目的:胸腺淋巴生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)属于IL-2细胞因子家族,其在IgG4相关性疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)发病机制中的作用尚不清楚。为了明确这一问题,我们研究了 TSLP在IgG4-RD中的表达以及免疫学作用。方法:我们募集了 71个IgG4-RD患者,以及41个健康志愿者(healthy control,HC)。首先利用Elisa检测患者及HC血浆中TSLP水平,同时采用流式细胞术检测TSLP的两个受体:TSLPR(TSLP receptor)和 IL-7Ra(interleukin 7 receptor a)在外周血淋巴细胞的表达情况。免疫组化检测TSLP在IgG4-RD患者受累组织的表达,免疫荧光检测TSLPR与免疫细胞共定位关系。TSLP刺激CD19+B细胞5天,流式细胞术检测B细胞增殖、凋亡、分化情况,TSLP刺激B细胞7天,Elisa检测B细胞培养上清中IgG、IgG4和IgE抗体分泌情况;TSLP刺激CD19+B细胞3天,将B细胞与naive CD4+T细胞进行共培养5天,流式细胞术检测na?ve CD4+T的分化情况。利用Transwell和功能抑制实验,探索Tgenetic mappingSLP刺激后B细胞与naive CD4+T细胞作用的机制。转录组测序技术(RNA-sequencing,RNA-seq)筛选TSLP活化B细胞的差异性表达的基因和激活的信号通路,并用免疫印迹法(Western Blot,WB)进行验证。对LatY136F knock-in鼠进行TSLP单抗治疗,苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)评估小鼠受累器官炎症浸润程度,利用Masson染色评估受累器官纤维化程度。结果:IgG4-RD患者血浆中TSLP水平较HC显著升高,并与血清IgG抗体、IgG1抗体、IgG4抗体、IgE抗体以及疾病活动度RI(responder index,RI)等呈正相关关系。TSLPR在IgG4-RD患者外周血CD4+T细胞和CD19+B细胞中表达升高;TSLP在IgG4-RD患者颌下腺组织中表达升高,且TSLPR和CD19+B细胞具有明显的共定位关系。TSLP可直接促进B细胞的增殖,以及浆母细胞分化,TSLP能促进IgG4-RD患者B细胞分泌IgG4抗体。TSLP刺激后的B细胞通过上调共刺激分子OX40L 诱导 Tfh(follicular helper T cell,Tfh)分化。RNA-seq 提示 TSLP 可活化 B细胞JAK-STAT通路,并通过Western Blot进行了验证。IgG4-RD患者CD19+B细胞JAK2和Stat3磷酸化水平较HC B细胞显著升高。TSLP单抗治疗能显著减轻IgG4-RD模型鼠肺脏组织炎症细胞浸润比例,但对纤维化无明显影响。结论:TSLP在IgG4-RD患者血浆和受累组织中表达升高;TSLP能促进B细胞增殖,活化B细胞JAK-STAT通路;TSLP刺激后的B细胞通过上调OX40L诱导na?ve CD4+T细胞向Tfh分化;TSLP单抗治疗可显著减轻模型鼠肺CSF-1R抑制剂脏组织炎症浸润比例,TSLP可作为IgG4-RD潜在的治疗靶点。目的:为了明确CD8+T细胞在IgG4相关性疾病(IgG4-RD)中的表达以及功能。方法:首先利用流式细胞术检测IgG4-RD患者和健康对照(healthy control,HC)外周血中CD8+T细胞和NK细胞的比例以及分泌IFN-γ、TNF-a、颗粒酶B(granzyme B,GZMB)和穿孔素(ferforin 1,PFN1)的功能。同时,利用免疫组化及免疫蛋白电泳(Western Blot)的方式检测了 IgG4-RD患者颌下腺以及慢性颌下腺炎患者颌下腺组织中GSDM(gasdermin,GSDM)相关蛋白的表达情况。将磁珠分选的CD8+T细胞或NK细胞与上皮细胞系共培养6小时,检测上清中LDH的分泌,流式细胞术检测上皮细胞凋亡,Western Blot检测上皮细胞GSDME的剪切体;进一步将CD8+T细胞分泌的上清与上皮细胞系共培养16小时,检测培养上清中LDH分泌,流式细胞术检测上皮细胞凋亡,Western Blot检测上皮细胞GSDME剪切体。在刺激CD8+T细胞的体系中加入IFN-γ、TNF-a、GZMB的抑制性抗体,检测对上皮细胞凋亡和分泌LDH的影响。将上皮细胞发生焦亡后的上清,刺激成纤维细胞3天,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测成纤维细胞胶原相关基因的表达。流式细胞术检测LatY136F knock-in鼠和野生型(wild type,WT)小鼠脾脏、肝脏、肺脏CD8+T细胞和NK细胞的表达、活化和分泌功能。结果:对比HC,IgG4-RD患者外周血中CD8+T细胞比例无明显改变,但CD8+T细胞分泌IFN-γ、TNF-a、GZMB的功能显著升高;而IgG4-RD患者NK细胞的比例和分泌功能与HC对比无明显差异。免疫组化显示,IgG4-RD患者颌下腺组织中CD8+T细胞浸润显著增多;Western Blot显示IgG4-RD患者颌下腺组织中GSDME的剪切体表达较对照组升高,而全长表达无差异。CD8+T细胞可显著促进颌下腺上皮细胞系以及胰腺上皮细胞系分泌LDH、发生凋亡和GSDME的剪切;CD8+T细胞分泌的上清也能促进颌下腺上皮细胞系以及胰腺上皮细胞系分泌LDH、发生凋亡和GSDME的剪切,并且IgG4-RD患者CD8+T细胞分泌上清促进颌下腺上皮细胞系分泌LDH以及凋亡的功能较HC更强。功能抑制实验提示,阻断IFN-γ能显著降低CD8+T细胞上清诱导的颌下腺上皮LDH的分泌和凋亡水平。上皮细胞发生焦亡后的上清,能显著上调成纤维细胞COL1A1、ACTA2基因的表达。LatY136F knock-in鼠与WT鼠相比,受累器官中CD8+T细胞比例降低,但表达活化分子CD69比例升高以及分泌TNF-a、GZMA、GZMB的Apoptosis抑制剂功能显著升高。结论:IgG4-RD患者外周血CD8+T细胞分泌IFN-γ、TNF-a、GZMB的功能增强,CD8+T细胞、GSDME-N在IgG4-RD患者颌下腺组织中表达升高。CD8+T细胞及上清可促进上皮细胞发生焦亡,功能性抑制CD8+T细胞分泌上清中的IFN-γ,可显著减轻上皮细胞LDH的分泌和凋亡水平。上皮细胞发生焦亡后的上清,能显著促进成纤维细胞胶原相关基因的表达。