目的 构建抑制型pcDNA3/HA-moesin~(T558A)与激活型pcDNA3/HA-moesin~(T558D)基因突变体，并在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中验证。方法 设计特定的moesin~(T558A)、moesin~(T558D)基因突变引物，以pcDNA3/HA-moesin为模板，采用逆向PCR技术进行体外定点突变，以丙氨酸、天冬氨酸取代苏氨酸，获得抑制型pcDNA3/HA-moesin~(T558A)和激活型pcDNA3/HA-moesin~(T558D)基因突变体并测序。体外培养HUVECs，随机分为对照1组、pcDNA3/HA空载体组、pcDNA3/HA-moesin组以及对照2组、pcDNA3/HA-moesin~(T558A)组、pcDNA3/HA-moesin~(T558D)组，pcDNA3/HA空载体组、pcDNA3/HA-moesin组、pcDNA3/HA-moesin~(T558A)组、pcDNA3/HA-moesin~(T558D)组分别转染pcDNA3/HA空载体、pcDNA3/HA-moesin、pcDNA3/HA-moesin~(T558A)、pcDNA3/HA-moesin~(T558D)，对照1组与对照2组不予转染。转染24 h，收集细胞，采用实时荧光定量PCR法检测moesin mRNA表达，采用Western blotting法和免疫荧光法检测moesin蛋白表达。结果经测序，目的基因moesin~(T558A)、moesin~(T558D)序列完全正确，第558位苏氨酸分别突变为丙氨酸、天冬氨酸，抑制型pcDNA3/HA-moesin~(T558A)和激活型pcDNA3/HA-moesin~(T558D)基因突S63845供应商变体构建成功。AY-22989临床试验pcDNA3/HA-moesin组moesin mRNA相对表达量显著高于对照1组和pcDNA3/HA空载体组（t分别为16.688、16.649,P均<0.05），而pcDNA3/HA空载体组与对照1组比较差异无统计学意义（t=1.925,P>0.05）。pcDNA3/HA-moesin~(T558D)组、pcDNA3/HA-moesin~(T558A)组moesin mRNA相对表达量均显著高于对照2组（t分别为13.809、9.260,P均<0.05）,pcDNA3/HA-moesin~(T558D)组与pcDNA3/HA-moesin~(T558A)组比较差异无统计学意义（t=2.364,P>0.05）。Western blotting结果显示，pcDNA3/HA-moesin~(T558A)组和pcDNA3/HA-moesin~(T558D)组均能观察到HA-moesin蛋白表达，而对照1组未观察到HA-moesin蛋白表达。免疫荧光结果显示，pcDNA3/HA-moesin组、pcDNA3/HA-moesin~(T558A)组和pcDNA3/HA-moesin~(T558D)组均能观察到HA-moesin荧光，而对照2组未观察到HA-moesin荧光。结论 成功构建了抑制型pcDNA3/HA-moesin~(T558As remediationA)和激活型pcDNA3/HAmoesin~(T558D)基因突变体；经验证，这两种基因突变体均能促进moesin表达。