achr抑制剂

目的：研究并探讨氟哌噻吨美利曲Dispensing Systems辛与艾司唑仑对于肺癌伴失眠患者治疗的效果及对不良反应、睡眠质量的影响。方法：选取2022年1月至2023年1月福建省肿瘤医院收治的患失眠肺癌患者78例作为研究对象，按照随机数字表法分为对照组和观察组，每组39例。对照组应用艾司唑仑治疗，观察组应用艾PF-07321332纯度司唑仑+氟哌噻吨美利曲辛，比较临床效果。结果：治疗后，相较于对照组，观察组入睡潜伏期、实际睡眠时长监测的数据更好，观察组在睡眠质量方面测评的分数更低，差异有统计学意义(P<0.05)。相较于对照组，观察组在心理方面测评的两项分数均更低，差异有统计学意义(P<0.05)。组间比较生命质量各维度分数，观察组均比对照组高，差异有统计学意义(P<0.05)。关于不更多良反应，2组总发生率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：在肺癌伴失眠患者中应用艾司唑仑与氟哌噻吨美利曲辛联合治疗，可对夜间睡眠发挥更好的改善作用，有利于改善心理和生命质量，且不良反应未增多，用药安全性良好。

目的 探讨住院抑郁障碍患者自杀倾向的相关因素。方法 选取2017年11月至2018年12月在首都医科大学附属北京安定医院住院治疗的1 160例抑郁障碍患者为研究对象，按照有无自杀倾向（包括自杀观念与自杀未遂）将其分为自杀倾向组（n=431）和无自杀倾向组（nCaspase抑制剂=729）。比较两组患者的临床特征，采用二项Logistic回归分析住院抑郁障碍患者自杀倾向的相关因素。结果 单因素分析显示，两组患者的性别、冲动性格、精神活性物质依赖史、自杀家族Antiviral immunity史、重大精神创伤史、抑郁严重程度比较，差异有统计学意义（χ~2=5.841、33.806、5.869、5.585、5.499、33.311;P<0.05）。二项Logistic回归分析显示，冲动性格（OR=2.445,95%CI=1.802～3.319）、有精神活性物质依赖史（OR=2.254,95%CI=1.038～4.894）、有重大精神创伤史（OR=1.533,95%CI=1.056～2.226）、抑郁症状严重程度较重（OR=2.754,95%CI=2.002～3.790）是住院抑郁障碍患者自杀倾向的影响因素（P<0.05）。结论 冲动性格、精神活性物质依赖史、重大精神创伤史、严重的抑郁症状可能寻找更多增加住院抑郁障碍患者的自杀倾向。

抽薹是大白菜(Brassica rapa L.ssp.pekinensis)一个重要的农艺性状,过早抽薹会导致大白菜结球不充分,进而影响其产量和品质。在本研究中,利用0.8%的EMS溶液诱变处理大白菜DH系‘FT’的萌动种子,获得了两份等位变异的早抽薹突变体ebm11-1(early-bolting mutant)和ebm11-2。在对突变体ebm11-1和ebm11-2进行抽薹特性鉴定与遗传特性分析的基础上,利用Mut Map测序结合KASP基因分型技术确定候选基因,进一步利用等位变异验证候选基因的功能,并探究突变基因的表达特性。主要研究结果如下:1.在正常的栽培条件下,与野生型‘FT’相比,两个突变体ebm11-1和ebm11-2均表现出提早抽薹的现象,population bioequivalence而且薹长5 cm时间、薹长10 cm时间、开花时间和开花当天株高等抽薹特性指标均与野生型‘FT’存在极显著selleck化学差异。2.等位性检测和遗传分析结果表明,突变体ebm11-1和ebm11-2是等位变异,并且早抽薹性状均由一对隐性核基因控制。3.利用Mut Map结合KASP基因分型技术确定Bra A01g028120.3C是突变体ebm11-1的候选基因,与拟南芥AT1G60200基因同源,编码RNA结合基序蛋白RBM25,参与介导非生物胁迫应答和ABA应答。4.分别在野生型‘FT’与突变体ebm11-1和ebm11-2中克隆候选基因,结果表明与野生型‘FT’相比,突变体ebm11-1和ebm11-2在Bra A01g028120.3C基因的第8个外显子上分别发生了G-A的突变,并且均导致氨基酸编码的提前终止。利用等位变异验证了候选基因Bra A01g028120.3C的功能,并将其命名为Br RBM25。5.荧光定量PCR分析表明突变基因Br RBM25在所有器官中均有表达,与野生型‘FT’相比,Br RBM25基因在突变购买SAG体ebm11-1和ebm11-2的根、茎和叶中表达趋势是一致的,然而在花蕾、花和种荚中,突变体ebm11-1和ebm11-2的表达趋势是不同的;启动子活性分析表明由Br RBM25基因启动子驱动的GUS基因在根、茎、叶、花蕾和种荚中均有表达;亚细胞定位结果表明Br RBM25蛋白定位在细胞核中。6.与野生型‘FT’相比,在突变体ebm11-1和ebm11-2的叶片中内源ABA的含量均显著升高。进一步分析开花关键基因的表达模式,结果表明与野生型‘FT’相比,在突变体ebm11-1和ebm11-2中FLC、SOC1和GI基因的表达是显著降低的,FT基因的表达是显著升高的。

漆酶是一种蓝色含铜多酚氧化酶,属于蓝色多铜氧化酶家族,一般是以单体、二聚体或四聚体糖蛋白的形式存在于自然界中。多年来,针对于漆酶的研究经久不衰,主要涉及生物、化学、环境等众多领域。此外,漆酶在环保、纺织、印染、食品、化学合成等方面具有广泛的应用前景,引起了人们的广泛关注及极大的兴趣。随着研究的深入,人们发现有些漆酶与典型的蓝漆酶不同,不含四个铜离子,被称为“白polymers and biocompatibility漆酶”或“黄漆酶”,并表现出与蓝漆酶不同且独特的性质。由于它们能够在没有任何介质的情况下氧化非酚类底物,因此被认为是比蓝漆酶更好的生物催化剂。本研究通过对基因组数据的挖掘,从微生物中成功克隆出一种新型细菌白漆酶,并在大肠杆菌中异源表达,利用多种生物信息学工具对酶序列和结构进行生物信息学分析并考察了重组酶的理化性质。随后通过酶固定化、深共熔溶剂体系的加入等措施解决了该酶在具体应用上的局限性并将其用于抗生素的降解。此外,通过同源建模、酶与底物分子对接模拟过程了解酶与底物之间的相互作用方式,并在此基础上通过构建高活力的突变体,拓宽了可作用的底物范围。本文主要围绕挖酶、改酶以及用酶这三个方面展开相关研究。主要的研究内容和结果如下:(1)通过NCBI数据库以及生物信息学分析,从本实验室保藏的细菌Methylobacterium extorquens中成功克隆表达出细菌白漆酶Melac13220。利用多种生物信息学工具对酶序列和结构进行分析,并表征了重组酶的酶学性质。经同源序列分析发现,该酶与其他多铜氧化酶的序列相似性仅为20-32%。通过序列进化树分析进一步证明,该酶属于独特分支的未被报道的非蓝漆酶。根据其所含金属离子成分,可归为“白漆酶”。通过酶学性质表征发现,该酶表现出与典型蓝色漆酶不同的性质,纯化后的Melac13220呈现出无色状态,T1铜对应的610nm和T3双核铜对应的330 nm附近未发现有吸收峰,而在260 nm处存在吸收峰。该酶的最适温度为65℃,在40°C和50°C温度下能够保持良好的稳定性,半衰期分别为50 h和9 h;Melac13220的最适p H值为1.5,为在酸性环境中具有高活性的嗜酸性酶。Cu~(2+)和Co~(2+)可使酶活力略有提高,在Fe~(2+)存在时,可使酶活力提高5倍以上,在一定程度上也起到稳定酶的作用。与大多数漆酶不同,Melac13220可以在没有任何氧化还原介体存在下,对刚果红和靛蓝胭脂红染料有较好的脱色效果。(2)Melac13220在应用中有一定的局限性,如稳定性较低,易受外界因素影响等。因此采用在Melac13220的氨基端、羧基端以及双端引入一段多肽链序列LCTPSR序列,经FGE催化生成醛基再通过Schiff碱反应共价结合到带有氨基基团的磁性纳米粒子上,实现酶与磁性纳米粒子的特异性定点共价结合。随后对Melac13220的固定化条件进行优化,与通过物理包埋和化学交联等固定化方法获得的Melac13220固定化酶相比较发现,位点特异性共价固定化法具有最高的固定化效率和活力恢复率,对经此方法固定化后的Melac13220进行酶性质表征研究,发现固定化Melac13220的最适温度为80°C,与游离态相比提高了15°C,此外固定化后的Melac13220对一些有机溶剂表现出较为显著的耐受性。DSC结果表明酶的熔化温度从游离态时的57°C提高至固定化后的79°C。此外,经固定化过程提高了Melac13220对染料的脱色效果,可使刚果红在10 h内完全脱色。(3)抗生素在医疗领域发挥着不可或缺的作用。然而,抗生素残留造成的生态环境失衡已成为一个亟待解决的问题。在众多的抗生素中,β-内酰胺类抗生素氨苄青霉素因其优异的性价比而具有更广泛的应用范围,其环境残留量高,因此造成的环境问题也更为突出。在无氧化还原介体存在下,游离Melac13220和固定化Si O_2-Fe_3O_4-Melac13220-CQ表现出对β-内酰胺类抗生素氨苄青霉素的氧化降解能力,其中Si O_2-Fe_3O_4-Melac13220-CQ的降解效率更高。经推断发现,Melac13220对氨苄青霉素的降解主要包括羟基化、脱羧以及β-内酰胺环的开环等过程。(4)为了提高Melac13220的稳定性,将由一个氢键受体(HBA)和一个氢键供体(HBD)组成的天然深共熔溶剂作为一种新型的绿色溶剂添加到Melac13220体系中,尝试提高酶的稳定性。使用丙三醇-甜菜碱(GBDES)、丙三醇-氯化胆碱(GCDES)、乳酸-甜菜碱(LBDES)、乳酸-氯化胆碱(LCDES)、木糖醇-甜菜碱(XBDES)、木糖醇-氯化胆碱(XCDES)共六种天然深共熔溶剂,探讨对酶活力和稳定性的影响。研究结果表明,不同浓度的GBDES、LBDES、LCDES、XBDES、XCDES均表现出能够增强Melac13220酶活力GSK126的作用,而GCDES对Melac13220具有轻微的抑制作用。深共熔溶剂(DES)可诱导酶的构象变化,促进蛋白质折叠,进而影响酶活力和热稳定性。乳酸基和甜菜碱基DESs具有较高的活化效果,这可能是由确认细节于在DES存在时除了氢键外,还形成了自氢键,可显著提高Melac13220的酶活力。(5)为了进一步提高Melac13220的催化反应活力和拓宽底物适用性,通过计算机辅助的同源建模和酶与底物分子的对接分析,构建突变体V212L、R248S、K394M。通过酶活力筛选发现,与野生型相比,三个突变体酶活力均有不同程度的提高,突变体的底物谱也更广。将酶与底物结合口袋处的碱性氨基酸突变为非极性的蛋氨酸后,酶的催化反应能力有较大改变,说明结合口袋处氨基酸结构在酶的催化效率和底物特异性方面起着重要作用。

随着世界人口快速增长,对肉类的消费量逐年上升,这也导致了畜牧生产产生的环境问题日趋严重。因此,需要基于植物源的肉类类似物作为替代品食用。肉类类似物主要由植物蛋白制成,常见来源包括小麦、大豆、花生、大米。然而,通常的制造方法难以模仿真实肉制品的微观结Pexidartinib分子量构及质地。3D打印技术可用于制造具有定制几何形状、结构和营养成分的食品。目前食品3D打印设备多LBH589体外用于Bio-based chemicals热熔融巧克力等常温下可凝固材料,对植物蛋白等材料没有定制的打印机。此外,植物蛋白材料在使用传统3D打印机常温挤出后仍需进行后处理。本文主要以三种植物蛋白为原料,研究了其混合浆料的打印性能,设计了一种可通过空气加热即时固化的3D打印设备,以制造肉类类似物。本文提出用空气加热3D打印制造植物蛋白肉制品,分析3D打印植物蛋白关键技术,选择合适的植物蛋白浆料,设计植物蛋白3D打印设备,结合仿真研究,为实际打印实验提供理论指导,并将配制的浆料进行打印试验获得产品。在开发用于植物蛋白3D打印的设备方面,设计了打印平台在XY轴做扫描运动,喷头在Z轴上下运动的三轴运动系统;基于MPC08SP控制卡及控制软件,搭建了控制系统;设计了浆料挤出模块及热风枪为热源的空气加热成型模块;在打印浆料性能方面,对制备浆料做了稳态和温度扫描流变测试,确定浆料用幂律流体模型进行描述且具备热定型性质;然后使用COMSOL仿真软件对注射器挤出模型及热风枪传热模型进行建模分析,为实际3D打印植物蛋白提供理论参考。最后,进行了加热与未加热两组打印实验,初步验证了开发的3D打印设备制造肉类类似物的潜在可能。

基于家蚕(Bombyx mori L.)的养蚕缫丝是中华民族最伟大的发明之一,对于中华文明乃至世界文明产生了重要的影响,因此,家蚕驯化事件在中华文明史上具有重要意义。虽然“家蚕起源于中国,是由中国野桑蚕(Bombyx mandarina Moore)驯化而来”的观点在学界达成了共识,但家蚕的具体驯化地却一直悬而未决。最新的研究从家蚕和核基因组角度为“家selleck HPLC蚕起源于黄河中下游地区”的观点提供了首个生物学证据。基于大样本量的线粒体基因组研究是分析家养动物起源与进化的理想方法。本研究收集了1,363个家蚕及野桑蚕种质资源,从野桑蚕和线粒体基因组角度,进Severe malaria infection一步追溯家蚕的直接野生祖先(中国野桑蚕的哪一个单倍型类群)和起源地(黄河中下游地区的哪几个省份)这两个事关家养动物起源的基本科学问题。主要研究结果如下:1.获得了1,147个家蚕的线粒体基因组。结合Gen Bank已有数据,分析了1,245个正确且完整的家蚕线粒体基因组,全序列长度为15,616 bp~15,711 bp,37个基因均没有发生位置和方向变化,有14,594个保守位点和1,363个SNVs,共鉴定出435个单倍型,单倍型多样度为0.979±0.002,核苷酸遗传多样性为0.00124。2.获得了63个中国野桑蚕的线粒体基因组。结合Gen Bank已有数据,分析了79个正确且完整的野桑蚕线粒体基因组,全序列长度为15,642 bp~15,928 bp,37个基因的排列顺序和方向也完全一致,有14,409个保守位点和1,783个SNVs,鉴定出68个单倍型,单倍型多样度为0.994±0.004,核苷酸遗传多样性为0.00585±0.00094。3.在线粒体基因组水平,家蚕和中国野桑蚕都没有形成明显的地理遗传结构。在泛线粒体基因组水平上,家蚕的中国、日本、热带和欧洲四大地理系统种在进化树中聚类较为分散,没有形成显著的地理遗传结构。中国野桑蚕与日本野桑蚕形成了显著的地理遗传结构,但来自中国19个省(自治区、直辖市)的野桑蚕不同地理群体之间并没有明显的地理遗传结构,仅个别中国野桑蚕群体间发生了基因交流。4.家蚕与野桑蚕各自的单倍型类群间存在明显的遗传分化。基于进化树和单倍型网络图,将家蚕定义为5个单倍型类群(Bmor HA、Bmor HB、Bmor HC、Bmor HD、Bmor HE),野桑蚕定义为4个单倍型类群(Bman HA、Bman HB、Bman HC、Bman HD),且单倍型类群间存在显著遗传差异。5.从母系遗传和泛线粒体基因组的角度证明了家蚕可能起源于我国黄河中游地区的陕西和河南一带。种群遗传分析表明,家蚕群体发生过一次群体扩张事件,与典型的驯化物种的进化趋势一致,而中国野桑蚕则没有发生过群体扩张事件。基于线粒体基因组的进化树上,中国野桑蚕的单倍型类群Bman HA与家蚕最为接近,表明家蚕的直接野生祖先来自中国野桑蚕的单倍型类群Bman HA。该类群的中国野桑蚕样品主要来自属古中国仰韶文化核心地区的陕西省和河南省,说明家蚕的驯化起源地最有可能在黄河中游地区的陕西省和河南省一带。本研究首次解析了野桑蚕和家蚕的线粒体基因组遗传多样性特征,定义了野桑AZD9291价格蚕和家蚕的单倍型类群,明确了家蚕是由中国野桑蚕的单倍型类群Bman HA的祖先型驯化而来的,得出了家蚕起源于黄河中游地区的陕西省和河南省一带的结论,为野桑蚕资源的收集与保护、家蚕的遗传改良与育种等提供了理论基础。

小麦(Triticum aestivum L.)是重要的粮食作物,其产量关系着国家粮食安全与社会稳定。由白粉菌(Blumeria graminis f.sp.tritici更多,Bgt)引起的小麦白粉病是最具破坏性的小麦病害之一,严重损害小麦的产量和品质。培育抗病品种是防止白粉病危害最经济有效且安全的方法。尾状山羊草(Aegilops caudata)是来源于小麦三级基因库的一个二倍体物种(2n=2x=14,CC),是小麦遗传改良的重要基因资源。许多研究证实小麦-尾状山羊草添加系的7C染色体上携带高抗白粉病基因,并且7C染色体在进化过程中发生了大片段臂间倒位,致使短臂末端超过三分之二转移至长臂末端,导致C基因组与其他小麦属植物同源性很差,限制了抗病基因的转移与定位。目前并未有参考基因组以及小麦-尾状山羊草抗病易位系的报道。本研究创制了ph1b背景下7C重组体选育群体,构建了7C添加系转录组数据库,发掘了32个neue Medikamente7C特异分子标记,筛选到126个小麦-尾状山羊草易位系,结合白粉病抗性鉴定将Pm7C定位在7C染色体特异分子标记Ac77516和Ac95072之间,并发掘18个Pm7C候选基因,为Pm7C的克隆与育种利用奠定了基础。具体研究内容与结果如下:1、7C染色体特异分子标记的开发与筛选:根据7C添加系转录组基因表达量筛选7C特异表达基因,开发了位置较为保守并且稳定扩增的7C特异分子标记30个;并筛选获得2个7C特异PLUG标记。根据32个特异标记序列在小麦参考基因组的物理位置,结合不同易位系的易位断点,构建了尾状山羊草7C染色体特异分子标记物理图谱。2、小麦-尾状山羊草易位系的筛选:利用4个selleck7C染色体特异分子标记从6737个BC_1F_2易位系选育群体中筛选到126个小麦-尾状山羊草7C重组体,重组体筛选率为1.87%。126个小麦-尾状山羊草7C易位系根据分子标记分析进一步划分为30种类型。3、Pm7C的定位:鉴定了14种类型36株易位系的F_2家系白粉病抗性,结合各类型标记扩增结果与白粉病抗病性分析,将Pm7C定位在7C染色体长臂分子标记Ac77516和Ac95072之间,对应普通小麦7D染色体的26.34 Mb区间。4、Pm7C候选基因的发掘:基于序列同源性比对,结合共线性分析和7C转录组基因特异表达分析与功能注释,发掘位于Pm7C定位区间内的候选基因5个,7C特有的抗病基因13个。后者通过设计分子标记对定位关键重组体进行分子标记分析,即可获得Pm7C区间的候选基因。为Pm7C的进一步定位与克隆奠定了基础。

目的:对安络化纤丸联合核苷类药物治疗乙型肝炎肝纤维化系统评价或Meta分析进行再评价。方法:检索中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、PubMed、Embase和Cochrane Library等数据库，检索时间为建库起至2022年7月，搜索安络化纤丸联合核苷类药物治疗乙型肝炎肝纤维化的系统评价或Meta分析。依照纳入和排除标准，由2名研究人员独立筛选文献并提取文献资料，应用AMSTAR2量表、PRISMA声明和GRADE分级系统对纳入文献的报告质量、方法学质量和证据级别进行再评价。结果:最终纳入8篇系统评价或Meta分析文献，均为中文文献，发表时间为2015～2022年。8篇文献的AMSTAR2评价结果均为极低质量；PRISMA评分15.5～19.5分，提示所纳入文献的报告有一定缺陷。评价的8篇文献LY2157299中共纳入安络化纤丸联合核苷类药物治疗慢性乙型肝炎肝纤维化患者的65项结局指标，其中：HA 8项、LN 8项、PC-Ⅲ8项、Ⅳ-C 8项、ALT 7项、TBil 5项、门静脉内径5项、脾脏厚度5项、AST 4项、HBV DNA转阴率4项、凝血酶原活动度1项、白蛋白2项。包括中等质量证据2项，低质量证据12项，极低质量证据51项。结论:现有的证据表明安络化纤丸联合核苷酸类药物治疗乙型肝炎肝纤维化在改善患者HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C等结局指标方面要优于对照组，但所纳入文献的方法学质量、文献质量和证据质量均偏低，需要提高系统评价或Meta分析的质量，从而为中医药治疗疾病提Compound C临床试验供Dermal punch biopsy高质量的循证医学证据。

【目的】1.通过免疫评分研究纳入的病例信息统计,了解不同免疫评分(CD3+T、CD8+T细胞)里患者临床资料(性别、年龄、吸烟史、CEA、CA19-9)的分布特征;2.探讨免疫评分与TNM分期之间的相关性;3.研究免疫评分是否可作为胃癌患者预后的有效评估指标。【方法】回顾性分析了深圳市宝安区人民医院2014年1月-2019年12月的59例胃癌患者(其中癌组织及配对的癌旁组织各59例)。运用免疫组织化学方法(S-P)标识出胃癌组织、癌旁组织中CD3+T、CD8+T细胞的密度,大致了解其分布特征,并采用Case Viewer图像分析系统进行细胞数目的统计计算细胞密度,接着基于CD3+T、CD8+T细胞密度的定量进行免疫评分,进而了解不同免疫评分(CD3+T、CD8+T细胞)里患者临床资料(性别、年龄、吸烟史、CEA、CA19-9)的分布特征,并探讨免疫评分与传统的TNM分期之间的相关性;最终研究探讨免疫评分与胃癌患者无病生存期的关系,探讨免疫评分(CD3+T、CD8+T细胞)是否可作为胃癌患者预后的有效评估指标。【结果】1.将TNM分期为I、II、III期患者的免疫评分及TNM分期数据进行分析,绘制成散点图,可直观的观察不同分期病例的免疫评分(IS=0-4)呈正相关分布,并通过皮尔森相关系数进行membrane photobioreactor计算得出R2值=0.7383,大于0.5,提示在TNM分期为I、II、III期的病例免疫评分与TNM分期之间存在相关性,免疫评分越高则TNM分期越靠后。2.由CT和IM中评估更多的CD3+T、CD8+T细胞密度进行免疫评分,根据IS及DFS通过R语言处理得出Kaplan-Meier曲线来观察不同分组中患者之间生存时间存在显着差异,通过多变量Cox比例风险模型得出R值提示IS及DFS存在相关性,通过对数秩检验校正计算出P值<0.05,有统计学意义。免疫评分中低分组较高分组预后更好,提示免疫评分对于胃癌患者预后有一定的评估价值。【结论】1.TNM分期为I、II、III期的胃癌患者免疫评分与TNM分期之间存在相关性,提示免疫评分可能是评估肿瘤侵袭或进展程度的指标。2.胃癌患者的免疫评分(CD3+T、CD8+T细胞)与无病生存期存在相关性,selleck提示免疫评分对于胃癌患者预后有一定的评估价值。

肠外致病性大肠杆菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)是一种重要的人畜共患病原体,可广泛感染哺乳动物和禽类。近年来,ExPEC在我国猪场中的分离率大幅增高,分离株大多为耐药菌株,这给传统治疗方法带来巨大挑战,因此迫切需要寻求新的治疗策略。抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是一类广泛存在于自然界的小分子多肽,在抵抗微生物感染方面发挥重要作用,且不易诱导耐药性的产生。PMAP-36属于猪源抗菌肽Cathelicidin家族中一员,具有广谱抗菌活性和免疫调节活性。AMPs与传统抗生素联合使用作为一种新的治疗方法,有望在提高抗菌效果的同时减少抗生素使core biopsy用量,但PMAP-36能否联合抗生素抗猪源ExPEC感染,目前尚不清楚。本研究通过体内外试验评估PMAP-36联合四环素对猪源ExPEC的抗菌活性。1.抗菌肽与传统抗生素对猪源ExPEC体外协同抗菌效果探究通过微量肉汤稀释法检测鸡源抗菌肽CATH-1、CATH-2、CATH-3、CATH-B1,鼠源抗菌肽CRAMP,猪源抗菌肽PMAP-36、PR-39共7种AMPs对猪源ExPEC菌株PCN033和新生儿脑膜炎ExPEC菌株RS218的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericide concentration,MBC)。结果显示,两种猪源AMPs的杀菌能力最强,PMAP-36和PR-39对PCN033的MBC为10μM,对RS218的MBC为5μM。进一步用棋盘法检测PMAP-36或PR-39分别与四环素、庆大霉素对PCN033和RS218的联合杀菌浓度指数(fractional bactericide concentration index,FBCI)。发现PMAP-36与四环素、庆大霉素对多重耐药菌株PCN033表现出体外协同杀菌作用,PMAP-36使用浓度降低4倍,四环素使用浓度降低16倍,庆大霉素使用浓度降低8倍,FBCI分别为0.3125、0.375。2.PMAP-36联合四环素对猪源ExPEC体外抗菌作用的研究进一步研究PMAP-36与四环素、庆大霉素联合使用的协同杀菌效果。时间-杀菌曲线结果表明,亚MBC的四环素和庆大霉素不能将PCN033杀死,而与PMAP-36联合使用,PCN033在20 min内完全被消除。通过扫描电镜观察细菌形态,发现与单独用药处理PCN033相比,PMAP-36与四环素联合处理可显著破坏细菌形态。此外,四环素和PMAP-36联合使用表现出较低的细胞毒性和溶血活性。PCN033在四环素和PMAP-36单独或联合使用条件下连续传30代,结果显示,单独使用四环素导致PCN033对四环素的耐药性增加了3倍,而联合使用则未改变其对四环素的耐药性。值得注意的是,PMAP-36可以降低PCN033侵袭和黏附腹腔巨噬细胞的能力,而与四环素联用对这一作用未表现出协同效应。以上体外试验结果表明,相较于PMAP-36和四环素单独使用,药物联用能够增强对猪源ExPEC的杀菌作用,降低PMAP-36的溶血活性和对哺乳动物细胞的细胞毒性,同时PMAP-36与四环素联用可以减缓PCN033产生四环素耐药性。3.PMAP-36联合四环素对猪源ExPEC致小鼠体内感染的疗效研究为全面研究PMAP-36联合四环素对猪源ExPEC的抗菌活性,用1×10~7 CFU猪源ExPEC菌株PCN033腹腔感染C57BL/6野生型小鼠,建立小鼠腹腔感染模Enasidenib配制型,体内评估PMAP-36联合四环素对猪源ExPEC感染的疗效。记录单独用药治疗和联合用药治疗后小鼠的生存情况;比较各治疗组小鼠肝脏、脾脏、肺脏、血液和腹腔灌洗液(peritoneal lavage fluid,PLF)中的细菌定殖SAHA量差异;HE染色观察肺脏、脾脏组织病理变化;用ELISA检测组织器官和PLF中炎症因子水平;通过Western blot检测肺脏中紧密连接蛋白Occludin的表达水平;采用流式细胞术检测小鼠PLF中免疫细胞的募集情况,并用ELISA检测趋化因子分泌表达水平。结果显示:感染猪源ExPEC后,PMAP-36与四环素联合治疗可以显著提高小鼠的存活率(60%,6/10),单独使用四环素或PMAP-36治疗的存活率分别为0%(10/10)、20%(2/10)。与单独用药治疗组相比,联合用药治疗组中各脏器、血液和PLF细菌定殖量显著降低。联合用药可显著减轻小鼠肺部炎性细胞浸润、肺泡壁增厚和脾脏炎性细胞浸润、脾小节萎缩、细胞坏死等症状。同时,联合用药组小鼠肝脏、脾脏、肺脏和PLF中的炎症因子(IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α)与单独用药组相比均有不同程度的下降。各治疗组小鼠肺部紧密连接蛋白Occludin的蛋白表达水平无显著差异。联合用药组小鼠PLF中免疫细胞募集数量显著高于单独用药组,但趋化因子CXCL1、CXCL2的表达水平并没有差异。以上结果说明,PMAP-36和四环素联用可以保护小鼠免于全身感染猪源ExPEC,具有良好的协同治疗效果,为这两种药物在临床上联合应用提供了一定的试验依据。