achr抑制剂

该研究基于氨基化磁珠静电富集细菌技术，建立了一种可同时富In Situ Hybridization集鼠伤寒沙门氏菌,金黄色葡萄球菌，单增李斯特氏菌的方法。在每2 mL单菌液中（10~3 CFU/mL）分别加入5～200μg的3种粒径的氨基化磁珠（1μm、300 nm、100 nm），当孵育5～90 min时检测各细菌的富集效率。将单菌液体系的富集正交试验结果应用至混和菌体系的单因素试验和正交试验，将最终结果应用至大体积实验体系以及实际样本（市售牛奶、水果沙拉）。结果表明，当氨基化磁珠添加量为50μg、孵育时间为30 min时对3种病原菌可以达到60%以上的捕获CCRG 81045溶解度率，所有反应均在pH值7.4的PBS中进行。磁珠粒径选择300 PF-07321332分子式nm(p<0.05)。在实际样本牛奶、水果沙拉中，当三种混合菌的最低终浓度为2×10~2 CFU/g(mL)时，捕获率高于55%，结果可达到荧光定量PCR的检测低限。氨基化磁珠与免疫磁珠比较，其具有稳定保存、低成本，高效率等优势，其非靶向富集的能力为下游食源性致病菌的快速检测提供有效前处理富集手段。

近年来艾滋病(AIDS,病原体为HIV)已经逐渐变成一种可控的慢性疾病,但患者始终无法彻底痊愈。目前药物治疗HIV会产生一定的耐药性,所以研发高效低毒抗HIV的药物一直是众多药物学家们的研究热点。2005年,吴久鸿等人从国内植物毛叶假鹰爪(Desmos dumosus)中分离得到了一种β-位羟基取代的查尔酮类天然产物Desmosdumotin D(以下简称Des-D),药理结果显示其具有高效的抗HIV活性。由于它在植物中的含量太低,这严重限制了其后续的生物活性研究。本论文通过化学合成的手段完成了天然产物Des-D的制备,再对其进行分子结构改造,合成了系列Des-D类似物,并对其进行了抗HIV活性评价。具体工作如下:(1)参照K.Nakagawa-Goto博士的Des-D全合成路线,我们从提高产率、降低操作难度、降低成本等角度出发优化整条路线,总收率则由4.4%提高至5.4%。改进的部分包括:在醛中的羰基还原成亚甲基的步骤中将不易储存的还原剂Na BH_3CN改为Zn粉后,产率从53.0%提高至86.4%;个别中间体可在甲醇中重结晶,简化分离纯化操作;在引入苯甲酰氧基的步骤中,不影响下一步反应的前提下采用双酰化产物代替原中间体单酰化产物,产率由55.3%提高至73.0%;在Baker-Venkataraman重排中,室温下选用溶剂DMSO与碱t-Bu OK,可解决纯化困难的问题。最终得到的产物Des-D是烯醇与双酮共存(摩尔比为2:1)的互逆异构体。(2)在合成Des-D类似物的研究中,首先是对A环的修饰,选用廉价且方便获取的原料2,6-二羟基苯乙酮和全合成中间体为底物探索Baker-Venkataraman重排的普适条件,合成一系列5个类似物;选择化合物2caecal microbiota2为底物在B环的可修饰位点上引入卤族元素或烷基,完成了8个查尔酮类似物的合成;通过引入亲水性基团来提高类似物水溶性的操作并未成功,过程中得到3个新的类似物。其关键中间体和目标产物均通过~1H NMR、~(13)C NMR以及HRMS等进行了结构表征。(3)完成了Des-D及10个类似物对HIV-1整合酶的抑制活性研究。实验结果显示:天然产物Des-D的IC_(50)值为13.6μmCeralasertib价格ol·L~(-1),活性最高。化合物21与14的IC_(50)值分别为101.3μmol·L~(-1)和161.0μmol·L~(-1)。化合物20,39无明显抑制作用,IC_(50)值均大于200μmol·L~(-1),其余化合物表现无活性。在此基础上利用计算机模拟分子对接研究Des-D、21与HIV-1整合酶的结合机制。初步构效关系分析:A环CDinaciclib采购-4位甲氧基为有效官能团,C-5位醛基为可能的药效团,C-6位的羟基能较好的与HIV-IN核心结构域结合,不能被保护,B环引入卤族元素或烷基修饰对活性没有提高。

植物源天然产物是新农药创制的重要途径之一。透骨草(Phryma leptostachya)是一种多年生草本植物,作为传统杀虫植物在东亚地区长期用于害虫防治,其含有多种高杀虫活性的木脂素类化合物,尤其是双氧木脂素A((+)-haedoxan A)对双翅目和鳞翅目害虫具有极高的杀虫活性。前期研究也表明双氧木脂素A具有显著的选择性和低细胞毒性,对人类和高等动物相对安全。因此,开发以双氧木脂素A为主要杀虫活性成分的植物源杀虫剂具有广阔前景。然而,和大多数植物源天然产物开发过程中遇到的问题一样,资源短缺是制约双氧木脂素A产业化的瓶颈。传统的双氧木脂素A获取方式是从透骨草根中直接提取分离,但双氧木脂素A仅在透骨草这一种植物中发现,且含量极低,因此依靠这种获取方式来生产农药并不可行。尽管已经通过化学方法全合成了双氧木脂素A,但其苛刻的反应条件以及超过20步合成步骤,致使其也无产业化可能。随着合成生物学的兴起,基于“自下而上”的策略达到“建物致用”的目的是破解植物资源不足的最有效方法之一,并且已在解决青蒿素和紫杉醇资源供给方面取得巨大成功,而生物合成途径的解析是开展合成生物学研究的前提和基础。目前,关于双氧木脂素A生物合成的研究极少,仅有一个可能参与其生物合成的细胞色素P450(Pl CYP81Q38)被报道,且公共数据库中还没有透骨草的基因组和转录组数据。鉴于此,本研究在对透骨草不同组织进行转录组测序的基础上,采用生物信息学预测可能参与双氧木脂素A生物合成的候选基因,重点解析了双氧木脂素A生物合成途径中参与结构后修饰反应的细胞色素P450(cytochrome P450,P450)和氧甲基转移酶(O-methyltransferase,OMT)的功能,主要结果如下:1.采用HPLC、LC-MS等方法明确透骨草代谢的木脂素类化合物累积的主要部位为根组织,以此为依据运用比较转录组学策略并结合二代、三代高通量测序技术完成了透骨草不同组织部位的转录组测序,以三代Pac Bio测序结果获得的72,796条全长转录本作为无参考基因组透骨草的参考转录组数据库,以二代BGISEQ-500平台分别对透骨草根、茎和叶组织进行测序,共检测到68,536条转录本,与Pac Bio参考基因集的平均比对率为77.48%。分析双氧木脂素A生物合成上游基因发现,在37个涉及松柏醇生物合成的差异表达基因中有22个在根组织上调表达,Pl CYP81Q38也在根组织特异性表达,这些基因的表达模式与木脂素类化合物的累积模式基本一致。再以Pl CYP81Q38的组织表达模式共表达筛选下游基因,获得18个P450s和15个OMTs作为候选基因进行下一步研究。2.利用透骨草幼苗底物饲喂试验确定芝麻素((+)-sesamin)为透骨草中木脂素类化合物生物合成的关键前体,通过代谢谱分析发现饲喂芝麻素后可以生成两个产物,LC-HRMS初步推测两个产物均为芝麻素的先羟基化后甲基化产物。接着,成功在酿酒酵母中表达了前期筛选到的14个P450s,结合全细胞催化和体外生化试验明确透骨草中催化芝麻素向下一步反应的为一个新P450酶Pl CYP706AA1。进一步对其反应产物进行分离纯化和结构鉴定,确定Pl CYP706AA1催化芝麻素生成了两个产物,即芝麻素酚((+)-sesaminol)和(+)-sesamin-2-ol,其中芝麻素酚为主产物。3.发现了3个透骨草内源的NADPH-细胞色素P450还原酶(Pl CPRs),并利用原核表达和体外酶学试验初步明确3个Pl CPRs均具有电子传递功能。然后采用酿酒酵母全细胞催化体系确定3个Pl CPRs皆可以提高Pl CYP706AA1的催化效率,其中Pl CPR2与Pl CYP706AA1的匹配度最高,使产物芝麻素酚和(+)INCB28060-sesamin-2-ol的总产量提高3倍以上,即摇瓶中产物总生成量由3.00 mg/L提升至最高9.40 mg/L。另外,普适性试验表明Pl CPRs还可以提高Pl CYP81Q38和芝麻Si CYP92B14的催化活性。4.克隆了8个透骨草OMTs基因(PlOMTs),并成功在大肠杆菌中异源表达出其中7个可溶的重组Pl OMTs蛋白。体外酶学试验表明Pl OMT2对两个底物芝麻素酚和(+)-sesamin-2-ol的催化活性最高,对产物分离纯化和结构鉴定后确定Pl OMT2将上述两个底物分别甲基化生成(+)-sesangolin和1,3-benzodioxole,5-[4-(1,3-benzodioxol-5-yl)tetrahydro-1H,3H-furo[3,4-c]furan-1-yl]-4-methoxy-,[1S-(1α,3aα,4α,6aα)]-(9CI)。同时还证明了前期LC-HRMS的推测,明确Pl OMT2反应生成的两个甲基化产物与透骨草幼苗饲喂芝麻素生成的两个产物相同。5.RT-qPCR分D-Lin-MC3-DMA分子式析表明新发现的基因PlCYP706AA1、Pl OMT2和Pl CPRs与已报道的Pl CYP81Q38基因具有高度相似的时空表达模式,即在透骨草六叶期以后的根组织高水平表达,而根组织又是木脂素类化合物的主要累积场所,这就表明透骨草中木脂素类化合物的合成可能与累积场所一致,即主要发生在透骨草的根部。综上,本研究基于合成生物学理念,通过天然产物化学、转录组学、分子生物学、生Biomass organic matter物化学等手段开展了透骨草中双氧木脂素A生物合成途径解析,明确根组织为透骨草代谢的木脂素类化合物的主要累积场所,完成了透骨草的第一份转录组测序,鉴定到2个参与木脂素类化合物生物合成的新酶Pl CYP706AA1和Pl OMT2,并获得了可以提高Pl CYP706AA1催化效率的3个Pl CPRs。基于以上结果,成功揭示了透骨草中木脂素类化合物生物合成途径的两步反应,即以芝麻素为底物推进两步后续主要反应生成(+)-sesangolin,为下一步全面解析双氧木脂素A生物合成途径以及今后利用微生物生产双氧木脂素A破解植物源农药开发中资源短缺的瓶颈实现其产业化奠定基础。

目的 探讨莪术醇(CCNN2211化学结构)对大鼠脑缺血再灌注(CI/R)损伤的影响及其作用机制。方法 将SD大鼠均分为健康对照组(Control)、CI/R组、低剂量CC组(CC 0.5 mg/kg)、中剂量CC组(CC 1 mg/kg)和高剂量CC组(CC 2 mg/kg)、抑制剂组(SP600125 30mg/kg)、高剂量CC+抑制剂组(CC 2 mg/kg+SP600125 30mg/kg),每组15只，连续给药7 d后，除Control组外余下大鼠均制成CI/R模型，观察各组大鼠脑损伤情况、血清氧化应激因子水平、脑组织凋亡情况。结果 相比Control组，CI/R组跳台错误次数、脑梗死率、脑指数和脑含水量水平、MDA水平、乳酸脱氢酶(LDH)水平、活性氧(ROS)水平、姿势反射评分、神经功能缺陷评分和p-JNK1/JNK1显著升高，新异臂进入次数、SOD水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白、神经生长因子genetic analysis(NGF)蛋白水平显著降低(P<0.05),神经细胞呈散乱分布；相比CI/R组，selleck HPLC中、高剂量CC组跳台错误次数、脑梗死率、脑指数和脑含水量水平、MDA水平、LDH水平、ROS水平、姿势反射评分、神经功能缺陷评分和p-JNK1/JNK1显著降低，新异臂进入次数、SOD水平、GSH水平、BDNF蛋白、NGF蛋白水平显著升高(P<0.05),神经细胞散乱分布得到改善；相比抑制剂组，高剂量CC+抑制剂组p-JNK1/JNK1、Cas 3/Cas 3蛋白、Cleav Cas 9/Cas 9、MDA水平均显著降低(P<0.05),SOD水平显著升高(P<0.05)。结论 CC可缓解大鼠CI/R损伤，其作用机制与调节JNK1通路、抑制氧化应激反应、降低海马神经细胞凋亡相关。

目的 了解上海市女性乳腺癌防治的知信行现状，分析其影响因素，为后期开展针对性的乳腺癌健康教育提供参考依据。方法 在全市16个区通过区妇幼保健机构发布上海市妇幼保健中心健康知识平台信息，动员辖区内妇女自愿参加乳腺癌预防认知、行为、态度情况的问卷调查，并采用二分类Logistic回归分析其影响因素。结果 上海女性乳腺癌预防保健各知识点的正确率均在75%以上。有59.0%的调查对象接受过乳腺检查；76.4%的调查对象会通过微信获取乳房保健知识；89.5%的调查对象认为每年1次乳腺癌筛查最理想。多因素logistic分析显示：年龄、学历、在职情况、生育史是乳腺癌保健知识的影响因素（P<0.0endometrial biopsy5）；年龄、学历、在职情况、工作类型、自报压力程度、生育史是接受乳腺癌筛查的影LEE011响因素（P<0.05）。结论 上海女性对乳腺癌预防的认知水平以及接受乳腺筛GSK-3抑制剂查的比例均较高，但对乳腺癌的高危因素、普查的意义以及筛查时间的认知还存在误区，应开展形式多样的针对性科普宣传。

目的 探讨miR-146a/Sirt6信号介导的自噬在右美托咪定(DEX)抗肠缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法 将SD大鼠随机分配到3组，包括假手术组(Sham)、I/R组和DEX组，每组8只大鼠。除Sham组外，其余组建立肠道I/R模型。DEX组大鼠在缺血前30 min通过腹腔注射25μg/kg DEX进行药物治疗。体内进行肠道组织病理学检查和评分。在体外实验中，大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6细胞)在氧Galunisertib临床试验-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)处理之前与DEX一起孵育。采用MTT法分析IEC-6细胞活力。分别采用TUNEL法和实时定量PCR检测肠道、IEC-6细胞中的凋亡情况和miR-1immunofluorescence antibody test (IFAT)46a水平。采用蛋白质印迹法和免疫荧光检测肠道、IEC-6细胞中SNaporafenibirt6、LC3水平。结果 组织病理学分析表明DEX处理对I/R诱导的肠上皮损伤具有保护作用，并以剂量依赖性方式恢复OGD/R暴露后细胞增殖。与I/R组相比，DEX组大鼠肠道组织中细胞凋亡显著减少(P<0.01),miR-146a、Sirt6和LC3Ⅱ表达水平显著增加(P<0.05)。与体内结果一致，体外研究发现DEX显著减轻OGD/R诱导的IEC-6细胞凋亡(P<0.01),同时显著增加了IEC-6细胞中miR-146a、Sirt6和LC3Ⅱ表达(P<0.01)。此外，在IEC-6细胞中进行的miR-146a抑制剂实验，并发现miR-146a抑制剂削弱DEX诱导的改善作用，还通过下调Sirt6表达抑制自噬激活。结论 DEX通过调节miR-146a/Sirt6信号介导的自噬显示出对I/R损伤具有保护作用。

结直肠癌(CRC)是全球第三大常见癌症和第四大常见癌症死亡原因。近年来，越来越多的证据支持肠道微生物在结直肠癌的发生、发展中起到了重要作用。在这些结直肠癌患者中经常观察到健康微生物平衡紊乱，称为失调。引起肠道失调的病原微生物已成为在肿瘤发生中作用的重要靶点。有趣的是，在结直肠癌患者的组织和粪便中检测到不同菌株的存在，如具核梭杆菌(Fn)。具核梭杆菌是一种居住在口Integrated Chinese and western medicine腔内的革兰氏阴性需氧菌，与牙周病、呼吸道感染、心血管疾病、阿尔茨海默病、炎症性肠病和几种癌症有关。在结直肠癌患者的组织和VE-822粪便中检测到BYL719试剂Fn的存在并且丰度高于正常人水平，同时还有研究报道Fn与化疗耐药性和低生存率显著相关。因此，本篇综述中我们将回顾具核梭杆菌在结直肠癌发生、发展中的作用，以及其对于化疗抵抗的作用，希望能将具核梭杆菌作为癌症预防、治疗、化疗抵抗的新靶点。

目的 分析肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）、肝再生磷酸酶（PRL-3）及人类表皮生长因子受体2（C-erbB-2）与乳腺癌淋巴结转移及预后的相关性。方法 收集2017年5月至2020年5月海南省三亚市妇女儿童医院收治的115例乳腺癌患者，以其术后病理组织作为观察组，并取患者距肿瘤切缘>5cm远癌组织作为对照组；淋巴结Laduviglusib浓度转移者（转移组）46例，未转移者（无转移组）69例。比较不同组织、有无淋巴结转移者血TAMs、PRL-3及C-erbB-2表达情况，分析影响乳腺癌预后不良的相关因素。结果观察组TAMs、PRL-3及C-erbB-2阳性表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。转移组TAMs、PRL-3及C-erbB-2阳性表达率明显高于无转移组，差异有统计学意义（P<0.05）。115例患者随访12个月后生存88例，预后不良27例。预后不良组淋巴结转移者、病理分期为Ⅲ～Ⅳ期、低medical legislation分化、TAMs阳性、PRL-3阳性、C-erbB-2阳性占比明显高于预后良好组，差异有统计学意义（P<0.05）。LogisCB-839体内实验剂量tic回归模型分析显示，病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、TAMs、PRL-3及C-erbB-2为影响乳腺癌患者预后不良的独立危险因素（P<0.05）。结论 TAMs、PRL-3及C-erbB-2过度表达与乳腺癌淋巴结转移可能存在一定的联系，对乳腺癌患者预后评估有参考价值。

目的:探讨在儿童过敏性紫癜bioimage analysis(Henoch-Schonlein purpura, HSP)及过敏性紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis, HSPN)中抗内皮细胞抗体(anColforsinti-endothelial cell Stem Cells & Wnt抑制剂antibody, AECA)检测的临床意义。方法:选取2018年7月至2019年4月于南京医科大学附属儿童医院就诊的30例HSP患儿(HSP组)和40例HSPN患儿(HSPN组),匹配40例择期手术患儿作为对照组，检测这些患儿血清中IgG-AECA及IgA、IgM、IgG、IL-1β、sIL-2R、IL-6、IL-10、TNF-α的表达水平。使用多元线性回归模型分析IgG-AECA与血清免疫球蛋白及炎症因子水平的关联，将70例HSP和HSPN患儿分为IgG-AECA阳性组和IgG-AECA阴性组，分析两组间免疫球蛋白及炎症因子水平的差异。结果:HSP组、HSPN组和对照组间IgG-AECA阳性率差异有统计学意义(P<0.05);IgG-AECA阳性组患儿血清中IgA、IgM、IgG、IL-1β、sIL-2R、IL-6、IL-10和TNF-α水平均高于IgG-AECA阴性组(P<0.05)。结论:IgG-AECA对HSP及HSPN的诊断具有临床参考意义。

目的 探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositolColforsin作用-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kAntiretroviral medicinesinase B,PKB又称Akt）/雷帕霉素靶分子（mammalian target of rapamycin,mTOR）及相关分子表达的影响。方法 随机将49只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组、散结镇痛胶囊组、地诺孕素组,每组7只,采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀EMs大鼠模型。假手术组及模型组每天给予10 m L/kg生理盐水灌胃,乌丹丸高、中、低剂量组分别给予2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg灌胃,散结镇痛胶囊组每天给予0.48 g/kg灌胃,地诺孕素组每天给予0.2 mg/kg灌胃,各组持续用药28日。应用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测异位内膜组织自噬信号轴PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白以及相关自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠异位内膜组织PI3K/Akt/m TOR蛋白表达上调,Beclin-1、LC3蛋白表达下调（P<0.01）。中药干预后,乌丹丸高、中剂量组、散结镇痛胶囊组和地诺孕素组异位内膜上selleck激酶抑制剂PI3K/Akt/m TOR蛋白表达降低,而Beclin-1、LC3蛋白表达升高,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）。结论 PI3K/Akt/m TOR信号通路参与子宫内膜异位症发生,乌丹丸可能通过下调PI3K/Akt/m TOR通路蛋白的表达,激活自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达,促进细胞自噬,治疗子宫内膜异位症。