DSF和SPR等实验,证实了 SA可以直接结合真核细胞起始因子2(Eukaryotic translation initiator factor 2α,eIF2α)和核糖体家族蛋白RPS8A。通过蛋白质谱发现SA-P可与eIF2α蛋白的赖氨酸结合,作为SA的潜在结合位点。SPR分析得出SA与eIF2α蛋白的结合常数KD为3.53 μM,表明SA可能通过相对高亲和力的结合直接调节eIF2α的活性。此外,WB实验表明,SA处理能够促进eIF2α蛋白磷酸化而不影响总蛋白水平。(2)根据脱落酸的化学结构,成功合成了脱落酸探针(ABA-P)。ABA-P具有类似脱落酸的活性,可上调ABA应答基因RD29A表达量,表达量与ABA处理相近。基于ABPP技术,ABA-P在拟南芥裂解液中的标记效率呈浓度依赖性增强,且随着ABA竞争浓度的增加,ABA-P结合的蛋白减少。确定探针标记浓度之后进行后续的ABPP联合LC-MS/MS分析。生信分析表明,GSTF9和GSTF10是可信度较高并与谷胱甘肽代谢通路相关的目标蛋白,属于植物中一类重要的抗逆蛋白。然后,通过纯蛋白的竞争实验和SPR等实验,证实了 ABA可以直接结合GSTF9和GSTF10蛋白并且抑制其谷胱甘肽转移酶的活性。进一步通过蛋白质谱等方法,证明了 ABA可结合GSTF9和GSTF10蛋白的Lys152位。此外,GSTF10能够影响ABA信号通路相关marker基因的表达,这些结果表明GSTF10可以直接结合ABA并且可能参与了脱落酸代谢通路。研究结论综上,我们的研究发现,SA通过抑制蛋白质合成来调控拟南芥蛋白质组重塑以适应逆境。SA可以直接结合真核翻译起始因子eIF2α并促进其磷酸化,同时可能影响氨基酸的生物合成通路从而导致蛋白翻译抑制,发挥免疫功能。此外,ABA能够直接结合GSTF家族蛋白,为解释ABA参与植物抗逆的机制原因提供了可能的参考依据。本研究的发现可以为深入探索植物激素在调控植物稳态过程中发挥的作用以及解析植物在逆境中生存的机制提供重要的理论依据。

S-烯虫酯作为保幼激素类似物,可以直接应用于储粮或对仓储环境进行防虫处理。当储粮害虫暴露在含有S-烯虫酯的环境中,会影响昆虫体内保幼激素的正常调节,导致其发育停滞或死亡,从而达到储粮害虫防控的目的。本文以重要储粮害虫赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲、烟草螟、谷蠹为研究对象,采用“药膜法”测定了S-烯虫酯短期处理对试虫4种虫态生存影响及长期处理对试虫幼虫发育的影响,进而研究经S-烯虫酯处理的包装材料的防虫效果,并采用“混粮法”测定S-烯虫酯对试虫4种虫态发育影响,进而研究在1年的储存期间对子代种群的控制效果。本研究结果为科学高效利用S-烯虫酯防治储藏物害虫提供了参考信息。主要研究结果如下:S-烯虫酯短期处理对赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲的生长发育具有显著影响。S-烯虫酯短期处理能显著降低锈赤扁谷盗和锯谷盗卵的孵化率,但对赤拟谷盗、杂拟谷盗、烟草甲和烟草螟卵孵化率没有显著性影响。S-烯虫酯剂量为3.2×10~(-4) mg/cm~2时,处理7 d后,赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲和烟草螟卵孵化率分别为70.00%、90.00%、53.33%、40.00%、81.67%、83.33%;S-烯虫酯短期处理能显著增加赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗的幼虫死亡率,但对锯谷盗、烟草甲、烟草螟幼虫生存没有显著影响,S-烯虫酯剂量为1.6×10~(-4) mg/cm~2时,处理7 d,赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲和烟草螟的幼虫死亡率分别为41.67%、23.33%、31.11%、0.00%、16.67%、10.00%;S-烯虫酯短期处理可显著Gefitinib体内降低赤拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲蛹羽化率,但对杂拟谷盗和烟草螟蛹正常发育没有显著影响,S-烯虫酯剂量为3.2×10~(-4) mg/cm~2时,处理7 d,赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲和烟草螟蛹羽化率分别为46.67%、90.00、40.00%、63.67%、0.00%、90.00;S-烯虫酯短期处理对所有试虫成虫存活没有显著性影响,死亡率均低于10.00%。S-烯虫酯长期处理能够减少幼虫发育为成虫的数量,延长幼虫发育周期。S-烯虫酯剂量为2×10~(-5) mg/cm~2,赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲、烟草螟羽化率分别为61.65%、63.35%、0.00%、10.00%、90.00%、56.65%。当S-烯虫酯剂量为8×CRISPR Products10~(-5) mg/cm~2以上,赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、锯谷盗、烟草甲、烟草螟幼虫发育周期分别被延长约2、4、0、1、4、3周,试虫几乎没有发育至蛹期。S-烯虫酯处理的PP材料能够降低试虫成虫子代数量、对包装的穿透率,抑制幼虫发育为成虫、减少包装内部子代成虫数量。试虫成虫接触S-烯虫酯处理的PP材料3 dGPCR & G Protein抑制剂后,死亡率和子代数量与对照组没有显著差异;试虫成虫接触S-烯虫酯处理的PP材料7 d后,死亡率没有显著影响,锯谷盗、锈赤扁谷盗和烟草甲子代数量没有显著影响,但赤拟谷盗和谷蠹子代数量显著下降;试虫幼虫死亡数量随S-烯虫酯剂量增加显著增加,发育为蛹的数量随S-烯虫酯剂量增加显著减少,S-烯虫酯剂量为8×10~(-5) mg/cm~2时,所有幼虫都无法发育为成虫;S-烯虫酯能够降低锯谷盗钻入包装内部数量,抑制试虫子代在包装内部的发育;两种喷药方式都能够显著减少包装内部子代成虫数量,包装内部涂抹控制效果优于外部涂抹。S-烯虫酯能够抑制试虫卵和幼虫发育为成虫、减少重量损失、降低蛹羽化率,但对成虫存活没有显著影响。S-烯虫酯剂量为1 mg/kg能完全抑制赤拟谷盗、杂拟谷盗、锈赤扁谷盗、烟草甲卵发育为成虫,剂量为3 mg/kg和5 mg/kg时能完全抑制锯谷盗和烟草螟卵发育为成虫,幼虫死亡数量随S-烯虫酯剂量增加显著增加。S-烯虫酯能够显著降低赤拟谷盗、杂拟谷盗、锯谷盗、烟草甲蛹羽化率,但对锈赤扁谷盗和烟草螟蛹的发育没有显著性影响。S-烯虫酯能够在1年期间有效抑制试虫子代发育为成虫、降低虫口密度、减少重量损失。S-烯虫酯剂量为1～10 mg/kg时,均能够完全抑制赤拟谷盗子代发育为成虫,总虫口数和重量损失随S-烯虫酯剂量增加显著减少;S-烯虫酯剂量为3～5 mg/kg时,对杂拟谷盗子代控制效果较好,总虫口数和重量损失随S-烯虫酯剂量增加显著减少;S-烯虫酯剂量在3 mg/kg以上时,对锈赤扁谷盗子代控制效果最好,几乎没有重量损失,总虫口数随S-烯虫酯剂量增加显著减少;S-烯虫酯剂量为5 mg/kg以上时,对锯谷盗子代控制效果最好,总虫口数和重量损失随S-烯虫酯剂量增加显著减少;S-烯虫酯剂量为10 mg/kg时,对烟草甲子代控制效果较好,总虫口数和重量损失随S-烯虫酯剂量增加显著减少;S-烯虫酯剂量为5～10 mg/kg时,对烟草螟子代控制效果较好,S-烯虫酯剂量为1 mg/kg和3 mg/kg时,烟草螟能够发育为成虫,随S-烯虫酯剂量增加,烟草螟卵在幼虫期死亡数量增加。

以中华绒螯蟹为研究对象，研究超高压辅助中华绒螯蟹脱壳及对其品质、滋味成分的影响，为超高压技术在蟹加工中的应用提供依据。以得肉率为指标优化超高压辅助中华绒螯蟹脱壳参数，并综合蒸煮损失率、得肉率、水分、质构、游离氨基酸、呈味核苷酸及感官评价，对比分析超高压处理和传统热处理对蟹粉、蟹腿及蟹黄的影响。结果表明：BLZ945配制400 MPa处理10 min为超高压辅助中华绒螯蟹脱壳最佳参数，得肉率为（46.98±7.38）%。与传统热处理相比，超高压处理显著提高了中华绒螯蟹的得肉率、水分含量、硬度、胶黏性和咀嚼性等质构特性吗，但是同时也提高了蒸煮损失率。感官评定结果显示，超高压处理对中华绒螯蟹蟹腿的感官评分有显著提高。进一步从游离氨基酸分析，结果显示超高压处理可以明显提高蟹的总鲜味、甜味氨基酸含点击此处量，尤其是蟹黄部位分别提高14.69%和45.50%，说明超高压处理对蟹肉氨基酸的呈味有提升改善作用。此外，蟹粉和蟹黄中的主要呈味核苷酸是5′-肌苷酸（IMP）的钠盐，超高压处理可提高蟹粉和蟹黄的IMP含量。超高压处理提高了中华绒螯蟹的得肉率，改善了蟹肉理化品质与质构特性，提升了蟹粉、蟹黄的鲜甜滋味，作为中华绒螯蟹前处理技术是具有良好的应用前Nucleic Acid Detection景。

目的：探讨糖脂毒性环境中抑制长链非编码RNA(lnc RNA)人类肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达水平对人脐静脉内皮细胞功能影响的分子机制。方法：用葡萄糖和棕榈酸处理人脐静脉内皮细胞，建立体外糖脂毒性内皮细胞模型，并分为对照组、高糖高脂组、高糖高脂对照组以及小干扰RNA(si-RNA)干预的高糖高脂+si-MALAT1组、高糖高脂+si-丝裂原活化蛋白激酶1(si-MAPK1)组。应用实时荧光定量PCR检测Mhelicopter emergency medical serviceALAT1、MAPK1的mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法检测自噬、线粒体融合分裂、凋亡、通路相关蛋白的表达水平；免疫荧光共聚焦定位检测自噬及溶酶体相关蛋白的荧光共定位情况；透射电镜观察内皮细胞中自噬溶酶体的数目；线粒体探针染色检测线粒体形态；免疫荧光检测细胞内活性氧（ROS）的产生；流式细胞仪检测各组细胞的凋亡；细胞增殖及划痕实验检测不同时间点各组细胞的增殖及迁移能力；血管形成试验检测各组细胞中新生血管数量。结果：与对照组相比，高糖高脂组、高糖高脂对照组的MALAT1 mRNA、磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶1(p-MAPK1)的表达水平增加，磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的表达水平下降，P均<0.05。与高糖高脂对照组相比，高糖高脂+si-MALAT1组微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、螯合体1(pZD1839溶解度62)、ROS、剪切后活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、BCL-2相关X蛋白（BAX）、p-MAPK1的表达水平均下降，线粒体融合蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)、BCL-2、p-mTOR的表达水平均增加，Pselleck HPLC均<0.05;LC3和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)蛋白的荧光共定位阳性颗粒增加（P均<0.01），溶酶体数目减少；细胞增殖、迁移、成管能力均增加（P均<0.01）。与高糖高脂对照组相比，高糖高脂+si-MAPK1组内皮细胞中p-MAPK1的表达下降，p-mTOR的表达上升（P均<0.01）。结论：抑制MALAT1表达，可降低糖脂毒性环境中线粒体的自噬水平，减少内皮细胞的凋亡及改善内皮细胞的功能，可能与调节MAPK1/mTOR信号通路有关。

帕金森病(Parkinson Disease,PD)是一种慢性、进展性神经系统疾病,是发病率、残疾和死亡增长速度最快的神经障碍疾病。PD的临床表征主要是肌肉控制力的进行性丧失,导致静息性震颤、强直、运动能力减退并伴有睡眠障碍、记忆力减退等一系列非运动症状。目前对于PD的治疗以药物治疗为主,但只能改善患者的症状,并不能有效阻止病情的发展。在中医学上,PD属于“颤证”范畴,大量临床实例表明PD治疗采取中医对证施治取得较好的疗效,对病情有较好控制,显示出独特优势,临床常用的代表性方剂包括熄风定颤汤、化痰熄风汤、止颤汤、地黄饮等。本论文采用经典环境毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导小鼠PD模型和N-甲基-4-苯基吡啶离子(N-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导神经细胞损伤模型,从氧化应激及线粒体功能障碍导致的神经元功能损伤、外周免疫失衡及脂质代谢异常等多个角度探讨PD的复杂发病机制;进而根据中医药整合调节的作用特点,以经典名方地黄饮为研究对象,在整体动物上验证了地黄饮抗PD的药效作用,并探究了其改善神经功能、调节外周免购买Ipatasertib疫的潜在作用机制;进一步结合系统性体内外分析,评价地黄饮中的代表性化合物多方面药效作用,发现了来自熟地黄和肉苁蓉的京尼平苷酸(Geniposidic acid,GPA)能有效减少氧化应激损伤和炎症因子的分泌,并在整体动物模型上验证了其抗PD作用并初步探索其作用机制。论文的主要创新性研究内容如下:一,在PD小鼠模型和细胞模型上观察到氧化损伤的增加,线粒体超氧水平的增加和线粒体调控相关蛋白表达水平的异常,导致神经元的功能障碍和凋亡。其次,外周免疫细胞向中枢神经系统(Central nervous system,CNS)的浸润是PD可能的病理环节之一。采用新兴的质谱流式技术对PD小鼠的外周血进行分析,发现促炎细胞和抗炎细胞的比例异常,为PD病理中外周系统的免疫失衡提供了直接的证据。氧化应激、线粒体功能、炎症都与脂质的信号传导有关,基于此开展非靶向血清脂质代谢组,结果提示PD小鼠外周存在脂质紊乱。二,通过行为学检测和多巴胺能神经元染色在PD小鼠模型上验证了地黄饮的保护效果。检测脾脏组织促炎细胞标志物的表达和血清中炎症因子的分泌,发现地黄饮能够降低外周免疫系统的炎症反应。通过对CNS中炎症因子转录水平的检测结合小胶质细胞的荧光染色,发现地黄饮能够减少CNS的炎症浸润fetal immunity。推测地黄饮可能是通过调节外周免疫系统从而保护CNS。此外,地黄饮还能够减少病变区域脑组织总蛋白的乙酰化水平,由此开展的乙酰化蛋白质组学也提示调节炎症信号传导是地黄饮抗PD可能的作用机制。三是采用质谱分析技术结合质谱分子网络辨析地黄饮中的化学成分。基于辨析的118个化合物,在数据库中搜集对应作用靶点,利用网络药理学方法构建“化合物-靶点-通路”网络,分析地黄饮的潜在作用机制。在细胞ABT-199说明书模型上对地黄饮的主要成分进行药效评价,发现3个药效明显的化合物,分别是马钱子苷、京尼平苷、GPA。在MPP+刺激BV2小胶质细胞的炎症反应模型上进一步进行药效验证。通过体内代谢分布研究,证实GPA在血液和脑组织样本中均有分布。四是在PD小鼠模型上,验证了GPA的保护作用。GPA能够改善小鼠的运动功能、保护多巴胺能神经元,减少氧化应激的损伤。同样,GPA也能够减少外周免疫系统的炎症反应。基于细胞转录组测序的结果结合Connectivity Map数据库分析GPA可能是一种单胺氧化酶抑制剂,通路富集的结果提示GPA是通过改善神经元线粒体功能发挥神经保护作用的。

随着社会经济和工业化的发展,生态环境问题已经逐步成为人类所面临的严重问题之一。工业污染物排放使得有毒有害的小分子(如N_2H_4)、重金属离子(如Hg~(2+)/Pb~(2+)等)以及阴离子(如Cl O~–/CN~–等)等在土壤和水源中富集,对环境和生态系统造成严重污染,危害人类的健康安全。因此,开发兼具有高效性和可靠性的分析检测方法是环境监测、食品安全以及疾病早期诊断等领域亟待解决的关键问题。传统检测各类分子和离子的方法(如原子发射光谱法、离子选择性电极法、拉曼光谱法等)存在成本高、选择性差、无法实现实时检测等不足,而基于荧光探针的荧光光谱检测方法则具有灵敏度高、选择性强、操作简单、成本低廉、能够实现实时原位可视化检测等优势,已经成为目前化学、生物和医学等多学科的科研工作者非常感兴趣的交叉性国际前沿研究领域。本论https://www.selleck.cn/products/jnj-42756493-erdafitinib.html文主要选取联二噻吩、吩噻嗪和咔唑等荧光团为供体(D)结构单元,苯并噻唑盐、吲哚盐、硫代巴比妥酸、丙二腈和米氏酸为受体(A)结构单元,乙烯基(π)为连接臂(识别单元),设计并合成出一系列D-π-A型的新型高性能Cl O~–/N_2H_4荧光探针。采用紫外-可见光谱和荧光发射光谱手段,对探针的选择性、灵敏度、抗干扰性、p H及时间响应性等光谱识别性能进行了系统的研究,通过核磁共振氢谱(~1H NMR)、高分辨质谱(HRMS)、红外光谱(FTIR)等仪器手段以及密度泛函理论(DFT)计算针对探针分子对Cl O~–和N_2H_4的特异性传感响应机制进行研究。并开展了探针在环境样品、食物样品、生物样品中的定性定量研究,以及活体细胞、动植物体的荧光成像可视化应用研究。具体研究工作如下:(1)设计合成了一种基于联二噻吩-苯并噻唑碘盐的新型D-π-A型荧光探针DTA,探针DTA可在近100Median arcuate ligament%(～100%)的水溶液中实现对Cl O~–的检测,同时表现出高选择性、强抗干扰能力、超灵敏性(检测限:5.3 n M)、超快时间响应性(8 s)、宽p H工作范围(3.0–8.5)等优异的光学识别性能。通过红外光谱、核磁滴定、高分辨质谱以及DFT理论计算等手段对其传感机制做了详细研究。此外,利用探针DTA负载的滤纸条、棉签、硅胶粉,制备了简易的固态荧光传感器,实现了在水溶液中对Cl O~–的快速比色检测。基于探针DTA优异的传感识别性能、良好的生物相容性以及低的细胞毒性,成功实现了在实际样品中对Cl O~–的定量痕量检测,以及在活细胞和动植物体中对Cl O~–的荧光成像可视化检测。(2)开发了一种基于联二噻吩-甲基吲哚碘盐的新型D-π-A型荧光探针DTB,DTB可在～100%水溶液中实现对Cl O~–的检测,同时表现出高选择性、强抗干扰能力、超灵敏性(检测限:25 n M)、较快的时间响应性(1 min)、宽p H工作范围(3.0–8.5)等优异的光学识别性能。通过红外光谱、核磁滴定、高分辨质谱以及DFT理论计算等手段对其传感机制做了详细研究。此外,利用探针DTB负载的滤纸条、棉签、硅胶粉,制备了便携的固态荧光传感器,实现了在水溶液中对Cl O~–的快速比色检测。基于探针DTB优异的传感识别性能、良好的生物相容性以及低的细胞毒性,成功实现了在实际样品中对Cl O~–的定量痕量检测,以及在活细胞、拟南芥、豆芽和斑马鱼中对Cl O~–的荧光成像可视化检测。(3)开发了一种基于吩噻嗪-硫代巴比妥酸的新型D-π-A型双功能荧光探针PT,可实现在DMSO/PBS(1/3,v/v)溶液中对Cl O~–/N_2H_4的检测,同时表现出高选择性、强抗干扰能力、超灵敏性(检测限:Cl O~–:13.7 n M;N_2H_4:15.4 n M)、超快的时间响应性(Cl O~–:<20 s;N_2H_4:<15 s)、宽p H工作范围(Cl O~–:3–11;N_2H_4:5–9)等优异的光学识别性能。通过红外光谱、核磁滴定、高分辨质谱以及DFT理论计算等手段对其传感机制做了详细研究。此外,利用探针PT负载的滤纸条和硅胶粉,制备了简易的固态荧光传感器,实现了对水溶液中Cl O~–/N_2H_4以及对气态肼的快速比色检测。基于探针PT良好的传感识别性能、良好的生物相容性以及低的细胞毒性,成功实现了在环境样品、食品及生物流体等实际样品中对Cl O~–/N_2H_4的定量痕量检测,以及在活细胞和植物体中对Cl O~–/N_2H_4的荧光成像可视化检测。(4)设计合成了两种基于咔唑-丙二腈/米氏酸的新型D-π-A型荧光探针CBC和CBM,可分别实现在～100%水溶液和在DMSO/PBS(1/8,v/v)溶液中对N_2H_4的检测,同时表现出高选择性、强抗干扰能力、超灵敏性(检测限:CBC:6.3 n M;CBM:39 n M)、超Adezmapimod MW快的时间响应性(CBC:<40 s;CBM:<50 s)、宽p H工作范围(CBC:5–9;CBM:4–12)等优异的光学识别性能。通过红外光谱、核磁滴定、高分辨质谱以及DFT理论计算等手段对CBC的传感机制做了详细研究。此外,利用探针CBC负载的滤纸条、硅胶粉和棉签,制备了简易的固态荧光传感器,实现了对水溶液和气态肼的快速比色检测。基于探针CBC优异的传感识别性能、良好的生物相容性以及低的细胞毒性,成功实现了在环境样品、食品及生物流体等实际样品中对N_2H_4的定量痕量检测,以及在活细胞和植物体中对N_2H_4的荧光成像可视化检测。

目的:Atg7在骨骼肌肌少症病人患病初期激活,本研究旨在Alpelisib探究肥胖时Atg7在骨骼肌中的激活机制,renal pathology探究Atg7在肥胖引发的肌萎缩中的关键作用及Atg7促进肥胖引发肌萎缩的机制。方法:本研究采用高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型、Atg7敲除小鼠的腓肠肌组织模型和棕榈酸联合Atg7干扰C2C12细胞模型并收集了肥胖selleckchem LY2835219和正常体重受试者的腓肠肌组织,探究Atg7在肥胖引发的肌萎缩中的关键作用。结果:高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型的实验结果显示,饲喂HFD的小鼠腓肠肌重量、肌肉指数、腓横截面积和肌纤维数量明显低于饲喂ND的小鼠。同时,HFD组的小鼠肌肉的握力和耐力也出现了显著的下降,这与HFD对肌肉形态和横截面积的影响结果是一致的。小鼠腓肠肌中肌蛋白降解的关键抑制剂Akt在给小鼠喂食HFD 20周后发生了显著的失活,MyHC明显减少;小鼠腓肠肌FoxO3a显示被显著激活(p-FoxO3a与FoxO3a的比值出现降低)。小鼠腓肠肌中的TRIM63出现显著增加,与FoxO3a活性增加一致。同时,Atg7及其下游的LC3在腓肠肌中的表达显著增加。在棕榈酸的刺激下,过表达或敲低FoxO3a结果显示,Atg7的mRNA和蛋白水平的升高与FoxO3a水平的变化呈正相关关系。结合时间过程研究结果分析,我们认为HFD饮食引起的Akt活化损伤诱导了FoxO3a的转录活性,从而增加了Atg7的转录水平。肥胖患者的腓肠肌组织中的Atg7和TRIM63的阳性表达明显升高,p-Akt水平与非肥胖患者相比出现了明显的降低,这与动物实验的结果一致。敲除Atg7可减轻HFD诱导的腓肠肌横截面积和肌纤维数量的减少,同时也可以减轻HFD引起的小鼠肌肉耐力和力量的丧失;HFD诱导的小鼠的肌蛋白降解的变化显示,敲除Atg7可增加p-FoxO3a和FoxO3a的比例,导致HFD小鼠的TRIM63蛋白表达降低67%。因此,抑制腓肠肌Atg7可改善胰岛素抵抗,增加p-Akt和Akt的比值,从而增加MyH C的表达。Akt敲低促进了棕榈酸诱导的肌肉蛋白降解通路(FoxO3a/TRIM63)的激活并可抵消Atg7敲除引起的肌蛋白降解抑制,包括MyHC降低和FoxO3a/TRIM63激活增加。Akt磷酸化抑制剂MK2206处理Atg7敲低的C2C12细胞,发现Akt磷酸化的抑制也可以抵消Atg7敲低引起的肌蛋白降解的抑制。GST-Pull down实验的结果显示,Atg7与Akt之间存在直接的相互作用。综合免疫荧光实验、细胞质-膜分离实验和免疫共沉淀结果,得出棕榈酸刺激的Atg7通过结合其c-末端结构域抑制PDK1和PDK2激活Akt。结论:脂质诱导的Akt信号的抑制可促进肌肉细胞中foxo3a介导的Atg7水平的转录水平;Akt/FoxO3a/Atg7调控回路的功能障碍导致FoxO3a的正反馈循环激活,从而加剧肥胖引发的肌萎缩。

研究背景病原微生物是威胁人类健康和造成社会公共卫生事件的主要因素之一,如何在早期发现并鉴定病原微生物对控制疫情、降低社会影响至关重要。传统的病原微生物检测方法(如病原体培养法、免疫学检测法和分子生物学检测法)均存在耗时较长、依赖专业实验室和专业人员、需要复杂精密的仪器设备等局限。电化学生物传感器技术因其具备响应迅速、灵敏度高、信号读取简单、易小型化和可集成化等优点,在病原微生物即时检测方面优势明显,受到了广泛关注。近年来,CRISPR核酸检测技术在病原体检测领域中展现出了巨大的潜力。研究人员充分利用了CRISPR检测技术的简单、快速、灵敏、特异和通用等优势,将CRISPR-Cas核酸检测技术与电化学生物传感器相结合,掀起了基于CRISPR电化学生物传感器技术的研究热潮。但目前CRISPR电化学生物传感器技术均需要提前进行复杂的电极操作(如:电极预处理和修饰、生物分子固定等)。这种复杂的电极操作过程以及带来的电极批间差异或昂贵的生产成本等,很大程度上限制了该传感技术的进一步发展。研究目的针对上述局限,本研究旨在开发使用简单电极且无需复杂电极操作的CRISPR电化学传感技术,即无需生物分子(报告探针)固定和电极修饰等繁琐步骤的通用性CRISPR电化学生物传感技术。研究内容本研究将从以下两方面开展相关工作:1、免疫磁珠辅助的CRISPR电化学生物传感器技术及其检测SARS-Co V-2的研究:首先,利用CRISPR-Cas13a核酸检测技术和链霉亲和素免疫磁珠辅助捕获报告分子的策略建立一种电极免修饰、无需固定探针的电化学生物传感器。然后,通过将该传感器与RT-RAA等温扩增技术结合,并优化关键反应条件,建立针对目标病原体(以SARS-Co V-2为例)的高灵敏和高特异核酸检测技术。2、扩散介导的CRISPR电化学生物传感技术及其检测SARS-Co V-2和HIV-1的研究:首先,利用CRISPR-Cas13a检测系统以及不同大小相对分子质量的电化学报告探针在溶液中扩散速率差异来构建一种操作更为简单的CRISPR电化学生物传感器技术。然后,通过结合RT-RAA等温扩增技术和优化关键反应条件后,实现对目标病原体(例Smoothened Agonist小鼠如SARS-Co V-2和HIV-1)核酸的快速准确检测。研究方法1、免疫磁珠辅助的CRISPR电化学生物传感器及其检测SARS-Co V-2的研究:首先,设计两端分别标记亚甲基蓝(MB)和生物素(Biotin)基团的电化学报告RNA,通过分析链霉亲和素免疫磁珠辅助分离报告RNA对电化学信号强度影响的效果,验证免疫磁珠吸附并分离报告RNA的可行性,通过测试经Cas13a蛋白体外切割并免疫磁珠辅助分离后的电化学信号强度,验证免疫磁珠辅助的CRISPR电化学生物传感器构建的可行性。然后,从免疫磁珠辅助吸附时间、Cas13a蛋白浓度、Mg~(2+)浓度和Cas13a蛋白切割时间等关键反应条件对上述电化学生物传感器进行优化,以期获得最佳的检测性能。最后,在最优的检测条件下,对该电化学生物传感器的检测性能进行评价,得到其最低检测限和特异性等指标。另外,进一步结合RT-RAA等温扩增技术,建立针对SARS-Co V-2的高灵敏核酸检测方法,并评价其检测灵敏度、特异性和临床样本的检测效果。2、扩散介导的CRISPR电化学生物传感器技术及其检测SARS-Co V-2和HIV-1的研究:首先,评估不同大小相对分子质量的报告RNA扩散率差异导致电化学信RP56976小鼠号响应的差异,验证利用报告分子被Cas13a蛋白剪切前后分子量的变化进一转换成电化学信号差异的可行性。然后结合RT-RAA等温扩增技术,进一步验证扩散介导的CRISPR电化学生物传感器的可行性。通过对报告RNA上的寡核苷酸长度进行筛选,进行传感性能的优化,建立传感技术。再利用该传感技术检测SARS-Co V-2的核酸和HIV-1的核酸,并对其检测灵敏度和检测特异性方面进行性能评价。研究结果1、成功构建了免疫磁珠辅助的CRISPR电化学生物传感器。通过探索该传感器最佳检测条件,使其在无核酸预扩增的情况下可检测到低至10 p M浓度的目标核酸,并具有较好的特异性,能准确识别SARS-Co V-2的HV69-70del突变和D614G突变。建立RT-RAA等温扩增技术结合免疫磁珠辅助CRISPR电化学生物传感器的核酸检测技术,通过优化关键反应条件,使其能检测到低至10~0copies/μL的SARS-Co V-2的核酸,并与其他病原体检测无交叉反应。另外,还利用该传感技术对39个SARS-Co V-2可疑临床样本进行检测,结果发现其中36个临床样本检测结果与RT-q PCR检测结果一致(包括16个阳性和20个阴性),另外还检出了3个RT-q PCR无法检出但数字PCR检测阳性的低拷贝阳性样本,显示出良好的临床实用性。2、成功构建了扩散介导的CRISPR电化学生物传感器。结果表明Cas13a蛋白剪切报告分子前后,可成功将报告分子分子量的变化换能为电化学信号的变化。证明了报告RNA寡核苷酸长度越长越好,考虑到成本因素,最终选定30 nt的报告分子用于后续实验,结合RT-RAA等温扩增技术建立了扩散介导的CRISPR电化学生物传感器传感技术。该传感技术可检测低至10~2 copies/μL的SARS-Co V-2和HIV-1的核酸物质,并与其他病原体无交叉反应,显示了该传感器具有较好的检测灵敏度、特异性和通用性。研究结论1、本研究使用简单丝网印刷碳电极建立的免疫磁珠辅助Cantibiotic expectationsRISPR电化学生物传感器避免了复杂的电极修饰和探针固定步骤,结合RT-RAA等温扩增技术,实现了对SARS-Co V-2的高灵敏检测。该方法为开发用于病原体核酸检测的通用型电化学生物传感技术提供了新的思路。2、扩散介导的CRISPR电化学生物传感器的成功构建,与第一部分传感器研究相比,省去了免疫磁珠辅助过程,进一步简化了传感器的构建步骤,实现了对SARS-Co V-2和HIV-1核酸的准确快速检测,为简易电化学生物传感器的开发提供了新策略。